This study was carried out to investigate antibacterial activities of the green tea extract according to storage temperature as death velocity constant. The survey data were collected from seven green teas (2 Korean, 2 Japanese, 2 Chinease and 1 Vietnamese) and experimental strains were used E. coli No. 11234, Ent. aerogenes No. 11783, Ps. fiu. orescens No. 11210, S. marscens No. 11808, St. mutans No. 11823 and V. parahaernolyticus No. 11965. The experimental results obtained were as follows: 1. Antibacterial activities of the green tea extracts according to the strains were strikingly difference. That is, those of the samples appeared to be conspicuous on [St. mutans No. 11823 (Range of death velocity constant a day after, at 20$\circ$C 4.85~5.22) and V. parahaemolyticus No. 11965 (4.70~6.00) while E. coli No. 11234 (0.59~-0.30) and Ent. aerogenes No. 11783 (0.24~-0.11)] were not so. 2. To storage temperature at 5$\circ$C than that at 20$\circ$C, antibacterial activities of the green tea extract on Ps. fluorescens No. 11210, S. marscens No. 11808, E. coli No. 11234, and Ent. aerogenes No. 11783 were sensitived but St. mutans No. 11823 and V. parahaemolyticus No. 11965 were not related to those. 3. Antibacterial activities to the strains were increased within two days.
V. parahaemolyticus를 균주로 alkaline protease 생산을 위한 질소원의 종류, skim milk농도, NaCl농도, 금속이온의 종류를 조사하였다. 질소원인 peptone, tryptone, casamino acid, ski milk, phyton peptone중에서는 skim milk에서 활성이 월등히 높게 나타났고, skim milk의 농도에 따른 실험에서는 2%일 때 활성이 가장 높게 나타났다. NaCl의 농도에 따른 실험에서는 0%일 때 활성이 가장 높았고 농도가 높아질수록 활성이 낮아졌다. 금속이온에 따른 활성을 보면 금속이온이 들어가지 않았을 때 활성이 가장 높게 나타났고, 금속이온을 첨가하므로써 활성이 급격히 떨어졌다. 또한 CoCl$_2$, CuCl$_2$, HgCl가 첨가되었을 때는 활성이 전혀 나타나지 않았다.
The authors isolated Vibrio parahaemolyticus from sea water, sea mud and various marine products in Busan shore area from 1981 to 1982, Among 100 isolated strains, 66 strains showed positive reaction in Kanagawa phenomenon. With the above 66 strains, the authors carred out test for detecting hemolysis activity of V.parahaemolyticus on human, rabbit, chicken, pig, goat, sheep and cow erythrocytes, in different media, such as modified Wagatsuma, nutrient, peptone and brain heart infusion agar plates media. The following results were obtained: 1. The media which can be used for Kanagawa phenomenon of V. parahoemolyticus were modified Wagatsuma, nutrient, peptone agar media, but not brain heart infusion agar medium. 2. The erythrocytes which showed positive Kanagawa phenomenon were those of human, rabbit, chicken and pig, but sheep, goat and cow erythrocytes showed no sensitivities.
Sixty-seven Vibrio parahaemolyticus isolates from surface seawater from the Wando area, on the southern coast of Korea, were analyzed for their susceptibility to 15 different antimicrobials and the presence of virulence genes. According to the disk diffusion susceptibility test, all of the strains studied were resistant to ampicillin and oxacillin, while decreasing percentages were resistant to vancomycin (64.2%), streptomycin (56.7%), amikacin (31.3%), kanamycin (22.3%), cephalothin (20.9%), erythromycin (10.4%), ciprofloxacin (4.5%), and tetracycline (3.0%). All of the strains were susceptible to five antimicrobials: chloramphenicol, gentamycin, nalidixic acid, sulfamethoxazole/trimethoprim, and trimethoprim. Fifty-nine isolates (88.1%) were resistant to three or more classes of antimicrobial and defined as multidrug resistant, and two strains were resistant to seven antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the 67 V. parahaemolyticus isolates to ampicillin and oxacillin ranged from 512-2,048 and $64-512{\mu}g/mL$, respectively. All 67 isolates were also examined for the presence of the tdh and trh virulence genes using the polymerase chain reaction (PCR). However, no isolates possessed either tdh or trh. The VPA0477 (${\beta}$-lactamase) gene, present in all of the tested strains, was validated as a new specific marker gene in PCR assays for the accurate detection and identification of V. parahaemolyticus.
식중독 병원균인 장염비브리오균 (V. parahaemolyticus)의 세포외 분비 효소 중 콜라겐분해효소를 발현벡터인 pET-29b에 클로닝시키고 대장균에서 발현시킨 다음, 부분정제하여 그 특성을 조사하였다. V. parahaemolyticus collagenase는 $(NH_4)_2So_4$침전, affinity adsorption, 그리고 Sephacryl S-100 gel filtration 과정을 통하여 부분정제 되었다. 이 collagenase는 73%의 회수율과 43.7의 정제도를 나타내었으며, 전기영동시 분자량은 약 35 kDa로 나타났다. 이 효소의 최적 pH 및 온도는 6~12와 $35^{\circ}C$이었고, 온도안정성 조사에서 $55^{\circ}C$까지는 90% 잔존 찬성을 유지하였으나 $60^{\circ}C$이상에서는 급격하게 효소활성이 실활되었다. 기질특이성조사에서 type I collagen과 콜라겐분해효소의 합성기질로 알려진 Z-GPGGPA에서 gelatin과 casein에 비해 높은 활성을 보이는 것으로 보아 이 효소가 진정한 콜라겐분해효소라는 것을 알 수 있었다.
V. parahaemolyticus의 성장은 선택되어진 천연산물의 한 종류 단독으로서도 저해되었으며, 또한 이 들의 조합에 의해서도 특징적으로 성장이 저해되었으며, 이것은 항산화력이 강한 천연산물들을 free radical의 제거와 동시에 V. parnhaemolyticus의 성장 억제 물질로 사용할 수 있고 이를 이용하여 기능성 항산화 제재의 제조가 가능하리라 사료된다. V. parahaemuzyticus 는 한 종류의 천연산물 황백 및 황련에 의하여 100% 제어됨을 보이고 있으며, 녹차는 90%, 오배자는 75%, 백작약은 52%의 제어 효과를 보여 이 세균의 대사를 제어하는 성분이 있거나, 세포막의 수송 환경의 변화에 의한 물질의 전달이 제어되는 것으로 추정된다. 그리고 두 종류 천연산물의 조합인 황백과 오미자의 조합은 68.7%의 제어율을, 오가피와 오미자(상백피) 및 황금과 황기의 조합은 53%의 제어 효과를 보였다. 세 종류의 천연산물 조합인 황백과 오미자 및 오가피, 황백과 오가피 및 황금, 오미자와 오가피 및 황금 등의 황백, 오가피 등을 공통조합으로 한 배합에서 모두 95%의 제어율을 보였다. 네 종류 천연산물의 조합, 오가피, 황기와 황백 및 황련의 조합, 오가피, 황기와 황백 및 백작약의 조합, 황기, 황백과 황련 및 황금의 조합, 황기, 황백과 황련 및 백작약의 조합 등에 의하여 성장이 95%의 저해율을 보였다. 이 조합들의 항산화력은 황기, 황백과 황련 및 백작약 조합의 AUC가 625.46으로써 가장 높았으며, 대조군보다 5.4배 정도 강한 것으로 나타났고, 항산화력이 큰 조합에서 제어가 잘 됨을 보였다. hydroxyl radical의 소거활성은 황기, 황백과 황련 및 백작약의 조합에서 95% 이상의 소거율을 보였다. 또한, 방향족의 함량 및 총 phenol 함량은 가공된 녹차들보다 30배 이상 높은 것으로 나타났다. 이것은 항산화력이 강한 천연산물들을 이용하여 free radical의 제거와 동시에 V. parnhaemofyticus의 성장 저해 물질로 사용할 수 있으며, 생체의 기능을 향상시킬 수 있는 기능성 제재로의 응용 가능성을 보였다.
본 연구는 국내 주요 식중독 원인균인 Staphylococcus aureus, Salmonella enterica subsp., Vibrio parahaemolyticus를 동시에 검출 및 동정할 수 있는 simultaneous multiplex PCR방법을 개발하고자 하였다. S. aureus의 23s rRNA 유전자(482 bp), V. Parahaemolyticus의 toxR 유전자(368 bp), S. enterica subsp.의 invA 유전자(284 bp)를 특이적으로 검출 및 동정할 수 있는 3개 primer set 즉, STA-5F/STA-5R, ToxR-F/ToxR-R, 139/141을 구축하였으며, 그 결과 정제되어진 각 식중독 원인균의 genomic DNA를 template로 하여 세 균주 모두 10 pg까지 다중동시검출이 가능하였다. 생균수(CFU)와 상응되는 검출한계 결과로써 $10^1\sim10^2$ CFU/reaction의 검출한계를 보였으며 이는 즉, S. aureus $6.0\times10^4$ CFU/mL, S. enterica subsp. $9.5\times10^4$ CFU/mL, V. parahaemolyticus $6.1\times10^5$ CFU/mL의 검출한계를 나타내었다. 균체회수부터 agarose gel 상에서 검출 및 동정까지 3~4 hr의 시간 소요로 single tube 반응으로 세 식중독 원인균의 다중동시검출이 가능하였다. 또한 추가적인 연구를 통하여 세 식중독 원인균주의 검출을 위한 향상된 민감도를 가지는 multiplex PCR법 및 real time PCR을 이용한 다중동시검출법 개발을 위한 기초자료로서 활용 가능할 것이라 사료된다.
Urease is an important microbial enzyme and its production is a marker to predict potential pathogenicity. An unusual halophilic bacterium producing urease was isolated from sea product and identified as Vibrio parahaemolyticus KH410. Its biochemical properties were indole negative, gelatin positive, sodium citrate positive and Kanagawa positive whereas other characteristics were identical as the standard strain except it showed a positive reaction on Christensen's urea agar. V. parahaemolyticus urease production was directly related to urea concentration. The production of urease was noticeable by the addition of 0.2% urea, 0.5% glucose, 2% NaCl in LB broth, and the initial pH of 5.5. The maximum production reached after 6 hr of incubation at 37$^{\circ}C$. However, NiCl2, metal ions, phosphorus did not affect production of urease.
This study was carried out to determine the inhibitory effect of garlic juice against Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri. Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Virio. parahaemolyticus which are food pathogenic bacteria and Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactococcus. lactis, Leuconostoc mesenteroides which are lactic acid bacteria. An aqueous extract of garlic was bacteriocidal against Gram-positive and Gram-negative bacteria in all concentrations (0.1∼2.5(w/v)%) tested in this experiment. Especially 0.5(w/v)% garlic juice inactivated completely E. coli, S. typhimurium, S. flexineri, V. parahaemolyticus and 1.0(w/v)% garlic juice perfectly reduced P. aeruginosa, S. mutans. Generally, the experiment result indicate that garlic juice restrains the growth of the pathogenic bacteria better than the lactic acid bacteria. Therefore, garlic has potential for the preservation of processed foods.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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