E.faecium MJ-14가 생산하는 박테리오신 30 BU/ML 처리에 의해 L. monocytogepes 균수는 0.6 log unit 감소 되었으나, 박테리오신 (30 BU/mL $65^{\circ}C$, 5분간 가열처리와 병용한 경우에는 약 2.7 log unit가 감소하였다. 박테리오신 30 BU/mL와 itric acid혹은 acetic acid $0.5\%$를 병용 처리한 경우에는 24시간 만에 초기균수가 각각 약 2 log unit와 3 log unit감소하였다. 박테리오신 30 BU/mL와 NaCl $8\%$를 병용 처리했을 때에는 박테리오신 단독 처리구보다 약 1 log unit더 감소되었다. 또한, 박테리오신 30 BU/mL단독 처리했을 때에 비해 sodium benzoate $500{\mu}g/mL$혹은 sodium lactate $1000{\mu}g/mL$와 각각 병용 처리하면 2 log unit가 더 감소되었으며, sodium nitrate $100{\mu}g/mL$와 potassium nitrate $100{\mu}g/mL$와의 병용 처리한 경우 박테리오신 단독 처리구에 비해 각각 3.5 log unit와 2 log unit이상 더 감소하였다. 한편, 탈지유에 E. faecium MJ-14의 박테리오신 300 BU/mL을 첨가한 경우 $4^{\circ}C$에서 24시간 만에 L. monocytogenes의 균수는 대조구에 비해 각각 약 1.5 log unit감소되었으며,돈육에 첨가한 경우 $-20^{\circ}C$에서 7일간 만에 대조구보다 약 2 log unit의 감소효과가 나타났다.
강낭콩 현탁 배양세포로부터 얻어진 효소원을 이용한 효소 변환 실험을 통하여 동 세포내에 cholesterol$\to$cholestanol과 6-deoxo-28-norteasterone$\leftrightarrow$ 6-deoxo-28-nor-3-dehydroteasterone $\leftrightarrow$ 6-deoxo-28-nortyphasterol$\to$6-deoxo-28-norcastasterone$\to$28-norcastasterone의 생합성과정이 존재함을 확인하였다. 이 결과는 비록 cholestanol에서 6-deoxo-28-norcathasterone을 경유하여 6-deoxo-28-norteasterone로의 변환은 확인하지 못하였지만 동 세포에는 cholesterol에서부터 6-deoxo-28-nor형 brassinosteroids를 경유하여 28-norcastasterone을 생합성하는 모든 효소들이 포함되어 있음을 시사하는 것으로서, 동 세포에는 상기의 생합성과정, 즉 $C_{27}$ brassinosteroids의 the late C-6 oxidation 과정이 작용하고 있음을 나타내는 결과라 하겠다. 또한 얻어진 효소원은 5-adenosyl-methionine과 NADPH의 존재 하에 28-norcastasterone을 castasterone으로 변환시켜, 강낭콩세포내의 $C_{28}$ 활성형 brassinosteroid인 castasterone의 생합성에 $C_{27}$ brassinosteroids 생합성과정이 중요한 경로중 하나임을 알 수 있었다. 이러한 결과들은 이미 본 연구실에서 밝힌 토마토에 있어 $C_{27}$ brassinosteroids 생합성과정이 토마토의 활성형 brassinosteroid인 castasterone의 함량조절에 관여한다는 결과와 함께 토마토 이외의 식물들에 있어서도 $C_{27}$ brassinosteroids 생합성에 의한 활성형 $C_{28}$ brassino-steroid(s)의 함량조절에 일어나고 있음을 처음으로 밝힌 중요한 결과라 하겠다.
Filter elution 방법으로 EL 4백서 백혈병 세포 및 C57BL/6백서 유래의 비장 임파구에 대한 Co-60 $\gamma$ 선의 DNA single-strand breaks (SSB) 효과를 정량적으로 측정하였다. 임파구는 [${^3}H$]thymidine을 표지하기 위하여lipopolysaccharide (LPS, 20 $\mug/ml$)를 첨가하여 자극하고 부유 상태의 EL 4 세포 및 임파구를 $0^{\circ}C$에서 0 Gy, 1 Gy, 5 Gy, 10 Gy 또는 15 Gy조사하였으며, elution용액의 pH는 12.1로 하였다. $\gamma$ 선 조사에 따른 single-strand breaks의 수는 방사선 조사량에 따라 증가 하였으며 21 ml elution 양을 기준으로 한 strand scission factor (SSF)는 EL 4 세포에서 $0.01301\pm0.00096\;Gy^{-1}(n=5)$이었고, 임파구는 $0.01097\pm0.00091\;Gy^{-1}(n=5)$를 나타내므로 본 실험에서는 EL 4 세포가 정상 임파구에 비하여 방사선에 의한 DNA SSB가 민감함을 알 수 있었다(p<0.005). 본 연구 결과 DNA strand breaks의 측정법을 이용하여 방사선의 특성 및 생물학적 효과의 파악은 물론 나아가 기존의 방호제 및 새로운 약제의 DNA에 대한 효과를 판별할 수 있을 것이다.
To produce reconstituted rabbit embryos with fetal fibroblasts, the present study was evaluated the efficiencies of the different fusion and activation conditions as assessments of subsequent development and chromosome in the embryos. New Zealand White rabbits were used throughout the study. Fetal fibroblasts collected from 22-d of fetuses were cultured in DMEM + 10% FBS in 5% $CO_2$ in air. The culture was maintained for 10 passages. In every passage half of cell suspension were kept In frozen. From rabbits treated with FSH in 30% PVP solution and hCG, oocytes were surgically collected from oviducts at 14 h post-hCG injection and stripped off their cumulus cells by re-pipetting in a 300 IU hyaluronidase solution. Oocytes with an extruded first polar body and dense cytoplasm were enucleated by micromanipulation in Ham's F-10 medium+7.5 g/$m\ell$ cytochalasin B. Euncleation was confirmed under a fluorescence microscope after staining with 5 g/$m\ell$ bisbenzimide for 2 min. Each enucleated oocyte was injected with a fetal fibroblast into a perivitelline space. Reconstructed eggs were compared fusion rates either at 2.0 ㎸/cm or 1.6 ㎸/cm(60 sec, double pulses). After fusion, all eggs were activated with the combination of 5 M ionomycin (5 min) and 10 g/$m\ell$ cycloheximide (CHX, 3h), and cultured in CRlaa medium and transferred into TCM199+10% FBS on day 3. Although there was not significantly differ in fusion rate between treatments (60%, 2.0 ㎸/cm vs. 79.4%, 1.6 ㎸/cm), none of them in the eggs fused with 2.0 ㎸/cm developed to blastocyst. In comparison of development and chromosome status between different activation treatments (Group 1; 5 M ionomycin/10 g/$m\ell$ CHX, Group 2; 5 M ionomycin/5 g/$m\ell$ CHX + 2 mM DMAP after fusion with 1.6 ㎸/cm), there were not differ in cleavage and development rates (67.3% and 28.9% in Group 1; 67% and 33% in Group 2). All out of 8 embryos evaluated in Group 1 appeared a normal diploid chromosome sets and mean number of cells (Mean SEM) on day 4.5 of culture was 141.5 23.15 (n=8). It can be concluded that the use of cycloheximide has not happened in chromosome abnormalities, and fetal fibroblasts can be used for cloning in rabbit.
복숭아 미이라 과일로부터 복숭아 잿빛무늬병 Monilinia fructicola에 대하여 강한 항균활성을 보이는 방선균 Streptomyces padanus TH04를 분리하였다. TH04 균주의 배양 추출물 1%를 함유한 배지에서의 균사생육 및 포자발아는 시험한 M. fructicola의 strain에 따라 각각 $79.8{\sim}81%$와 $73.9{\sim}75.8%$ 억제되었다. 병원균과 TH04 균주 초기접종 밀도를 0.01%, 0.1% 및 1%로 달리하여 동시배양 한 결과, 항균활성은 선발 방선균의 밀도에 따라 $7.5%{\sim}94%$로 나타났다. 사과(품종; 후지)를 이용한 조추출물의 항균활성은 0.1% 처리구 85.9%, 1%처리구 100%로 나타났다. 항균활성 물질 생산, 안정성 및 제형화에 관한 연구가 이루어질 경우 선발한 Streptomyces padanus TH04는 생물학적 방제제로의 개발 가능성 있을 것으로 생각된다.
For the purpose of stydying the pharmacodynamic action of methemoglobin, the author made the following experiments: 1. Preparation of hemoglobin and methemoglobin solutions: Red cell suspension from rabbit blood was hemolysed with distilled water and then divided into two portions. One portion was dialysed through cellophane paper and made isotonic with the proper amount of sodium chloride. The second portion was treated with sodium nitrite to convert hemoglobin to methemoglobin, dialysed through cellophane paper and made isotonic. 2. The concentration of methemoglobin in solution, plasma and urine was determined by Horecker and Brackette's method, and that of hemoglobin by the cyanmethemoglobin method. 3. The concentration of methemoglobin and hemoglobin in the plasma and urine of rabbits was measured at several intervals of time after infusion of the above samples. 4. The blood pressure and respiration of rabbits were recorded on a kymograph, and the effects of the samples on them were observed. 5. The effects of the samples on the movements of the in-situ heart and the isolated intestine of rabbits were studied. 6. The kidneys of rabbits were excised 4 to 5 hours after injection of the samples, and histopathological examinations were made. These experiments revealed the following results: 1. When methemoglobin solution was allowed to stand in room air, there was no decrease in the concentration of methemoglobin. 2. When methemoglobin solution was mixed with whole blood and incubated at $37^{\circ}C$, the concentration of methemoglobin decteased gradually. 3. After the infusion of methemoglobin and hemoglobin solutions, the rate of disappearance of methemoglobin in the plasma was more rapid than that of hemoglobin in the plasma. The higher the initial concentration in the plasma, the larger was the rate of disappearance of methemoglobin. 4. The rate of disappearance of methemoglobin was exceedingly rapid for 30 minutes after the infusion. 5. The urinary excretion of methemoglobin was more rapid than that of hemoglobin. 6. It would seem that the circulating blood contains substances which are promptly mobilized in the plasma to reduce methemoglobin to hemoglobin. 7. Moderate amounts of methemoglobin solution caused some rise in the blood pressure and a transient acceleration of the respiration of the rabbits. These effects of methemoglobin were milder than those of hemoglobin. 8. The movements of the in-situ heart and the isolated intestine of rabbits were accelerated by methemoglobin. These accelerating effects were milder than those of hemoglobin. 9. In the kidneys of rabbits treated with methemoglobin solution, hyperemia of the glomeruli, cloudy swelling and hemoglobin deposit in the tubular epithelium, hemoglobin casts in the tubular lumina of the proximal tubules, and interstitial congestion were constantly observed. There was no definite difference between the histological findings in the rabbit kidneys injected with methemoglobin, and those injected with hemoglobin solutions.
Naegleria fowleri로 면역된 마우스 비장세포를 이입(이입)함으로써 원발성 아메바성 수막 뇌염의 발생을 방어할 수 있는지 즉 방어면역을 피동적으로 전달할 수 있는지를 관찰하였다. 무균 배양한 N. fowleri, ITMAP 359 영 양형 7×l04개를 생후 6주된 ICR 마우스에 감염시켰다. 살아있는 N. fowleri 영양형 106개씩을 1주일 간격으로 3회 복강내로 주입시켜 면역시켰다. 면역시킨 마우스의 비장을 적출하여 107개의 비장세포가 함유된 부유액을 마우스 복강내로 주입시키고 3일 후 N, fowleri를 감염시켰다. 비장세포에 Con. A와 lipopolysaccharide(LPS)를 처리한 후 배자발생 정도를 methyl-[3H]-thymidine을 사용하여 측정하였다. N. fowleri를 감염시킨 마우스의 사망률을 보면 정상 비장세포를 주입시킨 실험대조군에서 84%, 면역 비장세포를 주입시킨 실험군에서 72%로서, 정상 대조군에서의 사망률 100%에 비해 낮음을 알 수 있었다. 면역된 비장세포를 주입시킨 실험군에서 LPS를 처리한 비장세포의 배자발생정도는 감염 7일 후 실험대조군이나 정상대조군에 비해 증가되어 있었고, Con. A처리에 의한 배자발생 정도도 감염 7일 후 증가되어 있음을 관찰할 수 있었다. 혈청내 항체가는 감염 12일 후 정상 대조군에 비해 실험군과 실험대조군에서 높았다.
지리오가피의 체세포배로부터 식물체재생을 위한 효율적인 방법을 개발하였다. 체세포배의 형태형성에 미치는 식물생장 조절물질의 영향을 조사하고자, 접합자 배 유래의 배발생 세포를 MS배지에 현탁배양하고, 이로부터 얻어진 자엽시기의 배를 배양접시에서 건조처리 (0∼72 h)한 후, NAA, BA, GA$_3$(0∼0.5mg/L)가 첨가된 MS배지에 배양하였다. 그 결과, 체세포배를 72시간 동안 배양접시에서 건조처리 후에 0.5mg/L NAA, 0.5mg/L BA 또는 0.5mg/L NAA, 0.5mg/L BA 0.5mg/L GA$_3$가 첨가된 MS배지에 6주간 배양하였을 때, multiple shoot가 100%로서 가장 높게 유도됨을 관찰 할 수 있었다. 가장 높은 식물체의 재생율 (29.1%)은 체세포배를 72시간 건조처리 후에,0.1mg/L NAA, 0.1mg/L BA그리고 0.1mg/L GA$_3$가 첨가된 MS배지에 6주간 이식한 후, 이를 다시 1.0mg/L GA$_3$가 첨가된 1/3MS배지에 6주간 배양하였을 때 이루어졌다. 유식물체를 vermiculite와 sand가 1:1로 첨가된 plastic pot 이식하였을 때 생존율은 약 70%로서 나타났다 이상의 결과는 지리오가피의 계량생산에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
본 연구는 낙엽송 배발생세포의 배양기간에 따른 현탁세포의 생장, 체세포배 유도 및 발아를 위한 다양한 삼투압제 종류 및 농도 효과를 조사하기 위해 수행되었다. 배발생 현탁세포의 생장은 배양일수가 증가함에 따라 settled cells volume (SCV)가 지속적으로 증가하는 경향을 보여 배양 18일 경에는 최대 10.1 ml의 SCV를 보였고, 그 이후로는 세포생장이 감소하였다. 현탁세포로부터 체세포배 발생을 위한 삼투압제 종류 및 농도에 따른 효과 비교에서 최대의 체세포배 유도 수는 0.2 M sucrose 처리구에서 352.3개(/g FW)로 나타났으며, 0.2 M maltose (203.7) 및 0.3 M maltose (193.7) 처리구에서 또한 효과가 있었다. 그러나 7.5% polyethylene glycol (PEG)이 첨가된 0.15 M sucrose 혹은 maltose 각각의 처리구에서는 체세포배 발생이 전혀 이루어지지 않았다. 다양한 삼투압제 종류 및 농도에서 발생된 체세포배의 발아율 비교에서는 최대 자엽 형성율(25.2%) 0.3 M maltose, 하배축 형성률(39%), 뿌리 발생율(30.3%) 및 식물체 재분화율(3.5%)은 0.2 M sucrose 처리구에서 각각 나타났다.
400여 벼 품종(品種)과 다수의 잡초종들로 부터 oxyfluorfen에 대하여 내성(耐性) 및 감수성(感受性)으로 선발된 벼 7품종(品種)과 피를 공시하여 이들의 oxyfluorfen에 대한 유묘(幼苗), callus, 단세포(單細包) 및 원형질체(原形質體)의 반응 결과를 체계적으로 비교함으로써 내성(耐性) 및 감수성(感受性)요인의 소재와 분포현상을 파악하고저 하였다. 1. Oxyfluorfen 에 대한 기(旣) 선발 벼품종(品種) 및 피의 $I_{50}$ 검정결과는 기(旣) 선발기준과 유사하게 확인되었다. 즉 내성(耐性) 벼품종(品種)의 $I_{50}$은 $10^{-4}M$ 전후(前後)였고, 감수성(感受性) 벼품종(品種)과 피는 $10^{-6}M$ 전후(前後)로 유의적 차이를 보였다. 2. 내성(耐性) 및 감수성(感受性) 식물들에서 유기(誘起)한 callus에 oxyfluorfen 처리 후 callus 생장량은 내성(耐性) 벼품종(品種)들에서 감수성(感受性) 벼품종(品種)들과 피보다 많았으나 유묘검정(幼苗檢定) 경우보다 차이는 적어지는 경향이었다. 3. Oxyflurofen 처리후 현탁배양(懸濁培養)의 세포(細包) 생장율(生長率)은 내성(耐性) 벼품종(品種)들이 감수성(感受性) 벼품종(品種)인 HP1033, Weldpally와 피보다 높았다. 4. Oxyfluorfen 처리 1, 2시간 후 원형질체(原形質體)의 viability는 내성(耐性) 벼품종(品種)들이 감수성(感受性) 벼품종(品種) Weldpally와 피에서만 높았을 뿐, 그 밖의 품종(品種)들에서는 차이가 없었다. 그러나 원형질체(原形質體)의 intactness는 내성(耐性) 벼품종(品種)들이 감수성(感受性) 벼품종(品種)들과 피보다 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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