Phenanthrene degrading bacteria were isolated from the petroleum contaminated soil near an oil tank. Four of 15 strains decreased surface tension of culture broth of phenanthrene-containing minimal media. H6, one of the isolated bacteria decreased surface tension of culture broth below 33 dyne/cm during growth on glucose. H6 was identified as Bacillus subtilis and biosurfactant produced by H6 was lipopeptide. The biosurfactant was produced at 0.13 g/L in the mineral medium containing 2% glucose. Critical micelle concentration(CMC) of the biosurfactant was 52 mg/L. Foaming power was similar to Tween 80 and dispersing power was superior to Tween 80m SDS and Brij30. High thermal stability and emulsion index were also observed.
Kim, Jin-Sook;Song, Hee-Sang;Chung, Nam-Hyun;Bang, Won-Gi
Applied Biological Chemistry
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v.48
no.2
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pp.109-114
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2005
A bacterium capable of emulsifying hydrocarbon, n-hexadecane, and decreasing surface tension of the culture media using oil collapsing method was isolated. The bacterium was partially identified as Bacillus sp. and named BJS-51. n-Hexadecane was the most effective carbon source for production of biosurfactant. Surface tension was decreased from 76 dyne/cm to 31 dyne/cm and CMD (critical micelle dilution) had the highest value of 5.7 at 3% n-hexadecane. Ammonium phosphate was the most effective nitrogen source, when C/N ratio was 60, surface tension and CMD were 29 dyne/cm and 9.2, respectively. Optimum pH and temperature were 7.2 and $30^{\circ}C$, respectively. Produced biosurfactant was extracted and purified using organic solvent extraction method and preparative HPLC systems. After analysis by various color reaction, this biosurfactant was identified as lipopolysaccharide. Surface tension and CMC (critical micelle concentration) of purified biosurfactant were 27 dyne/cm and 0.08 g/l, repectively. CMD was 9.2, so the yield of biosurfactant was about 0.74 g/l at the optimal conditions. The biosurfactant was very stable at wide range of $pH\;2{\sim}12$ with surface tension $29{\sim}31\;dyne/cm$ and showed $29{\sim}30\;dyne/cm$ of surface tension after heat treatment at $100^{\circ}C$ for 60 min.
For the biosurfactant production process at first Candida bombicola, Sphingomonas yanoikuyae, Sphingomonas chungbukensis and Myxococcus flavescens were studied. As the most productive microorganisms C. bombicola, S. yanoikuyae and S. chungbukensis were selected. During many petrochemical industrial processes variable volatile organic componds are produced and they can cause an unpleasent and unhealthy atmosphere. Usually the volatile organic compounds are treated with chemical detergents. The chemical detergents cannot be easily degradable and can be accumulated in the nature. In this study we tried to develop a production process for the biosurfactants, which can substitute some chemical detergents in some chemical processes, with microorganisms. At second the treatment of the volatile organic compounds with the biosurfactants were tested and compared with the treatment with chemical detergent. The production productivities of the biosurfactant with microorganisms were compared. The growth patterns and kinetics of the microbial cells and the surface tension values of the biosurfactants were studied. The changes of the surface tension in variable pH conditions and sodium chloride concentrations were also studied. The volatile organic carbons were treated in a small plant scale. As the result of this study, it indicated that the specific growth rate of S. chungbukensis was the fastest by 0.144 ($hr^{-1}$). For surface tension, C. bombicola (38.1 dyne/cm) had the lowest value, and solubility of the volatile organic carbon was similar in C. bombicola and S. chungbukensis. (Toluene: about 0.1 Unit, Chloroform: about 0.6${\sim}$0.7 Unit, Benzene: about 0.5${\sim}$0.8 Unit). The biosurfactant, which were produced by C. bombicola, was selected for the further study for the volatile organic carbon treatment. With the biosurfactans from C. bombicola could remove the volatile organic carbon about 80% and this removal rate can be comparable with chemical detergent.
Microorganisms capable of producing biosurfactant were isolated from oil-contaminated soils and seawater. Among them, the selected strain SW1 was identified as Pseudomonas sp. by taxonomical characteristic tests, and so tentatively named Pseudomonas sp. SWI. The optimal temperature and initial pH for biosurfactant production were TEX>30^{\circ}C.$ and 7.0, respectively. The optimal medium composilion for the production of biosurfactant by Pseudomonas sp. SW1 were hexadecane of 2.0%, yeast extract of 0.04%, $K_{2}HPO_4$ of 0.02%, $KH_2PO_4$ of 0.03% and $MgSO_4$ center dot $7H_2O$ of 0.04%, respectively. Under the above conditions, minimum wrface tension was 32 mN/m after incubation of 2 days. The biosurfactant was produced during initial stationary phase in the optimal medium. Pseudotnonas sp. SWl utilized various hydrocarbons such as Bunker oils, n-alkanes and branched alkanes as a sole carbon source.
The microbial biosurfactants can be substituted to the chemical detergents in some industrial processes. In this study we developed a biotechnological processes for the biosurfactants with microorganisms. The biosurfactants have a lot of advantages in comparision with the chemical surfactants. They are proenvironmental even during and after industrial use. But there are not so many kinds of biosurfactants. The production cost and the end price is much higher than the chemical surfactants. But nowdays there are many kinds of microorganisms, which can produce the surfactants in large quantity and fast. We tried to develop a production process for the large scale with some microorganisms. At first Candida bombicola KCTC 7145, Sphingomonas chungbukensis KCTC 2955 and Sphingomonas yanoikuyae KCTC 2818 are cultivated and studied. For the large scale production process we used molasses as a complex medium and tried to optimize the process. Molasses contains 17 to 25% of water, 45 to 50% of sugar and 25% of carbohydrate, it can be fully used as a substrate. The microorganisms have been cultivated in the diluted media with molasses 2, 5, 8 and 10%, respectively, The optimal conditions for the cultivation and the production process have been studied. For the study the optical density, glucose concentration and the surface tension were measured. Candida bombicola KCTC 7145 and the 5% molasses media was selected as an optimal condition for the production process of a biosurfactant. During cultivation of Candida bombicola KCTC 7145 in the 5% molasses medium kerosene and corn oil were added for promoting the biosurfactants.
Hydrolysis of biomass for the production of fermentable sugar can be improved by the addition of surfactants. In pulp and paper mills, lignin, which is a by-product of the pulping process, can be utilized as a fine chemical. In the hydrolysis process, lignin is one of the major inhibitors of the enzymatic breakdown cellulose into sugar monomer. Therefore, the conversion of lignin into a biosurfactant offers the opportunity to solve the waste problem and improve hydrolysis efficiency. In this study, lignin derivatives, a biosurfactant, was applied to enzymatic hydrolysis of various lignocellulosic biomass. This Biosurfactant can be prepared by reacting lignin with a hydrophilic polymer such as polyethylene glycol diglycidylethers (PEDGE). In this study, the effect of biosurfactants on the enzymatic hydrolysis of pretreated sweet sorghum bagasse (SSB), oil palm empty fruit bunch, and sugarcane trash with different lignin contents was investigated. The results show that lignin derivatives improve the enzymatic hydrolysis of the pretreated biomass with low lignin content, however, it has less influence on the enzymatic hydrolysis of other pretreated biomass with lignin content higher than 10% (w/w). The use of biosurfactant on SSB kraft pulp can increase the sugar yield from 45.57% to 81.49%.
A new bacterial strain, was isolated from activated sludge, identified and named P. aeruginosa EMS1. The new strain produced surface-active rhamnolipids by batch cultivation in mineral salts medium with waste flying oils. The mutant strain KH7, designated P. aeruginosa EMS1, derived by random mutagenesis with N-methyl-N-nitro-N-nitrosogoanidine treatment producing high levels of the biosurfactants was selected by an ion-pair plate assay. The mutant strain KH7 showed 4-5 times more hydrocarbon emulsification as compared to the parent when grown on waste frying oils and various hydrocarbons. Furthermore, P. aeruginosa EMS1 and mutant strain KH7 was also able to use whey as a co-substrate for growth and biosurfactant production. As results of this study, mutant strain KH7 is a very efficient biosurfactant producer, and its culture conditions are relatively inexpensive and economical. Rhamnolipid is synthesized by the rhlAB-encoded rhamnosyltransferase. To be convinced of these genes, we performed PCR based on P. aeruginosa PAO1 whole-genome database. rhl gene cluster nucleotide and amino acid sequences were compared for both parent and mutant. Comparison of nucleotide sequence of rhlAB, there were usually terminal's codons exchange.
The optimal conditions and properties for the immobilization of marine bacterium Pseudomonas aeruginosa BYK-2 have been determined. For the high productioon of biosurfactant, Na-alginate, PVA, modified PVA were used as a carrier. The optimal emulsifying activity on immobilized Pseudomonas aeruginosa BYK-2 showed 1036Unit (about 2.2g/L biosurfactant) in Basal salt medium(B.S.M.) at $25^{\circ}C$, 100rpm. Ca-alginate was selected the optimal bead among PVA, modified PVA and Ca-alginate. The optimal cell load in alginate bead was 10 gCWW/100g carrier. As the results of incubation of immobilized 5g Ca-alginate bead (conditions; 3% alginate, bead diameter: 2.3mm, 10% cell load) in 50m1 production medium, The emulsifying activity of 1407Unit, about 3.0g/L biosurfactant was obtained from immobilized cell after cultivation of 92hr at $25^{\circ}C$, 100rpm.
In order to maximize the cell growth and the biosurfactant production by the Pseudomonas aeruginosa BYK-2(KCTC 18012P), in the fed-batch fermentation processes were performed varying the feeding medium concentrations and the feeding rate. Feel-batch culture was performed with the optimal agitation speed of 200rpm and the aeration rate of 0.67vvm in a 7L Jar fermentor containing 3L of modified medium and 2.0-2.5%(v/v) fish oil as a carbon source. Addition of fish oil(2.5mL/l00mL modified medium), when fish oil was depleted, the cell and biosurfactant concentration were 6.1g/L and 22.7g/L, respectively.
Fifty hydrocarbon-metabolizing microorganisms were isolated from soil samples polluted by the petroleum oils in Gamman-dong, Busan. Among them, strain 2-3A, showing strong emulsification activity, was selected by oil film-collapsing method. This bacterium was identified as Acinetobacter sp. and designated as Acinetobacter sp. 2-3A. The optimum temperature and pH on the growth of Acinetobacter sp. 2-3A were $25^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. The carbon and nitrogen sources for the most effective emulsification activity were 3.0% olive oil and 0.5% peptone, respectively. The 0.15% potassium phosphate was the most effective emulsification activity as a phosphate source. The optimum emulsification activity condition was $20^{\circ}C$, pH 7.0, and 2.0% NaCl. The optimum time for the best production of biosurfactant was 27 hrs. The emulsification stability was maintained at the temperature range from $4^{\circ}C$ to $100^{\circ}C$, pH range from 6.0 to 10.0, and NaCl range from 0% to 10%. For the oil resolvability of the biosurfactant, the residual oils were investigated by gas chromatography. As a result, it was verified that the biosurfactant decreased and decomposed crude oils from $_nC_{10}$ to $_nC_{32}$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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