Kim, K.H.;Lee, G.Y.;Jang, J.C.;Kim, J.E.;Kim, Y.Y.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제26권3호
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pp.386-393
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2013
This experiment was conducted to evaluate anti-Salmonella enteritidis (anti-SE) bacteriophage as feed additives to prevent Salmonella enteritidis in broilers. The experimental diets were formulated for 2 phases feeding trial, and 3 different levels (0.05, 0.1 and 0.2%) of anti-SE bacteriophage were supplemented in basal diet. The basal diet was regarded as the control treatment. A total of 320 1-d-old male broilers (Ross 308) were allotted by randomized complete block (RCB) design in 8 replicates with 10 chicks per pen. All birds were raised on rice hull bedding in ambient controlled environment and free access to feed and water. There were no significant differences in body weight gain, feed intake and feed conversion ratio (FCR) at terminal period among treatments (p>0.05). Relative weights of liver, spleen, abdominal fat and tissue muscle of breast obtained from each anti-SE bacteriophage treatment were similar to control, with a slightly higher value in anti-SE bacteriophage 0.2%. In addition, a numerical difference of glutamic-oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic-pyruvic transaminase (GPT) and LDL cholesterol level was observed in the 0.2% anti-SE bacteriophage application even though blood profiles were not significantly affected by supplemented levels of anti-SE bacteriophage (p>0.05). In the result of a 14 d record after Salmonella enteritidis challenge of 160 birds from 4 previous treatments, mortality was linearly decreased with increasing anti-SE bacteriophage level (p<0.05), and Salmonella enteritidis concentration in the cecum was decreased with increasing levels of anti-SE bacteriophage (p<0.05). Based on the results of this study, it is considered that supplementation of 0.2% anti-SE bacteriophage may not cause any negative effect on growth, meat production, and it reduces mortality after Salmonella enteritidis challenge. These results imply to a possible use of anti-SE bacteriophage as an alternative feed additive instead of antibiotics in broilers diet.
There is an urgent need to identify more reliable indicator systems for human pathogenic viruses in water reuse practice. In this study, we determined the response of different bacteriophages representing various bacteriophage groups to different ultraviolet (UV) technologies in real wastewater in order to identify more reliable bacteriophage indicator systems for UV disinfection in wastewater. Bacteriophage ${\varphi}X174$ PRD1, and MS2 in two different real wastewaters were irradiated with several doses of both low pressure (LP) and medium pressure (MP) UV irradiation through bench-scale UV collimated apparatus. The inactivation rate of ${\varphi}X174$ by both LP and MP UV was rapid and reached ${\sim}4{\log}_{10}$ within a UV dose of $20mJ/cm^2$. However, the inactivation rates of bacteriophage PRD1 and MS2 were much slower than the one for ${\varphi}X174$ and only ${\sim}1{\log}_{10}$ inactivation was achieved by the same UV dose of $20mJ/cm^2$. Overall, the results of this study suggest that bacteriophage MS2 could be a reliable indicator for human pathogenic viruses for both LP and MP UV disinfection in wastewater treatment processes and water reuse practice.
A total of 720 1-d-old male broilers (Arbor Acres) with the initial BW = $45{\pm}2$ g were used in a 32-d experiment. Birds were randomly allotted into 1 of 4 treatments according to a completely random block design. Dietary treatments included: i) CON (basal diet), ii) ANT (CON+0.5 g antibiotics/kg feed (bacitracin methylene disalicylate)), iii) BP1 (CON+0.25 bacteriophage/kg feed), and iv) BP2 (CON+0.5 g bacteriophage/kg feed). The BWG and FI were not affected by dietary treatments throughout the whole experiment, whereas BP2 treatment reduced (p<0.05) the feed conversion ratio compared with the CON treatment during 0 to 14 d. The birds fed bacteriophages at the level of 0.25 g/kg increased (p<0.05) the relative liver weight. The inclusion of antibiotic and bacteriophage significantly reduced (p<0.05) the Escherichia coli and Salmonella concentration in the excreta compared with the NC group. Broilers fed the BP2 treatment had higher (p<0.05) lactobacillus counts compared with those fed NC and PC treatments. In conclusion, dietary supplementation of 0.5 g/kg bacteriophages increased feed efficiency and liver weight without effects on the breast muscle properties; also pathogens were inhibited by addition of bacteriophages.
Bacteriophage의 분류는 여러 가지 기준에 의해 수행될 수 있으나 본 연구에서는 L. casei bacterio-phage를 분류하기 위하여 3가지의 분류 기준이 사용되었다. 혈청학적 분류에서는 토끼에서 제조된 항혈청이 사용되었으며 항혈청에 의한 phage의 중화 효과는 대수적이었다. L. casei phage는 항혈청에 의한 중화률에 따라 3가지로 분류되었다. 여기서 Lac Y group은 새로운 종류임이 밝혀졌으며 Lac J 및 Lac S group은 지금까지의 보고와 동일한 결과를 보여주었다. 제한효소에 의한 phage DNA 절편의 비교에 의하여 Lac J group은 4종류의 subgroup으로 나누어졌으며, 숙주역의 차이에 의해서 Lac J-II group은 다시 3group으로 세분화되었다. 이러한 결과를 종합하면 L. casei S-1주의 bacte-riophage는 총 8종류로 나누어 질 수 있었다. 새로 분류된 Lac Y group의 YK phage는 직경이 95nm 정도의 icosahedral head와 길이 150nm, 넓이 20nm정도의 수축성 꼬리로 구성되어 있고 끝에 hexagonal baseplate가 있었다. YK phage DNA의 분자량은 약 86 Mdalton 이었다.
Lactobacillus casei에 감염하는 bacteriophage J1 게놈의 cohesive end site (cos)의 염기배열을 결정하였다. 또한 환형 cos와 선형 J1 DNA의 왼쪽 말단 염기배열을 비교한 결과 terminase가 절단하는 위치는 다음과 같았다. 5'- GGTCGGCC$\downarrow$ -3' 3'- $\uparrow$CCAGCCGG -5' J1 게놈의 cohesive end는 3' 말단이 돌출되어 있으며 8개의 뉴클레오티드로 이루어져 있고 G+C 함유율이 87.5%이었다. cos 부위는 선형 DNA의 왼쪽 5' 말단 뉴클레오티드의 위치를 +1로 정하였을 때 -33부터 +25까지 대칭이었다. 지금까지 보고된 phage들의 cos 부위 사이에 상동성은 발견되지 않았다.
본 연구에서는 미생물 검출용 바이오센서 제작을 위해 재조합 람다 파아지 꼬리 단백질 J을 센싱 요소로 활용가능한지를 조사하였다. 융합 단백질의 입체 장애를 최소화하기 위해 J 단백질 절편의 N-말단을 6X His-tag로 융합하고 HisTALONTM 컬럼으로 정제하였다. 정제 단백질은 약 38 kDa 크기를 SDS-PAGE에서 나타내며 anti-His 단클론 항체와 반응하였다. Anti-His 단클론 항체는 6HN-J를 처리한 E. coli K-12와 특이적으로 결합하나 BSA 처리하거나 6HN-J 처리한 다른 미생물들(Salmonella typhimurium, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa)과는 결합되지 않음을 보여주었다. 또한 정제 단백질과 숙주세포의 결합은 온전한 람다 파아지의 in vivo 숙주 표면 흡착을 약 $1{\mu}g/ml$ 단백질 농도에서 50%, $25{\mu}g/ml$ 단백질 농도에서 거의 완전히 방해하였다. 결론적으로 재조합 6HN-J 단백질은 탁월한 선택성과 선별성으로 인해 바이오센서의 제작에서 센싱 요소로 활용 가능함을 시사한다.
Lactobacillus casei에 감염하는 독성 phage중 각 분류꾼을 대표하는 5종의 phage (J1, TK93, K1, PD 5 빛 CP 1)와 l 종의 용원 phage (${\phi}$ 1043) 의 핵산의 특성을 바교 검토하였다. 실험한 6 종의 phage는 모두 double S stranded DNA를 갖고 있였으며 J1. TK93, K1 및 ${\phi}$ 1043 DNA의 크기는 약 42Kb, PD5 와 CP1 DNA는 140K Kb정도로 서로 비슷하였다. EcoR 1으로 절단시 J1, TK93, K1, PD5, CP1 및 ${\phi}$1043은 각각 13, 13. 11, 14, 14와 12개의 절편을 갖는 특징적인 절단양식을 보여주었다. J1, TK93 및 ${\phi}$ 1043 DNA에는 cohesive end가 존재 하였고 K1, PD5 빛 CP1 DNA에는 없는 것으로 사료되었다. J1과 TK93 DNA의 제한효소 지도를 작성하여 비교 검토하였으며 이상의 결과로부터 진화적 유연관계를 검토하였다.
본 실험의 결과를 요약해 보면 인산염의 종류와 농도에 따라서 유산균의 증식과 phage 감염후의 유산균 증식에 미치는 영향을 검토하였다. 특히, phage 증식억제를 나타내는 물질은 sodium metaphosphate, sodium pyrophosphate, sodium phosphate (dibasic), potassium phosphate(dibasic)으로써 각각 0.2∼0.4%, 0.1∼0.2%, 0.2∼0.3%, 0.2∼0.35%에서 phage 감염 후 유산균의 증식을 가능하게 하였다. 그리고 phage 감염 후에도 증식한 유산균 배양액을 새로운 배지에 1,2차 계대 하였을 때, 역시 인산염의 종류와 농도에 따라 배양액에 존재하는 phage에 의해 유산균의 증식에 큰 영향을 미쳤다. 특히 sodium pyrophosphate의 경우, 0.17%이상에서는 1차 계대 후에도 phage의 증식이 억제되어 유산균이 증식하기 때문에 starter 배양액용 P.R.M제조에 이용이 가능한 것으로 보여 진다.
발효유 starter로서 사용하고 있는 유산간균 L. casei YIT 9018을 NTG로 처리하여 4종류의 phage(J$_1$, Tk93, PD5, $K_1$)에 대하여 저항성을 나타내는 8 개의 돌연변이균주(PR5, PR6, PR35, PR38, PR46, PR47, PR48)를 분리하여, 산생성력, 생육, 당발효성, 내균성을 시험하였다. Phage저항균주 8개중에서 특히 PR38은 4 종류의 phage에 대하여 4 개월동안 저항성을 유지하였고, 생육속도, 산생성력 등에 있어서 parent strain과 비교할때, 유의적인 차이가 없었고 (P>0.01), 인공위액에서의 내균성은 parent strain보다 약한 것으로 나타났다. 당발효성에 있어서는 양자 사이에 차이가 없었다. 본 실험에서 분리한 PR38은 발효유제조시에 phage가 감염되면, Parent strain 대용으로 사용할 수 있는 가능성이 제시되었다.
This is preliminary report on anthrax epidemic occurred in an island with about 100 residents. Since 1982 there had been sudden deaths among all kinds of domestic animals including cattle, dogs, ducks, chicken and goat but only a few among cats in an isolated island about three hours distance away by ferry boat from Mokpo city. From 1986 through 1988 nine human deaths and four patients occurred, which made the government intervene for investigation on June 25 1988. The epidemiological investigation consisted of interview survey and medical examination, medical record analysis, laboratory work to isolate the pathogens under the direction of hypothesis derived from the study and further confirmation of the pathogens by international institute. The summarized results are as followings: 1. According to the interview survey there were many deaths among domestic animals usually in cold and dry season such as January through March and September through November; 36 heads of cattle leaving one head, more than 40 hogs(all), hundreds of chicken leaving few alive, goats that had taken home from mountain and two or three cats out of around 40 had sudden deaths from 1982 till 1985, when the residents stopped to purchase and take them into the island anymore. Also there were eleven persons who had experienced the similar syndrome complex to those of admitted and expired patients and four of them revealed typical chest X-ray findings; from one of these four patients(Rho) B. anthracis is isolated. 2. Medical record on patients who had been admitted, showed common characteristics of the disease course. On admission they had either gastrointestinal or upper respiratory infection symptoms which invariably progressed to septicemic nature with pulmonary interstitial infiltration and mediastinal widening/bulging, and then to deadly acute respiratory distress syndrome. At the end stage chest X-ray revealed multiple bullous emphysema. One of another characteristics was oral ulceration with bleeding occurred in about 50% of the patients. Laboratory test results in common were leukocytosis with left shift and abnormal liver and kidney functions, particularly at the later stage of the illness. 3. Epidemiological characteristics was striking in that both mortality and incidence rates were high: the mortality rate was 8.7% average, male being three times higher than females but there was no distictive clustering by age group. The incidence rate for both sexes was 28.2% and there was no sex difference although a tendency of higher incidence among older ages was noticed. The highest mortality and incidence were observed in Won village where the first death of animal occurred and with the highest frequency among three villages of the island. 4. Among twelve bacilli species isolated from various specimens, two strains, one from patient and the other from soil where the recently died cow is hurried, were confirmed as B. anthracis by Pasteur Institute and CDC of USA(strain from soil). CDC reported that the strain did not produce capsule in bicarbonate media but reacted with the bacteriophage and one of five sera taken from the patients. Mode of transmission as well as incubation period of the agent has not been established yet, which needs further investigation in relation to the antigenic structure of the variant when it is confirmed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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