이 연구에서는 해산어의 종묘 생산에 필요한 대량 배양용 로티퍼, Brachionus rotundiformis의 종 보존 방법으로서 무균 로티퍼의 이용을 검토했다. 로티퍼는 개량형 항생제 혼합액 AM9을 사용하여 무균 처리한후, 무균 Nannochloropsis oculata를 먹이로 공급하여 연속 유지 배양했다. 각각 다른 시기의 3회 (trial 1, 2 and 3)에 걸친 로티퍼 배양결과, 무균 배양 (axenic culture)에서는 비교적 안정적인 증식을 보인 반면, 유균 배양 (non-axenic culture)에서 로티퍼의 증식은 불안정적으로 각 시기에 따라서 심한 증식의 차이가 관찰되었다. 이 결과는 유균 배양에서 로티퍼의 증식에 직접적으로 악영향을 미치는 박테리아가 무균 처리과정을 통해서 제거되었음을 증명한다. 로티퍼 무균 배양 방법의 일반화 또는 대량 배양용 로티퍼의 씨앗으로서의 무균 로티퍼의 이용은 로티퍼의 안정 배양은 물론 유용 수산 생물의 대량 폐사를 일으키는 원인 생물을 사전에 제거할 수 있는 유효한 방법이 될 수 있다고 생각된다.
This study was to determine the extent of bacteria contamination and resistance to various antibiotics used commonly in microalgal culture. Seven different dose levels of chloramphenicol, dihydrostreptomycin sulphate, neomycin, penicillin G, streptomycin sulphate, penicillin G + streptomycin sulphate, and penicillin G + streptomycin sulphate + chloramphenicol were added to each culture of microalgae. The lethal effects on microalgae and bacteria were the highest in chloramphenicol and the lowest in penicillin G. The axenic culture of bacillariophyceae and dinophyceae was more difficult than that of chlorophyceae and haptophyceae because of their complicate external morphology. The efficient antibiotics and their concentrations for axenic cultures varied with microalgal species. The optimum quantity for antibiotic treatments were 2,000 ppm of dihydrostreptomycin for Chlorella ellipsoidea, neomycin 500 ppm of Isochrysis galbana and Heterosigma ahashiwo, hloramphenicol 500 ppm of Cyclotella didymus, and dihydrostreptomycin sulphate and neomycin 6,000 ppm of Thalassiosira allenii.
In order to establish an axenic (bacteria-free) culture of Microcystis aeruginosa NIER 10039 isolated from a Korean reservoir, the culture was subjected to sequential treatment, including ultrasonication, washing, and addition of antibiotics. Three broad-spectrum antibiotics, namely, kanamycin, ampicillin, and imipenem, were applied separately in that order. Axenicity of the culture was confirmed by cultivation on bacterial media and observation under epifluorescence and scanning electron microscopes. We are the first to establish an axenic culture of a Microcystis strain isolated from Korean reservoirs and can be used in physiological and molecular studies to control toxic Microcystis blooms.
During in door or outdoor mass culture, Porphyra have been easily contaminated with bacteria, protozoa and microalgal species. Several axenic treatments for Porphyra thalli have been published (Polne-Fuller and Gibo 1984; Chen and McCracken 1993), but axenic techniques for neutral spores and conchocelis we not developed. In this work we describe the procedure for axenic isolation of neutral spores and conchocelis of Porphyra yezoensis (omitted)
A psychrotolerant cyanobacterium, Nodularia spumigena KNUA005, was isolated from a cyanobacterial bloom sample collected near Dasan Station in Ny-${\AA}lesund$, Svalbard Islands during the Arctic summer season. To generate an axenic culture, the isolate was subjected to three purification steps: centrifugation, antibiotic treatment and streaking. The broad antibacterial spectrum of imipenem killed a wide range of heterotrophic bacteria, while the cyanobacterium was capable of enduring both antibiotics, the remaining contaminants that survived after treatment with imipenem were eliminated by the application of an aminoglycoside antibiotic, kanamycin. Physical separation by centrifugation and streaking techniques also aided axenic culture production. According to the cold-tolerance test, this mat-forming cyanobacterium was able to proliferate at low temperatures ranging between 15 and $20^{\circ}C$ which indicates the presence of cold-tolerance related genes in N. spumigena KNUA005. This suggests the possibility of incorporating cold-resistance genes into indigenous cyanobacterial strains for the consistent production of algae-based biofuel during the low-temperature seasons. Therefore, it is needed to determine the cold-tolerance mechanisms in the Arctic cyanobacterium in the next research stage.
Park, Soon-Jung;Yong, Tai-Soon;Yang, Hye-Won;Lee, Du-Ho;Lee, Kyung-Won
Parasites, Hosts and Diseases
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제37권2호
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pp.121-125
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1999
Inoculation of human fecal cysts to suckling Mongolian gerbils, two Giardia lamblia isolates, Kl and K2, were established as axenic cultures. Using this in vitro culture, both two Giardia isolates were grouped by using two genetic analysis. With genetic analysis of SSS-rDNA sequences, both K1 and K2 were found as members of hopkins'group 1, despite some nucleotide differences noticed in K1 (5 differences/292 bases.). The other genetic study used PCI-RFLP of the tim (triose phosphate isomerase) Nash's group 2 can bot be a separate group, but a part of Hopkins' group 1.
We examined effects of water temperature, salinity, irradiance, and different media on the growth of the toxic dinoflagellate Alexandrium tamarense (HYM9704), which was isolated from Jinhae Bay, Korea. The ranges of temperature and salinity in which the strain was able to grow were $10{\sim}20^{\circ}C$ and $20{\sim}34$ psu, respectively. These values were in accordance with those observed in situ. The maximum growth rates of axenic A. tamarense (HYM9704) was $0.25d^{-1}$ at $15^{\circ}C$, 30 psu, and $100{\mu}Em^{-2}s^{-1}$. The temperature affected the growth rates of axenic A. tamarense more significantly than the salinity. The type of culture media did not affect the growth rates of axenic A. tamarense. The strain in N-limited and P-limited media went into the stationary phase faster than that in T1 and T1/2 medium.
미세조류는 천연재생자원으로서 단순히 빛, 이산화탄소, 인 및 질소만이 존재하는 환경에서도 빠른 속도로 자라며 동시에 다양한 기본 화학물질(예를 들면 제약 및 식품산업에서 높은 부가가치를 창출 할 수 있는 비타민, 지방산, 카로티노이드 등)들을 생산한다. 본 연구에서는 생리활성물질을 생산하는 미세조류의 무균순수분리방법의 개발 및 미세조류 배양에 필요한 균체 생육도 측정법을 확립하고자 하였다. 미세조류에서 유용성분 추출을 위하여 항생제 혼합물 [ampicillin (100 ${\mu}g/ml$), streptomycin (10 ${\mu}g/ml$), chloramphenicol (10 ${\mu}g/ml$), penicillin (10 ${\mu}g/ml$), neomycin (50 ${\mu}g/ml$), gentamycin (50 ${\mu}g/ml$), kanamycin (10 ${\mu}g/ml$), nystatin (1.5 ${\mu}g/ml$)]을 이용한 결과 1-3%의 혼합 항생제의 농도범위에서 최적의 결과를 얻었으며 분광광도법을 이용한 균체생육도 측정법 또한 확립하였다. Haematococus lacustris 미세조류를 배양하여 astaxanthin을 추출하였으며, H. lacustris 배양액 1 ml로부터 얻은 astaxanthin의 농도는 $1.9{\times}10^{-3}{\mu}g/l$이었다. 따라서 개발된 무균 순수분리법을 이용하여 미세조류로부터 양질의 astaxanthin 및 유용성분들을 얻을 수 있을 것으로 사료된다.
An exopolysaccharide-producing microalgal dinoflagellate was isolated from a red-tide bloom and designated strain KG03. A bacteria-free culture of strain KG03 was achieved using a modified wash with phototaxis and antibiotic treatment. Combined treatment with neomycin and cephalosporin was the most effective for eliminating the bacteria associated with the microalgae. Strain KG03 was identified as Gyrodinium impudicum by analyzing the ITS regions of the 5.8S rDNA, 18S rDNA, morphological phenotype and fatty acid composition. The exopolysaccharide production and cell growth in a 300-ml photobioreactor were increased 2.7- and 2.4-fold, respectively, compared with that in a flask culture at the first isolation step.
Tigriopus japonicus를 대량생산하는데 필요한 기초적인 자료를 얻기 위해 무균 배양을 통한 nauplius 유생 단계와 성체의 식성에 대하여 조사하였다. 무균 상태의 성체는 먹이로 공급한 RT 박테리아주를 적극적으로 이용하여, 순조로운 증식을 보였다. 먹이로 공급한 RT 균주의 증식은 포식자 T. japonicus의 섭식에 의해서 그 증식이 크게 억제되었다. RT 균주만을 먹이로 배양한 T. japonicus의 성체가 가지고 있는 난낭안에는 oil bead로 충만해 있었다. 그러나, 무균 상태의 N. oculata만을 먹이로 공급한 경우에는 oil bead를 전혀 관찰할 수 없었다. 무균 조건의 nauplius 유생의 경우에는 먹이로서 공급한 RT 박테리아주를 적극적으로 이용하여 RT 박테리아주의 증식을 크게 억제하였다. 이 결과는 지금까지 T. japonicus가 잡식성인 것만으로 알려진 것과는 달리, 최소한 섭식기구가 미발달된 nauplius의 초기 유생은 사육수중에 세균이 존재하지 않는 경우에는 정상적인 발생이 불가능하였다. 즉, 부화 직후 또는 발생 초기의 T. japonicus의 nauplius 유생은 박테리아식성 (bacterivorous)이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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