Transposon mutation of Xanthomonas campestris pv. vesicatoria (Xcv) was induced by using transposon omegon ($\Omega$)-Km (Tn $\Omega$Km), which was confirmed by resistance to kanamycin (KMr), and nonpathogenic mutants were selected through the inoculation test on pepper plants. The mutagenesis frequency was about 6$\times$10-8, and 53 out of 2,000 Kmr bacterial colonies tested were nonpathogenic to the pepper cultivar Cheung-Hong. Optimum conditions for the Tn $\Omega$Km mutagenesis of Xcv were Luria Bertani (LB) broth medium for culture of Xcv, yeast extract-dextrose-CaCO3 (YDC) agar medium for selection of Tn $\Omega$Km-mediated mutants, and over 1 to 2 in the ratio of the donor (Escherichia coli S17-1 with the plasmid pJFF350 $\Omega$Km) and the recipient (Xcv) in the culture for the mutagenesis. One of the 4 nonpathogenic mutants (WNP1, WNP3, WNP4 and WNP5), which had been reconfirmed through the inoculation on pepper cv. Dabokgun, showed no differences in the production of exoenzymes such as protease and polygalacturonase and extracellular polysaccharides in vitro and the bacterial growth rate from those of the wild type of Xcv.
맥류세균성 줄무늬병균의 선택배양기(KM-1)를 개발하여 이병식물체 및 토양으로부터 Xanthomonas campestris pv. translucens를 선택적으로 분리할 수 있는 효율성을 검토하였다. KM-1배양기의 구성성분은 증류수 1 L당 lactose 10 g, D(+)trehalose 4.0 g, thiobarbituric acid 0.2 g, K\ulcornerHPO\ulcorner 및 KH\ulcornerPO\ulcorner 각각 0.8 g, yeast extract 30 mg, NH\ulcornerCl 1 g, cycloheximide 100 mg, tobramycin 8.0 mg, ampicillin 1.0 mg 및 Bacto agar 15 g이며 1 N NaOH로 pH 6.6으로 조절하였다. X. c. t.의 균주별 KM-1의 배양효율은 비선택성 농후배지인 Wilbrinks agar에 비하여 1.30정도였으며, 기타 토양전염성식물병원세균 Agrobacterium tumefaciens, Agrobacterium rhizogenes, Erwinia carotovora var. atroseptica, Erwinia carotovora var. carotovora, Corynebacterium insidiosum, 및 기타 토양생존 부생세균 Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, and Pseudomonas putida 등의 생장을 완벽하게 억제하였다. KM-1의 저장기간(shelf-life)도 5$^{\circ}C$에서 2개월 동안 선택성을 유지하였다. 따라서 본 병원균의 전염원의 생존 등 발생생태연구에 활용될 수 있는 가치가 충분히 인정되었다.
Song, Wan-Yeon;Steven W. Hutcheson;Efs;Norman W. Schaad
The Plant Pathology Journal
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v.15
no.3
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pp.137-143
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1999
A novel chromosomal gene tagging technique using a specific fragment of the fatty acid desaturase-like open reading frame (des-like ORF) from the tox-argK gene cluster of Pseudomonas syringae pv. phaseolicola was developed to identify Xanthomonas spp.released into the environment as biocontrol agents. X. campestris pv. convolvuli FB-635, a pathogen of Convolvulus arvensis L., (bindweed), was chosen as the organism in which to develop and test the system. A 0.52 kb DES fragment amplified from P. syringae pv. phaseolicola C-199 was inserted into pGX15, a cosmid clone containing a 10.3 kb Eco RI-HindIII fragment derived from the xanthomonadin biosynthetic gene cluster contained in plasmid pIG102, to create a pigG::DES insertion. The 10.8 kb EcoRI-BamHI fragment carrying the pigG:: DES insertion was cloned into pLAFR3 to generate pLXP22. pLXP22 was then conjugated into X. campestris pv. convolvuli FB-635 and the pigG::DES insertion integrated into the bacterial chromosome by marker exchange. Rifampicin resistant, tetracycline sensitive, starch hydrolyzing, white colonies were used to differentiate the marked strain from yellow pigmented wild-type ones. PCR primers specific for the unique DES fragment were used for direct detection of the marked strain. Result showed the marked strain could be detected at very low levels even in the presence of high levels of other closely related or competitive bacteria. This PCR-based DES-tagging system provides a rapid and specific tool for directly monitoring the dispersal and persistence of Xanthomonas spp.released into the environment.
Demirci, Ahmet Sukru;Arici, Muhammet;Gumus, Tuncay
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.40
no.4
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pp.356-363
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2012
The aim of this study was to utilize rice bran, the main waste product of paddy processing, in xanthan gum production by Xanthomonas campestris fermentation. Deffated rice bran was enzymatically hydrolyzed using cellulase, gluco-amylase, alpha-amylase and xylanase at various pHs and temperatures within 0-12 h. The highest sugar content reached at $35^{\circ}C$, pH 5.5 in 6 h with 41.66%. The enzymatic hydrolysate was used as the carbon source for xanthan gum production by X. campestris NRRL B-1459 and X. campestris pv. campestris. The highest productivities obtained were 21.87 and 17.10 g/L, respectively. Viscosity measurement for the obtained xanthan gums and commercial gum was carried out in gum solutions at various pHs and temperatures. The highest viscosity was reached with 1% gum solutions at $20^{\circ}C$ and pH 5.5 for all gums with viscosity values of 470, 131 and 138 mPa sec, respectively. This work has provided relevant scientific information about the use of rice bran, an abundant agroindustrial residue, to produce xanthan gum.
During 1997 and 1998, a new disease of lettuce (Lactuca sativa) was observed on greenhouse-grown plants in Kwangju and Kwangmyung. Lesions on leaves were irregular, small, pale green to black, water-soaked, and 2 to 5 mm in diameter, Coalescing lesions sometimes caused defoliation of older leaves. Isolations made from diseased leaves on yeast extract dextrose calcium carbonate agar yielded nearly pure cultures of a yellow pigmented bacterium typical of a xanthomonad. Two bacterial strains (SL0246 and SL1352) were purified and used for further tests. Pathogenicity of strains was confirmed on 5-week-old lettuce plants injected with bacterial suspensions containing $10^8$ cfu/ml of phosphate buffered saline. The representative Xanthomonas strains isolated from lettuce were compared with a reference strain X. campestris pv, vitians for fatty acid profiles and metabolic fingerprints using GN2 microplate, showing that all outcomes were indistinguishable between the representative and reference strains. This is the first report of bacterial leaf spot and dry rot of lettuce in Korea.
This study was conducted to investigate the incidence of bacterial leaf blight (BLB) in Milyang 30 which was previously considered to be resistant to Xanthomonas campestris pv. oryzae Seeds of Milyang 30 were collected from Suweon, Milyang and Haenam. When rice plants from different source were inoculated at the maximum tillering stage and flag leaf stage, reactions of Milyang 30 were consistant. The susceptibility of Milyang 30 was found to be due to infection with tome isolates in the pathotype II of X. campestris pv. oryzae.
Kim, Seung-Hwan;Cheng, Jinhua;Yang, Seung Hwan;Suh, Joo-Won;Song, Eun-Sung;Kang, Lin-Woo;Kim, Jeong-Gu
Journal of Applied Biological Chemistry
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v.58
no.3
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pp.253-258
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2015
Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo), X. campestris pv. vesicatoria (Xcv), and Pectobacterium carotovorum pv. carotovorum (Pcc) are the causative agents of bacterial blight in rice, bacterial spot in pepper, and bacterial soft rot in carrot and cabbage, respectively. To isolate novel microbial extracts with antimicrobial activities against these bacteria, approximately 5,300 different Streptomyces extracts were prepared and tested. Microbial cultures from various Streptomyces strains isolated from the Jeju Island, Baekam, Mankyoung river, Jiri mountain etc. in Korea were extracted into three different factions -secreted hydrophobic, secreted hydrophilic, and mycelia- using ethyl acetate, water, and methanol. Initially, 34, 29, and 10 extracts were selected as having antibacterial activities against Xoo, Xcv, and Pcc, respectively. Extracts 1169G4, 1172E9, and 1172E10 had the highest growth inhibition activities against both Xoo and Xcv, and extracts 1151H7 and 1152H7 showed the highest growth inhibition activities against Pcc.
The hypersensitive reaction (HR) is the most common plant defense reaction against pathogens. HR is produced during both host- and nonhost-incompatible interactions. Several reports suggest that similarities exist between host and nonhost resistances. We assayed the pattern of generation of reactive oxygen species (ROS) and scavenging enzyme activities during nonhost pathogen-plant interactions (Xanthomonas campestris pv. campestris/Capsicum annuum L.) and incompatible host pathogen-plant interactions (Xanthomonas campestris pv. vesicatoria race1/Capsicum annuum L.). Both ${O_2}^-\;and\;H_2O_2 $ accumulated much faster during nonhost resistance when compared to the host resistance. The scavenging enzyme activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and peroxidase (POX) were also different during the host- and nonhost-incompatible interactions. CAT activity was much higher during nonhost resistance, and several new isozymes of SOD and POX were detected during nonhost resistance when compared to the host resistance. Lipoxygenase (LOX) activity was higher in host resistance than nonhost resistance during the early stages of infection. Interestingly, the nitric oxide (NO) radical accumulated equal amounts during both host and nonhost resistance at early stages of infection. Further studies are needed to determine the specific pathways underlying these differences between host and nonhost resistance responses.
Lee, Ji Hyun;Kim, Jin-Cheol;Jang, Kyoung Soo;Choi, Yong Ho;Ahn, Kyoung Gu;Choi, Gyung Ja
Research in Plant Disease
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v.19
no.2
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pp.95-101
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2013
Black rot caused by Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) is one of the most serious diseases of crucifers world-wide. To establish the efficient screening method for resistant cabbage to Xcc, different inoculation methods, inoculation positions, growth stages of seedlings, and incubation temperatures after inoculation were investigated with the seven cabbage cultivars showing different resistance degrees to the pathogen. Clipping with mouse-tooth forceps was better inoculation method than piercing with 18 pins or cutting with scissors to distinguish the level of resistance and susceptibility. In inoculation using mouth-tooth forceps, clipping the edges of the leaves near veins is more effective than injuring the veins of the leaves directly. In addition, the inoculated plants kept at $22^{\circ}C$ showed more clear resistant and susceptible responses than those kept at 26 or $30^{\circ}C$. On the basis of the results, we suggest that an efficient screening method for resistance of cabbage cultivars to black rot is to clip the edges of the leaves near veins of the four-week-old seedlings with mouth-tooth forceps dipped in a suspension of Xcc at a concentration of $7{\times}10^7$ cfu/ml and incubate the inoculated plants in a growth room at $22^{\circ}C$ with 12-hr light a day.
Soo Min Lee;Jin Ju Lee;Yong Ho Choi;Hun Kim;Gyung Ja Choi
Research in Plant Disease
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v.29
no.2
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pp.158-167
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2023
Black rot of Chinese cabbage caused by Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) is one of the most severe diseases in crop cultivation. To define the resistance characteristics of Chinese cabbage to Xcc, we tested the virulence of eight Xcc isolates in four susceptible cultivars of Chinese cabbage. The isolates of Xcc showed different the virulence on the cultivars. On the other hand, we selected 22 resistant or moderately resistant cultivars of Chinese cabbage to Xcc and tested the occurrence of black rot on the cultivars caused by the isolates of Xcc. Mean disease severity of black rot on the Chinese cabbage caused by each isolate was also positively correlated with the virulence of Xcc isolates. Furthermore, the development of black rot in each cultivar increased according to virulence of Xcc isolates. The number of resistant cultivars of Chinese cabbage to eight isolates of Xcc decreased according to the virulence increase of bacteria. Taken together, these results suggest that resistance of Chinese cabbage cultivars to Xcc is likely affected by the virulence of Xcc isolates, but not result from race differentiation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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