본 연구에서 L. crispatus KLB46을 저온 전처리함으로서 제제화 과정에 받게 되는 얼림과 녹임, 건조 스트레스뿐만 아니라, 여러 다른 환경 스트레스에 대한 내성이 증진된다는 것을 확인하였다. 그리고 내성 증진에 신규 단백질 합성이 필요함을 확인하였으며 나아가, 저온 충격 유전자 (csp)를 확인하였다. 따라서 이 균주를 제제화 하기 위한 방법으로 저온 전처리를 이용할 경우 생균력 유지에 큰 효과를 얻을 수 있다고 사료된다.
Seul-Gi Jeong;In Seong Choi;Ho Myeong Kim;Ji Yoon Chang;Hae Woong Park
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제32권12호
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pp.1599-1604
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2022
Storage stability of freeze-dried lactic acid bacteria is a critical factor for their cost-effectiveness. Long-term storage of lactic acid bacteria enables microbial industry to reduce distribution costs. Herein, we investigated the effect of cold adaptation under supercooling conditions at -5℃ on the viability of Leuconostoc mesenteroides WiKim32 during the freeze-drying process and subsequent storage. Cold adaptation increased the thickness of exopolysaccharides (EPS) and improved the viability of freeze-dried Leu. mesenteroides WiKim32. Compared to non-adapted cells, cold-adapted cells showed a 35.4% increase in EPS thickness under supercooling conditions. The viability of EPS-hydrolyzed cells was lower than that of untreated cells, implying that EPS plays a role in protection during the freeze-drying process. Cold adaptation increased the storage stability of freeze-dried Leu. mesenteroides WiKim32. Fifty-six days after storage, the highest viability (71.3%) was achieved with cold adaptation at -5℃. When EPS-containing broth was added prior to the freeze-drying process, the viability further increased to 82.7%. These results imply that cold adaptation by supercooling pretreatment would be a good strategy for the long-term storage of Leu. mesenteroides WiKim32.
Nugroho, Wahyu Sri Kunto;Kim, Dong-Woo;Han, Jong-Cheol;Hur, Young Baek;Nam, Soo-Wan;Kim, Hak Jun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권12호
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pp.2087-2097
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2016
Most cold-adapted enzymes possess higher $K_m$ and $k_{cat}$ values than those of their mesophilic counterparts to maximize the reaction rate. This characteristic is often ascribed to a high structural flexibility and improved dynamics in the active site. However, this may be less convincing to cold-adapted metabolic enzymes, which work at substrate concentrations near $K_m$. In this respect, cold adaptation of a shikimate kinase (SK) in the shikimate pathway from psychrophilic Colwellia psychrerythraea (CpSK) was characterized by comparing it with a mesophilic Escherichia coli homolog (EcSK). The optimum temperatures for CpSK and EcSK activity were approximately $30^{\circ}C$ and $40^{\circ}C$, respectively. The melting points were $33^{\circ}C$ and $45^{\circ}C$ for CpSK and EcSK, respectively. The ${\Delta}G_{H_2O}$ (denaturation in the absence of denaturing agent) values were 3.94 and 5.74 kcal/mol for CpSK and EcSK, respectively. These results indicated that CpSK was a cold-adapted enzyme. However, contrary to typical kinetic data, CpSK had a lower $K_m$ for its substrate shikimate than most mesophilic SKs, and the $k_{cat}$ was not increased. This observation suggested that CpSK may have evolved to exhibit increased substrate affinity at low intracellular concentrations of shikimate in the cold environment. Sequence analysis and homology modeling also showed that some important salt bridges were lost in CpSK, and higher Arg residues around critical Arg 140 seemed to increase flexibility for catalysis. Taken together, these data demonstrate that CpSK exhibits characteristics of cold adaptation with unusual kinetic parameters, which may provide important insights into the cold adaptation of metabolic enzymes.
Bradyrhizobium japonicum 은 콩과 식물의 뿌리에 감염하여 뿌리흑을 형성 질소를 고정하는 독특한 능력을 갖는 토양 세균이며 미생물 비료제로 사용되고 있다. 본 연구에서는 저온에서 전처리한 B . japonicum 균주를 여러 가지 환경스트레스 조건에 노출하였을 때 생균수의 변화를 확인하였다. 저온 전처리는 16시간 동안 $4^{\circ}C$의 조건을 유지했다. 다양한 스트레스(알콜, 과산화수소, 고온, 건조)에 노출하였을 때, 저온 전처리한 것이 그렇지 않는 것보다 10~1,000배 정도 높은 생균수를 유지하였다. 이러한 내성중진 현상에 전처리 동안 새로운 단백질 합성이 수반되는 것을 단백질 합성 저해제 인 chloramphenicol을 전처리 과정에 포함하여 확인하였다. 저온 스트레스 내성에 관여하는 유전자를 B. japonicum genome 으로부터 중폭하였고 염기서열 분석을 실시하였다. 실험에서 확인된 B . japonicum의 CSP (Cold shock protein) 단백질의 부분적 아미노산 서열은 이미 확인된 다른 균주의 Csp 단백질과 유사함을 확인하였다.
Psychrophiles have evolved to produce cold-adapted enzymes to enable survival in low-temperature environments. In this study, the cold adaptation of 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (CpsEPSPS) from Colwellia psychrerythraea, a model psychrophile, was analyzed. The optimum temperature for the activity of CpsEPSPS was found to be 25℃, with 35% activity remaining at 5℃. However, the unfolding temperature of CpsEPSPS was 54℃. This phenomenon is frequently observed in cold-active enzymes. As is the cases for most cold-active enzymes, the Km values of CpsEPSPS for its substrates were higher than those of Escherichia coli EPSPS. These results indicate that CpsEPSPS is cold-adapted, but not perfectly.
This study investigates gender differences in cold perceptions and wearing behaviors for cold adaptation. A questionnaire composed of items on cold perceptions, intentions toward wearing additional clothing, and clothing for outdoor environments, among others, was used. Each item in the survey targeted 260 male (MS) and female (FS) college students evaluated using a five-point Likert-type scale. Data were statistically analyzed using the independent sample t-test and correlations. Main results can be summarized as follows: MS subjects showed lower dependence on the thermal insulation of clothing because they felt less cold and had the better ability to cope with cold. MS subjects had higher dependence on underwear during cold seasons, and FS subjects tended to wear heavier clothing to compensate for their cold feet with insufficient insulation. In addition, it was preferable to estimate thermal effects of actual wear by taking into account gender differences in the physique. The study is limited in that the room temperature and the actual amount of clothing were not measured, which offers an avenue for future research.
The survival strategies of polar organisms at permanently or extremely cold temperatures and their application to cryobiology were reviewed here. In addition, ongoing studies on psychrophiles also were described. Psychrophiles are extremophiles that can grow and reproduce in cold temperatures, typically at -10 to $20^{\circ}C$. These organisms developed various mechanisms of adaptation to extremely cold environments. Polar organisms cope with these extreme physicochemical conditions using strategies such as avoidance, protection and partnership with other organisms. Understanding on the strategies adopted by polar organisms may provide insight on the physiological process that cells can go through during freezing. Cryopreservation may be able to take advantage of the findings described above. Currently, genomes of many cold-loving organisms have been sequenced and comparative genomics has revealed, at a molecular level, the characteristics of these organisms. The investigation of microorganisms on the polar glaciers may expand our understanding on the origin of life on Earth and other planets.
This study was carried out to investigate the effect of clothing habit on physiological adaptation to the change of season. The survey of clothing weight in fall '||'&'||' winter for 2 years, the frequency of cold infection in winter and degree of fatigue was performed with 110 female high school students. The actual condition of clothing and the correlations between clothing weight and cold infection, and between the clothing weight and degree of fatigue were suveyed. The results are followed as; 1. The clothing insulation was nearly same to indoor standard clothing insulation in H hun wearing normal clothing, but was higher 2 clo in S hun clothed uniform. Especially in spite of similar enviromental condition the clothing weight, minimum '||'&'||' maximum and variation of clothing weight for 2 years were showed to be heavier in S hun than H hun. Also indoor thermal sensation felt by the subjects indicated "cold", and the difference between clothing insulation and standard clothing insulation showed increase gradually. 2. L group was indicated to be lower in cold infaction ratio than M '||'&'||' H group, and the correlation between clothing group and cold infection ratio was recognized to be significant (p<0.05). And H hun and L-H group showed to be lower in cold infection ratio than S hun, H-L group. 3. The coefficience between clothing weight and degree of fatigue was recognized to be significant (p<0.05).
Organisms living in the Arctic and Antarctic regions are exposed to strong constraints, of which temperature is a driving factor. Evolution has led to special adaptations, some with important implications at the biochemical, physiological, and molecular levels. The northern and southern polar oceans have very different characteristics. Tectonic and oceanographic events have played a key role in delimiting the two polar ecosystems and influencing evolution. Antarctica has been isolated and cold longer than the Arctic; its ice sheet developed at least 10 million years earlier. As an intermediate system, the Arctic is a connection between the more extreme, simpler Antarctic system and the very complex temperate and tropical systems. By studying the molecular bases of cold adaptation in polar fish, and taking advantage of the information available on hemoglobin structure and function, we analysed the evolutionary history of the ${\alpha}\;and\;{\beta}globins$ of Antarctic and Arctic hemoglobin using the molecular clock hypothesis as a basis for reconstructing the phylogenetic relationships among species.
본 연구에서는 L. fermentum KLB12을 열 전처리 함으로서 제제화 과정 동안 거치게 되는 열 스트레스에 대한 내성이 증진됨을 확인하고, 최적의 열 전처리 조건을 수행하였다. 또한 열 전처리 뿐만 아니라, 저온과 열 전처리 조건에도 열 스트레스에 대한 간섭 효과를 확인하였다. 그리고 내성 증진에 신규 단백질 합성이 필요함을 확인하였으며 나아가, 2-D electrophoresis를 통하여 7개의 신규 단백질을 확인하였다. 따라서 이 균주를 제제화하기 위한 방법으로 열 전처리를 이용할 경우 생균력 유지에 큰 효과를 얻을 수 있다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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