Rotaviruses are the world-wide leading causative agents of severe dehydrating gastroenteritis in young children and animals. The outer capsid glycoprotein VP7 and inner capsid glycoprotein VP6 of rotaviruses are highly antigenic and immunogenic. An SFV-based expression system has recently emerged as a useful tool for heterologous protein production in mammalian cells, exhibiting a much more efficient performance compared to other gene expression systems. Accordingly, the current study adopted an SFV-based expression system to express the VP7 of a group A human rotavirus from a Korean isolate, and the VP6 of a group B bovine rotavirus from a Korean isolate, in mammalian cells. The genes of the VP6 and VP7 were inserted into the SFV expression vector pSFV-1. The RNA was transcribed in vitro from pSFV-VP6 and pSFV-VP7 using SP6 polymerase. Each RNA was then electroporated into BHK-21 cells along with pSFV-helper RNA containing the structural protein gene without the packaging signal. The expression of VP6 and VP7 in the cytoplasm was then detected by immunocytochemistry. The recombinant virus was harvested by ultracentrifugation and examined under electron microscopy. After infecting BHK-21 cells with the defective viruses, the expressed proteins were separated by SDS-PAGE and analyzed by a Western blot. The results indicate that an SFV-based expression system fur the VP6 and VP7 of rotaviruses is an efficient tool for developing a diagnostic kit and/or preventive vaccine.
An avian rotavirus (AvRV-2) was isolated from feces of broilers suffering from acute gastroenteritis in 2011. It was the first avian rotavirus isolated in Korea. To investigate the molecular characteristics of AvRV-2, the VP4, VP6, VP7 and NSP4 gene nucleotide sequences were determined and compared with those of rotavirus strains available in the GenBank database. The phylogenetic tree of VP7 gene showed that AvRV-2 had a high degree of nucleotide sequence homology (93.4% to 94.7%) with those of rotaviruses belonging to genotype G19 cluster. The phylogenetic tree of the VP4 gene revealed a high degree of nucleotide sequence homology (95.8% to 95.9%) with genotype P[30] rotaviruses isolated from chickens. The VP6 and NSP4 gene nucleotide sequences showed the highest identities with those of avian strains with 95.3% to 96.4% and 90.3% to 92.2%, respectively. Genetic characterization of the VP4, VP6, VP7 and NSP4 showed that AvRV-2 strain was most closely related to chicken rotavirus strains from Germany and Japan. Comparative nucleotide sequences and phylogenetic analysis indicated that avian rotavirus isolated from broilers belonged to genotype G19P[30] and it was the first report on avian rotavirus infection in Korea.
전염성 췌장괴저바이러스 (Infectious pancreatic necrosis virus) DRT 주의 VP1유전자를 대 장균 발현운반체와 Baculovirus에 삽입하여 대장균과 진핵세로에서 VP1단백질의 발현을 연구하였다. 재조합체 pMal-pol 클론 [7]에서 2.7 Kb 단편인 VP1 유전자를 제한효소 XbaI으로 절단하여 Baculovirus 운반체인 pBacPAK9에 클로닝하여 pBacVP1이라 명명하였다. 이 pBacVP1에 클로닝된 VP1유전자를 제한효소 SacI과 PstI으로 절단하여 대장균 발현 운반체인 pQE-30에 클로닝하여 pQEVP1이라 명명하였다. 또한 VP1 단백질의 C-말단에 6개의 히스티딘 $6{\times}His$이 붙어 있는 단백질을 만들기 위하여, pQEVP1 클론의 His부위를 EcoRI으로 절단하고, 또한 pBacVP1을 EcoRI으로 절단하여 생긴 부위에His-EcoRI DNA 단편을 교체시켜 재클로닝하여 pBacHis-VP1을 만들었다. pBacHis-VP1 DNA와 Bsu36I로 처리된 LacZ-Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus (LacZ-HcNPV)를 함께 lipofectin을 이용하여 곤충세포 (Spodoptera frugiperda cell)에 동시 감염을 시켜서 재조합 바이러스를 선발하여, VP1-HcNPV-1이라 명명하였다. pQEVP1 클론은 6개의 히스티딘 단편이 부착된 VP1단백질을 Ni-NTA resin 크로마토그래피법으로 정제하여 SDS-PAGE와 Western blot으로 확인하였고, 단백질의 활성과 구조에 영향을 주지 않는 6개의 히스티딘 단편 ($6\;{\times}\;His$)이 부착된 94 kDa의 VP1단백질을 정제할 수 있었다. 또한 재조합 바이러스에 감염된 곤충세포에서 VP1 단백질이 발현된 것을 전기영동과 Western blot으로 검색을 한 결과 95 kDa VP1 단백질이 발현이 되었음을 확인하였다.
Infectious bursal disease (IBD) caused by infectious bursal disease virus (IBDV) is a highly contagious viral disease in chicken. It causes heavy economic loss by immune suppression and high mortality. The IBDV, designated Avibirnavirus in the Family Birnaviridae, has a double-stranded RNA genome formed by two segments, segment A and segment B. Segment A encodes a 108 KDa polypeptide that is self-cleaved to produce pVP2, VP3 and VP4, and later pVP2 is cleaved to VP2. The VP2 contains the antigenic regions responsible for elicitation of neutralizing antibodies and VP3 is a major immunogenic protein of IBDV. In this study, monoclonal antibodies (MAbs) specific for IBDV were produced and characterized. All 15 MAbs were specific for IBDV and did not react with other viruses used in this study. The protein specificity of MAbs was determined by comparing the reactivity patterns of each MAb with IBDV VP2 and VP234 recombinant baculoviruses and Western blot analysis. As a result, 7 MAbs (1F5, 2C8, 2F4, 3C7, 4C3, 6F11, 6G5) and 5 MAbs (2A4, 2G2, 3F5, 3G2, 4F10) were specific for VP2 and VP3, respectively. The protein specificity of 3 MAbs (2B8, 3F7, 3F8) were not determined. Five (2C8, 2F4, 4C3, 6F11, 6G5) of the VP2-specific MAbs had a neutralizing activity against IBDV. Some MAbs reacted with IBDV-infected bursa of Fabricius by indirect fluorescence antibody (IFA) and immunohistochemistry (IHC) assay. The MAbs produced in this study would be used for diagnostic reagents for the detection of IBDV infection.
본 연구는 문화재 방사선 조사에서 고려하지 않았던 산란 방사선의 영향을 확인하기 위해 관전압 (kVp)과 필름-바닥 거리(film-floor-distance: FFD) 납스크린 배치를 달리하여 평가하였다. 연구결과, 실험시편의 투과농도와 산란 방사선의 투과 농도는 관전압에 따라 증가되었다. 실험시편의 투과농도는 평균 1.4 D의 편차를 보이며, 60 kVp에서 0.17 D, 160 kVp에서 1.54 D, 220 kVp에서 2.97 D로 확인되었다. 산란 방사선의 평균 투과농도는 60 kVp에서 0.10 D, 160 kVp에서 0.40 D, 220 kVp에서 0.46 D로 확인되었다. FFD 거리가 바닥면과 멀어질수록 관전압(60 kVp-160 kVp)구간의 경우 투과농도 (D)가 커지는 경향을 보였으나, 고전압(160 kVp-220 kVp)구간은 FFD 거리 증가에 따른 투과농도 변화가 확인되지 않았다. 납스크린 없는 조건과 바닥면(floor)을 납스크린으로 대체한 경우는 FFD 50 mm, 100 mm, 200 mm 거리에서 산란 방사선이 확인되었고, FFD 0 mm 거리는 확인되지 않았다. 식별률은 관전압 160 kVp에서 FFD에 따라 2.08~2.67% 범위이며, 관전압 220 kVp에서는 2.67~3.33% 범위로 측정되었다.
White spot disease (WSD) is caused by the white spot syndrome virus (WSSV), which results in devastating losses to the shrimp farming industry around the world. However, the mechanism of virus entry and spread into the shrimp cells is unknown. A binding assay in vitro demonstrated VP28-EGFP (envelope protein VP28 fused with enhanced green fluorescence protein) binding to shrimp cells. This provides direct evidence that VP28-EGFP can bind to shrimp cells at pH 6.0 within 0.5 h. However, the protein was observed to enter the cytoplasm 3 h post-adsorption. Meanwhile, the plaque inhibition test showed that the polyclonal antibody against VP28 (a major envelope protein of WSSV) could neutralize the WSSV and block an infection with the virus. The result of competition ELISA further confirmed that the envelope protein VP28 could compete with WSSV to bind to shrimp cells. Overall, VP28 of the WSSV can bind to shrimp cells as an attachment protein, and can help the virus enter the cytoplasm.
본 논문에서는 JCT-VC 에서 2013 년 1 월에 표준화가 완료된 High Efficiency Video Coding (HEVC)과 구글에서 2013 년 6 월에 개발 완료 예정인 VP9 의 압축 효율 비교를 수행한다. HEVC 는 UHD 등 고화질 방송 등에 대응하도록 디자인 되었으며, VP9 은 유튜브 (YouTube) 등과 같은 인터넷 비디오 스트리밍에 적합하도록 디자인되었다. VP9 의 경우 HEVC 와는 달리 로열티 프리 (royalty-free)를 지향하며 오픈소스 (open source) 방식으로 개발이 진행되고 있다. 본 논문에서는 HEVC 와 VP9 의 디자인 차별점을 소개하고, 랜덤 액세스 환경(Random Access, RA)과 저지연 환경 (Low Delay, LD)에서 HEVC 와 VP9 의 압축 효율을 비교한다. 실험 결과에 따르면, 방송 및 패키지 미디어 등에서 많이 사용될 랜덤 액세스 환경에서는 VP9 이 HEVC 대비 32.7% 열세를 보인다. 비디오 컨퍼런스등과 같은 저지연 환경에서는 VP9 이 HEVC 대비 26.7% 열세를 보인다. VP9 의 경우 개발이 완료된 것이 아니므로, 향후 압축 효율의 향상이 있을 것으로 기대된다.
4-비닐피리딘과 N,N'-1,6-헥사메틸렌비스아크릴아미드를 라디칼중합하여 여러 가지 가교도를 가지는 가교 폴리(4-비닐피리딘) (CHP4VP)을 합성하였고, 이들 가교고분자와 구리(II)와의 착물을 평형흡착법으로 제조하였다. 제조한 착물들을 ascorbic acid (AA)의 산화반응 촉매로 사용하여 촉매활성을 조사하였다. CHP4VP-Cu(II) 착물에 의한 AA 산화반응은 Michaelis-Menten형 동력학적 거동을 나타내었다. CHP4VP-Cu(II) 촉매계의 촉매활성은 CHP4VP의 가교도가 증가할수록 증가하였고, 또 CHP4VP-Cu(II) 착물은 재사용 후에도 촉매활성이 거의 감소하지 않았다. 그러나 CHP4VP-Cu(II) 착물은 전보의 N,N'-메틸렌비스아크릴아미드가 가교제로 포함된 가교 폴리(4-비닐피리딘)-구리(II) 착물보다 AA 산화반응에 대한 촉매활성이 감소하는 경향을 나타내었다. 이들 결과로 부터 촉매계에 포함된 CHP4VP의 가교도와 가교제의 소수성이 AA 산화반응에 중요한 역할을 함을 알 수 있었다.
본 논문에서는 HEVC와 VP9 코덱의 계수 변환 (Transform)을 수행하는 통합형 아키텍쳐를 제안하여 하드웨어 크기를 줄이고자 한다. 제안하는 아키텍쳐는 HEVC $4{\times}4$ IDCT, HEVC $4{\times}4$ IDST, VP9 $4{\times}4$ IDCT, VP9 $4{\times}4$ IADST를 통합 하드웨어에서 처리가 가능하다. HEVC $4{\times}4$ IDCT와 VP9 $4{\times}4$ IDCT는 계수의 스케일만 다를 뿐 동일한 IDCT 연산을 사용하며, 마찬가지로 HEVC $4{\times}4$ IDST와 VP9 $4{\times}4$ IADST도 계수의 스케일만 다를 뿐 동일한 IDST 연산을 사용한다. 더욱이 IDCT 연산과 IDST 연산에는 상당히 많은 유사점이 있어 일부 하드웨어를 공동으로 사용할 수 있다. 따라서 제안하는 하드웨어는 4가지 연산에 대해 곱셈기의 계수는 각각 다르지만 버터플라이 덧셈기등은 공통으로 사용하여 통합적으로 수행한다. 0.18um 공정에서 합성했을 때 게이트 수가 약 6,679 게이트로 기존 아키텍처 대비 25.3% 감소함을 확인하였다.
Throughout the world, rotavirus infections cause extensive morbidity in human infants and diarrhea in animals such as white scour caused by bovine rotavirus in calves. We isolated three rotavirus strains designated KV0407, KV0418, and KV0426 from 103 fecal samples of diarrheic calves. The genes coding for proteins VP4, VP6, VP7, and NSP4 from strain KV0407 were sequenced and compared with the nucleotide sequences of other known strains of rotavirus. The KV0407 VP4 gene was highly homologous to the OSU (99.4%) and JL94 (99.4%), but not the B223 (62.4%) and K33 (62.4%) VP4 genes. The KV0407 and KV0418 VP7 genes were most similar to the OSU and super-short type VMRI VP7 genes. Based on nucleotide sequence analysis, the KV0407 strain was tentatively assigned to A serogroup (SG I), G5P[7], NSP4 genotype B and the KV0418 and KV0426 strains were assigned to A serogroup (SG I), G6P[5], NSP4 genotype A. The genetic characterization of these bovine rotavirus isolates could be useful for the diagnosis and prevention of diarrhea in calves.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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