Many food protein hydrolysates have been shown to have antioxidant activities, and recent research focuses on low molecular peptides produced during hydrolysis of food protein. Korean rice wine contains about 60-70% of protein at dry base and originates from raw materials. It has been suggested that the protein is transformed into low molecular weight peptides, and have antioxidant activity during fermentation. The objectives of this study were to evaluate the antioxidant activity of the pre-purified and purified peptides found in Korean rice wine and to identify the responsible peptides. The wine extract of Samhaeju, a traditional Korean rice wine made by low temperature fermentation, was evaporated at $35^{\circ}C$. The two methods employed in the evaluation of antioxidant activity were the DPPH radical scavenging method and the beta-carotene bleaching test. The pre-purified samples showed 808 AAC (Antioxidant Activity Coefficient) and 56.5% AOA (Antioxidant Activity), which were higher than $\alpha$-tocopherol (572 AAC and 78% AOA). The rice wine extract was separated by reversed-phase HPLC. The protective effect of the four most antioxidant active fractions were tested for t-butyl hydroperoxide induced oxidation of healthy human erythrocytes and the byproduct was determined by malondialdehyde formation. Fraction No.5 showed 35% lower MDA concentration as compared to the control. The peptides were further purified using consecutive chromatographic methods and 4 antioxidant peptides were isolated. The amino acid sequences of the peptides were identified as Ile-His-His, Val- Val-His(Asn), Leu-Val-Pro, and Leu(Val)-Lys-Arg-Pro. The AAC value of the synthetic form of the identified peptides was the highest for Ile-His-His.
The antioxidant potential of silk protein sericin from the non-mulberry tropical tasar silkworm Antheraea mylitta cocoon has been assessed and compared with that of the mulberry silkworm, Bombyx mori. Skin fibroblast cell line (AH927) challenged with hydrogen peroxide served as the positive control for the experiment. Our results showed that the sericin obtained from tasar cocoons offers protection against oxidative stress and cell viability is restored to that of control on pre-incubation with the sericin. Fibroblasts pre-incubated with non-mulberry sericin had significantly lower levels of catalase; lactate dehydrogenase and malondialdehyde activity when compared to untreated ones. This report indicates that the silk protein sericin from the non-mulberry tropical tasar silkworm, A. mylitta can serve as a valuable antioxidant.
The cell growth and antioxidant activity of Bacillus polyfermenticus SCD were studied in tryptic soy broth (TSB) medium and whey protein concentrate (WPC)-based medium. Overall, higher lactose contents in WPC-35 medium (up to 2.0%), and longer culture times correlated with greater cell viability. In WPC-35 medium with 1.5% and 2.0% lactose, the cell growth of B. polyfermenticus SCD was similar to growth in TSB medium. The 1,1-diphenyl-2-picyrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity of culture supernatant of B. polyfermenticus SCD in WPC-35 medium was measured to assess antioxidant activity. The antioxidant activity increased up to 32 hr of culture, reaching a maximum of 75.57% DPPH radical scavenging activity. The antioxidant activity seemed to follow the typical kinetics of primary metabolite synthesis. The antioxidant activity of B. polyfermenticus SCD supernatant in WPC-35 medium was more effective and stable than supernatant from TSB medium. These results suggest that WPC-35 medium is effective for the production of antioxidant by B. polyfermenticus SCD.
To elucidate the relationship among body mass index, nutrient intake and blood antioxidant capacity in the postmenopausal period, 60 women residing in Iksan area were recruited. Body mass index (BMI) was calculated base on height and weight, and food and nutrient intakes were estimated by 24-hour recalls of 3 non-consecutive days. Parameters of antioxidant capacity including the activities of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx), catalase (CAT) and total antioxidant capacity (TA) were measured in fasting blood samples from the subjects. The average age, height, weight and BMI of the subjects were 65 years, 151.1cm, 59.5 kg and 26.0 m/kg$^2$, respectively. The macronutrient intake rate of carbohydrate : protein : fat were 65:17.5:17.5; the mean intakes of energy and protein were 1532.7 kcal (86.3% of RDA) and 67.1 g (122.0% of RDA) respectively. The mean intakes of phosphorus, vitamin A, niacin and vitamin C were higher than Recommended Daily Allowance (RDA) for Koreans. On the other hand, calcium and riboflavin intakes were only 84.6% and 70.4% of RDA. Among the parameters of antioxidant capacity, SOD activity was significantly lower in lean subjects (BMI<20) than in the normal or overweight subjects (BMI${\geq}$20) (p<0.05). TAs of the subjects with the highest intakes of vegetables and fruits were significantly higher than those of subjects with lower intakes (p<0.05). Antioxidant capacity was compared among subjects according to 3 different nutrient intake levels according percentage of RDA for Koreans for selected nutrients with the following results: The high protein and niacin groups exhibited significantly lower TA status than those of the other intake groups (p<0.05). In conclusion, the low BMI was associated with lower SOD activity in postmenopausal women. Higher consumption of fruits and vegetables was associated with higher TA. When protein and niacin intakes were excessive, SOD activity and TA tended to be low. SOD and TA, among antioxidant indexes, seemed to be mostly influenced by other factors. Therefore, more studies on the effects of nutritional intake and the activity of antioxidant enzyme should be conducted.
지렁이(Earthworm, Lumbricus terrestris)로부터 thiol-specific antioxidant activity(TSA)를 나타내는 향산화 단백을 분리정제 하였다. 이 향산화 단백은 환원제로 thiol성분에 의해 유지되는 비효소적 금속 촉매 산화계 (MCO, $Fe^{3+}$, DTT 또는 2-mercatoethanol ; Thiol- MCO system)에 의하여 Glutamine Synthetase의 불활성을 억제하지만 아스코르브산과 같은 nonthiol 환원제를 가진 효소적 금속 촉매 산화계 (MCO, $Fe^{3+}$, ascorbate ; nonthiol- MCO system)에서는 Glutamine Synthetase의 불활성을 방어하지 못하였다. 정제된 지렁이 TSA 단백질은 SAS-PAGE에 의해 51-kDa임을 밝혔고, 기존에 알려진 TSA protein과 분자량이 다른 TSA Family로써 활성 산소종에 의한 산화적 손상을 방어하는 향산화 효소로써의 중요한 생화학적 역할을 수행함을 제시하였다.
To optimize the hydrolysis conditions in the production of antioxidant hydrolysates from tuna cooking juice concentrate (TC) to maximize the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, TC containing 48.91% protein was hydrolyzed with Alcalase 2.4 L, and response surface methodology (RSM) was applied. The optimum hydrolysis conditions included a 2.2% (w/v) Alcalase concentration and 281 min hydrolysis time, resulting in the highest DPPH radical scavenging activity of 66.49% (0.98 µmol Trolox/mg protein). The analysis of variance for RSM showed that hydrolysis time was an important factor that significantly affected the process (p < 0.05). The effects of different drying methods (freeze drying, hot air drying, and vacuum drying) on the DPPH radical scavenging activity and amino acid (AA) profiles of TC hydrolysate (TCH) were evaluated. Vacuum-dried TCH (VD) exhibited an increase in DPPH radical scavenging activity of 81.28% (1.20 µmol Trolox/mg protein). The VD samples were further fractionated by ultrafiltration. The AA profiles and antioxidant activities in terms of the DPPH radical scavenging activity, 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline)-6-sulfonic acid (ABTS) radical scavenging activity, ferric reducing antioxidant power, and ferrous ion chelating activity were investigated. Glutamic acid, glycine, arginine, and cysteine were the major AAs found in the TCH fractions. The highest DPPH radical scavenging activity was found in the VD-1 fraction (< 5 kDa). The VD-3 fraction (> 10 kDa) exhibited the highest ABTS radical scavenging activity and ferric reducing antioxidant power. The ferrous ion chelating activity was the highest in VD-1 and VD-2 (5 to 10 kDa). In conclusion, this study provided the optimal conditions to obtain high antioxidant activities through TCH production, and these conditions could provide a basis for the future application of TCH as a functional food ingredient.
Egg yolk is widely used to extract lecithin, which is utilized in the food and cosmetics industry. After lecithin is removed, the rest of egg yolk is generated as a by-product. Thus, it is necessary to properly utilize it. In this study, egg yolk protein extracts were produced using ethanol (EYE-E) and water (EYE-W). Their antioxidant and immunomodulatory effects were then evaluated. Antioxidant activities of EYE-E and EYE-W were determined using cellular antioxidant capacity (CAC) assay and comet assay. EYE-E and EYE-W showed significant (p<0.05) scavenging effects on intracellular reactive oxygen species (ROS) in a dose dependent manner. At a concentration of 50 ㎍/mL, EYE-W showed higher (p<0.05) antioxidant activity than EYE-E. EYE-E and EYE-W also exhibited protective effects against DNA damage caused by oxidative stress. After treatment with EYE-E and EYE-W, DNA damage level of 48.7% due to oxidative stress was decreased to 36.2% and 31.8% levels, respectively. In addition, EYE-E and EYE-W showed immunomodulatory effects by regulating Th1 cytokines (TNF-α and IL-2) and Th2 cytokines (IL-10 and IL-4) in Balb/c mouse splenocytes. These data suggest that EYE-E and EYE-W could be used as functional food ingredients with excellent antioxidant and immunomodulatory activities in the food industry.
본 연구는 대두단백가수분해물의 섭취가 소화흡수율, 지질대사 및 항산화에 미치는 영향을 살펴보고자 흰쥐를 카제인, 분리대두단백 (ISP) 또는 대두단백가수분해물 (서리태단백분해물 (SH), 수용성단백분해물 (SS) 또는 불용성단백분해물 (IS)군으로 나누어 4주간 사육한 후 생리활성의 변화를 살펴보았으며, 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 지질소화흡수율은 실험 1주차에서 분리대두단백군 (ISP군)이 다른 군보다 유의적으로 낮았다. 불용성가수분해물군 (IS군)은 실험 4주차에서 다른 군들보다 콜레스테롤의 소화흡수율이 낮은 경향이었다. 2) 혈액 중성지방은 불용성가수분해물군 (IS군)이 카제인군보다 유의적으로 낮았고, 서리태가수분해물과 ISP군도 낮은 경향이었다. 총 콜레스테롤도 중성지방과 마찬가지로 불용성가수분해물군이 가장 낮았고 다른 대두가수분해물군들과ISP군도 카제인군보다 낮은 경향이었다. 대두가수분해물군들이 카제인군보다 HDL-cholesterol은 높이고, LDL-cholsterol은 낮추어서 동맥경화지수는 불용성, 수용성, 서리태가수분해물의 순으로 낮았다. 3) 총항산화력은 군 간에 유의적인 차이가 없었으나 서리태가수분해물군 (SH군)이 다른 군들에 비해 높은 경향이었다. 간의 항산화효소활성은 각 군 간에 유의적인 차이는 없었으나 서리태가수분해물군의 superoxide dismutase, glutathione peroxidase 및 catalase 활성이 카제인군과 다른 실험군들에 비해 높은 경향이었다. 결론적으로, 대두단백가수분해물군들은 카제인군보다 혈액 중성지질, 총콜레스테롤, LDL-cholesterol과 동백경화 지표 (AI)를 낮추어서 심혈관질환예방에 바람직한 것으로 나타났는데, 이러한 효과는 특히 불용성단백가수분해물군에서 뛰어났다. 한편, 항산화활성의 경우 총항산화력과 항산화효소활성이 서리태가수분해물군에서 높은 경향으로 나타나 앞으로 서리태의 항산화 효과의 원인물질을 규명하고 분리추출하는 등의 연구를 통해 우리나라의 전통 콩의 우수한 면모를 밝히는 연구가 더 필요하다고 사료된다.
The herb, Cajanus indicus L, is well known for its hepatoprotective action. A 43 kD protein has been isolated, purified and partially sequenced from the leaves of this herb. A number of in vivo and in vitro studies carried out in our laboratory suggest that this protein might be a major component responsible for the hepatoprotective action of the herb. Our successive studies have been designed to evaluate the potential efficacy of this protein in protecting the hepatic as well as renal tissues from the sodium fluoride (NaF) induced oxidative stress. The experimental groups of mice were exposed to NaF at a dose of 600 ppm through drinking water for one week. This exposure significantly altered the activities of the antioxidant enzymes like superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione-S-transferase (GST), glutathione reductase (GR) and the cellular metabolites such as reduced glutathione (GSH), oxidized glutathione (GSSG), total thiols, lipid peroxidation end products in liver and kidney compared to the normal mice. Intraperitoneal administration of the protein at a dose of 2 mg/kg body weight for seven days followed by NaF treatment (600 ppm for next seven days) normalized the activities of the hepato-renal antioxidant enzymes, the level of cellular metabolites and lipid peroxidation end products. Post treatment with the protein for four days showed that it could help recovering the damages after NaF administration. Time-course study suggests that the protein could stimulate the recovery of both the organs faster than natural process. Effects of a known antioxidant, vitamin E, and a non-relevant protein, bovine serum albumin (BSA) have been included in the study to validate the experimental data. Combining all, result suggests that NaF could induce severe oxidative stress both in the liver and kidney tissues in mice and the protein possessed the ability to attenuate that hepato-renal toxic effect of NaF probably via its antioxidant activity.
Overdoses of acetaminophen cause hepato-renal oxidative stress. The present study was undertaken to investigate the protective effect of a 43 kDa protein isolated from the herb Cajanus indicus, against acetaminophen-induced hepatic and renal toxicity. Male albino mice were treated with the protein for 4 days (intraperitoneally, 2 mg/kg body wt) prior or post to oral administration of acetaminophen (300 mg/kg body wt) for 2 days. Levels of different marker enzymes (namely, glutamate pyruvate transaminase and alkaline phosphatase), creatinine and blood urea nitrogen were measured in the experimental sera. Intracellular reactive oxygen species production and total antioxidant activity were also determined from acetaminophen and protein treated hepatocytes. Indices of different antioxidant enzymes (namely, superoxide dismutase, catalase, glutathione-S-transferase) as well as lipid peroxidation end-products and glutathione were determined in both liver and kidney homogenates. In addition, Cytochrome P450 activity was also measured from liver microsomes. Finally, histopathological studies were performed from liver sections of control, acetaminophen-treated and protein pre- and post-treated (along with acetaminophen) mice. Administration of acetaminophen increased all the serum markers and creatinine levels in mice sera along with the enhancement of hepatic and renal lipid peroxidation. Besides, application of acetaminophen to hepatocytes increased reactive oxygen species production and reduced the total antioxidant activity of the treated hepatocytes. It also reduced the levels of antioxidant enzymes and cellular reserves of glutathione in liver and kidney. In addition, acetaminophen enhanced the cytochrome P450 activity of liver microsomes. Treatment with the protein significantly reversed these changes to almost normal. Apart from these, histopathological changes also revealed the protective nature of the protein against acetaminophen induced necrotic damage of the liver tissues. Results suggest that the protein protects hepatic and renal tissues against oxidative damages and could be used as an effective protector against acetaminophen induced hepato-nephrotoxicity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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