• Journal of Veterinary Clinics
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• v.15 no.2
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• pp.370-377
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• 1998

본 연구는 황색포도상구균의 병원성 인자인 alpha-toxin, casular polysaccharides (CPS)와 fibronectin-binding protein (FnBP)을 이용해 실험동물인 토끼에서의 항체가 형성 능과 공격접종 후 방어능에 관한 연구를 위하여 수행되었으며 향후 젖소 유방염 아단위 항원 을 이용한 백신개발 가능성을 탐색하고자 수행되어졌다. 황색포도상구균의 alpha-toxin, capsu18r polysaccharides (CPS)91 fibronectin-binding protein (FnBP) 항원을 이통재 효소면 역측정법을 통한 혈중 IgG 항체가수준을 측정하였으며 alpha-toxin, capsular polysaccharides (CPS)와 fibronectin-binding protein (FnBP)으로 면역시킨 토끼에서 대조군의 토끼보다 혈 중 항체가 수준이 1차 면역 이후 유의성 있게 높았다 (p<0.05). 백신에 사용된 alpha-toxin, capsular polysaccharides (CPS)와 fibronectin-binding protein (FnBP) 항원중 capsular polysaccharides (CPS)가 다른 alpha toxin과 fibronectin-binding protein (FnBP)의 혈중항 체가 수준과 비교하여 볼 때 비교적 낮은 수준이었다. 세균을 혈중으로 공격접종한 후 대조군 과 백신접종군의 혈중내 세균제거율에 있어 대조군에 비해 백신접종군에서 유의성 있게 낮은 균수를 보였다 (p<0.05). 또한 장기내 균수측정실험결과 대조군의 장기보다 백신접종군에서 유의성 있게 세균수가 낮게 출현하였다 (p<0.05). 결론적으로 본 연구결과 황색포도상구균의 3가지 항훤 alpha-toxin, capsular polysaccharide와 재조합 fibronectin binding protein을 이 퐁한 실험동물에서 안단위 유방염 백신은 방어능이 있다고 생각된다.

• Journal of Veterinary Clinics
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• v.16 no.1
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• pp.26-30
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• 1999

본 연구는 임상형 및 준임상형 유방염에 이환된 젖소의 유즙에서 분리된 24주의 황색포도상구균에 대한 capsular polysaccharide(CP)형을 확인하고, 1% 토끼 혈청이 함유된 serum-soft agar 배지에서 집락의 모양을 관찰하였다. 또한 동물에 따라 우세한 CP형의 차이가 있는지를 비교하고자 개에서 분리된 13주에 대하여 동일한 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 집락모양을 관찰한 결과 젖소 유래 24주 중 16주(66.7%)는 diffuse, 5주(20.8%)는 compact, 나머지 3주(12.5%)는 분류가 불가능(indeterminate)하였다. CP형 확인결과 9주(37.5%)는 type 5, 2주(8.3%)는 type 8, 13주(54.2%)는 분류가 불가능(non-typeable)하였다. 한편, 개에서 분리된 균주 중 1주(type 8)를 제외한 12주(92.3%)는 type 5로 분류되었으며, 13주 중 8주(61.5%)가 diffuse형의 집락을 보였다. 본 실험에 사용한 균주의 수가 충분하지 못한 문제가 있지만 동물에 따라 우세한 CP형이 다를 수 있으며 분류 불가능한 균주가 상대적으로 높은 비율을 차지하였는데 이는 새로운 CP형의 분류형이 필요함을 시사하는 것으로 판단된다. 또한 type 5와 type 8만을 포함한 유방염 백신은 한계가 있을 것으로 사료된다.

• Journal of Veterinary Clinics
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• v.17 no.1
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• pp.145-151
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• 2000

황색포도상구균이 Capsular polysaccharide (CPS)는 백혈구의 탐식에 저항하기 때문에 젖소의 유방염 발생의 중요한 병원상 인자로 오랫동안 연구자들의 관심이 집중되어 왔다. 따라서 CPS는 젖소의 유방염을 최소화시키기 위한 유방염 백신개발에 있어 잠재적인 백신 항원물질로 알려져 왔다. 본 연구의 복적은 황색포도상구균의 CPS 항원물질을 좀더 효과적으로 발현시키고 향후 백신항원으로 사용시 좀 더 간편하게 정제하는 방법을 찾아보고자 본 연구를 수행하였다. CPS는 락토스와 덱스트로스를 첨가한 brain heart infusion media 에서도 부분적으로 발현되었지만 CPS가 가장 잘 발현되는 배지 조건은 젖소 유래의 유청을 10% 첨가한 조건에서 가장 발현율이 높았다. 또한 CPS발현은 salt agglutination test, india ink법 및 투과전자현미경을 이용하여 확인하였으며 균체표면의 hydrophobicity에서는 락토스, 덱스트로스 및 젖소 유래의 유청을 첨가한 배지조건에서 다른 조건에 비해 높았다. CPS의 가장 손쉬운 검사법은 균체를 절편하지 않고 직접 투과전자현미경상에서 염색없이 관찰하는 것이 가장 간편한 방법이었다. CPS정제는 상층액을 농축시킨후 이온교환크로마토그라피와 젤 여과법을 이용하여 정제하였으며 CPS의 분자량은 대부분 97kDa이상이었다. CPS 회수율은 배지와 균체 1리터당 1.5mg이었다. 결론적으로 CPS를 백신항원으로 포함하고자 할 경우, CPS의 최적 발현조건은 젖소 유래의 유청을 10% 첨가한 Brain heart infusion 배지에서 배양하여 사용하는 것이 가장 좋은 방법이라고 생각된다.

• Journal of Veterinary Clinics
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• v.17 no.1
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• pp.152-158
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• 2000

capsular polysaccharide(CPS), alpha toxin과 재조합 fibronectin binding protein (FnBP)으로 구성된 유방염 백신을 개발하여 야외효능실험을 수행하였다. 이 subunit 백신은 비유우 23두와 처녀우 20두를 대상으로 10개월동안 각각 수행되었다. 비유우는 매 3주간격으로 2회 백신접종을 하였으며 대조군은 PBS를 상유방림조절 주위에 피하주사하였다. 처녀우를 대상으로 한 실험에서는 분만 8주전부터 시작하여 매 3주간격으로 2회 비유우 백신접종부위와 동일하게 접종하였다. 접종후 비유우에서는 황색포도상구균에 의한 총유선내 감염율이 대조균에 비해 유의성있게 감소하였으며 (p<0.001) 처녀우에서도 총유선내 감염이 백신 접종균(1.6%)이 대조군(11.7%)에 비해 다음 비유기동안 유의성있게 낮았다. (p<0.001). 비유기동안 백신접종한 젖소의 체세포수는 변화가 없었으며 처녀우에서는 추가접종후 백신접종군에서 대조군의 체세포수에 비해 낮았지만 통계학적으로 유의성은 없었다(p>0.05). 본 실험결과 황색포도구균에 대한 유방염 아단위 백신은 비유우와 처녀우에서 체세포수를 증가시키지 않고 총 유선내 감염율을 낮추어주었다. 하지만 본 실험은 1군데의 목장을 대상으로 하였기 때문에 향후 대규모 목장을 대상으로 하는 유방염 백신의 야외효능실험이 심도있게 이루어져야 한다고 생각된다.

• Biomolecules & Therapeutics
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• v.7 no.3
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• pp.257-262
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• 1999

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is the most frequent causative agent of acute bacterial pneumonia. Outstanding characteristic of pneumococcus is an ample polysaccharide capsule that is highly anti-genic agent and is the major factor for classification of pneumococcus into more than 94 serotypes. In this study, production of capsular polysaccharide from Streptococcus pneumoniae type 23 was optimized by supplementation of metal ions or by modulation of culture conditions. When brain heart infusion (BHI) broth was supplemented with 1 mM concentration of $CaCl_2$, $CuSO_4$ and $MgSO_4$, growth of pneumococcus as well as polysaccharide yield were stimulated. Also slight aeration gave rise to better polysaccharide yield.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• v.22 no.10
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• pp.1336-1342
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• 2012

In Burkholderia pseudomallei, the pathogen that causes melioidosis, the gene cluster encoding the capsular polysaccharide, is located on chromosome 1. Among the 19 capsular genes in this cluster, wzm has not been thoroughly studied. To study the function of wzm, we generated a deletion mutant and compared it with the wild-type strain. The mutant produced less biofilm in minimal media and was more sensitive to desiccation and oxidative stress compared with the wild-type strain, indicating that wzm is involved in biofilm formation and membrane integrity. Scanning electron microscopy showed that the bacterial cells of the mutant strain have more defined surfaces with indentations, whereas cells of the wild-type strain do not.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• v.19 no.11
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• pp.1374-1378
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• 2009

Response surface methodology (RSM) examining the effects of five-level-three-factors and their mutual interactions was utilized to optimize the fermentation conditions to enhance capsular polysaccharide (CPS) production of Streptococcus pneumoniae type 3. Twenty experiments conducted in an 8-l lab-scale fermentor were designed to assess fermentation pH, supplemented glucose concentration, and stirring rate. The predicted highest CPS production by the obtained optimization model equation was 256.14 mg/l at optimal conditions [pH 7.5, stirring rate 180 rpm, and supplemented glucose concentration 1% (w/v)]. The validity of the response model was confirmed by the good agreement between the predicted and experimental results. The maximum amount of CPS obtained was $255.03\pm2.23$ mg/l.

• Archives of Pharmacal Research
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• v.19 no.3
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• pp.173-177
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• 1996

The Pneumococcus, Streptococcus pneumoniae, has an ample polysaccharide (PS) capsule that is highly antigenic and is the main virulence factor of the organism. The capsular PS is the source of PS vaccine. This investigation was undertaken to optimize the culture conditions for the production of capsular PS by type 4 pneumococcus. Among several culture media, brain heart infusion (BHI) and Casitone based medium were found to support luxuriant growth of pneumococcus type 4 at the same level. Therefore in this study, the Casitone based medium was used to study optimization of the culture condition because of BHI broth's high cost and complex nature. The phase of growth which accomodated maximum PS production was exponential phase. Concentrations of glucose greater than 0.8% did not enhance growth or PS production. Substitution of nitrogen sources with other resources or supplementation of various concentrations of metal ion (with the exception of calcium, copper, and magnesium ions) had adverse effects on growth and PS production. On the other hand, low level aeration and supplementation of 3 mg/l concentration of asparagine, phenylalanine, or threonine were beneficial for increased PS production. The synergistic effect of all the favorable conditions observed in pneumococcal growth assays provided a two-fold cumulative increase in capsular PS production.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• v.21 no.7
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• pp.734-738
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• 2011

Streptococcus pneumoniae is a major cause of invasive infection in young infants and older adults. There are currently 90 capsular serotypes identified and 23 serotypes (1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F, and 33F) are responsible for about 90% of invasive disease. Among the more than 90 different S. pneumoniae serotypes, serotype 19A is globally very prevalent. A simplified purification procedure including adjustment of cell lysate pH to 4.5, fractionation with 50. 80% ethanol, and dialysis rendered capsular polysaccharide (CPS) in a yield of $31.32{\pm}3.11$ mg from 1 l culture (75% recovery after lyses). The product contained only 69.6 ${\mu}g$ of protein (99.78% purity) and 0.8mg (sum of the precipitants from 50~60%, 60~70%, and 70~80%) of nucleic acid (97.45% purity). The purified CPS was conjugated with bovine serum albumin; the product size ranged from 100 to 180 kDa.

• Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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• 1996.04a
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• pp.186-186
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• 1996

Streptococcus pneumoniae (pneumococcus), the most common cause of bacterial pneumonia, has an ample polysaccharide(PS) capsule that is highly antigenic and is the source of PS vaccine. This investigation was undertaken to optimize the culture conditions for the production of capsular PS by type 1 pneumococcus. Among several culture media, brain heart infusion (BHI) and Casitone based media were found to support luxuriant growth of pneumococcus type 1 at the same level. Because BHI medium is rather expensive and more complex than the Casitone based media, the Casitone based media was used to study optimization of the culture condition. The phase of growth which accomodated maximum PS production was logarithmic phase. Concentrations of glucose greater than 0.2% did not enhance growth or PS production. Substitution of nitrogen sources with other resources or supplemention of various concentrations of metal ion (with the exception of calcium ion) had adverse effects on growth and PS production. On the other hand, low level aeration was beneficial for increased PS production. Addition of 3 mg/I concentration of methionine, phenylalanine, and threonine were found to enhance growth and PS production. The synergistic effect of all the favorable conditions observed in pneumococcal growth assays provided a two-fold cumulative increase in capsular PS production.