This experiment was carried out to obtain the optimal liquid culture conditions for the mycelial growth and the polysaccharide production of Tricholoma matsutake. For the mycelial growth and polysaccharide production, the synthetic medium was optimized with containing glucose 40 g/L, yeast extract 30 g/L, $KH_2PO_4$ 1.5 g/L and $MgSO_4.7H_2O$ 1 g/L. The effects of agitation and aeration were investigated for the cell growth and the polysaccharide production in batch culture. The biomass and polysaccharide concentrations were 21.87 g/L at 150 rpm and 8.86 g/L at 300 rpm, respectively. And the biomass concentration and the polysaccharide production were 20.85 g/L at 0.5 vvm and 8.83 g/L at 1.5 vvm, respectively.
Lee, Wi Young;Ahn, Jin Kwon;Ka, Kang Hyeon;Park, Hyun
Journal of Korean Society of Forest Science
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v.95
no.3
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pp.358-364
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2006
This study was conducted to develop optimal solid culture medium for Tricholoma matsutake. As the solid matrix, granitic soil, perlite, vermiculate, pine sawdust and peat moss were compared regarding their effected on mycelial growth. Ergosterol content which is a fungal wall component was used as the growth index of the mycelia. Among the various solid matrixes, the granitic soil, perlite and mixture of the two supported the growth most. Barely flour appeared to be very effective on the stimulating of the mycelial growth when added to the solid matrix. An mixture of the matrix contained an even (1:1:1:1, v/v/v/v) mixture of granitic soil, perlite, vermiculate and pine sawdust. T. matsutake started growth 2 weeks after inoculation and reached stationary growth phase after 8th weeks in the solid matrix mixture. The mycelial density in the solid matrix was 7 times higher than that in fairy-ring soil. In addition, 30~70% water content and 10% humus soil in the solid matrix also supported good growth suggesting that T. matsutake needs humus soil for a nutrient sources. The solid matrix developed in the present study could be used to study physiological characteristics of T. matsutake as well.
Endophytes play an important role in the growth and development of the host. However, the study of endophytes is mostly focused on plants, and reports on bacteria associated with fungi are relatively rare. We studied the bacteria associated with fruiting bodies of Tricholoma matsutake picked from seven main T. matsutake-producing areas in Sichuan, China, by barcoded pyrosequencing. About 8,272 reads were obtained per sample, representing 40 phyla, 103 classes, and 495 genera of bacteria and archaea, and 361-797 operational taxonomic units were observed at a 97% similarity level. The bacterial community was always both more abundant and more diverse than the archaeal community. UniFrac analysis showed there were some difference of bacterial communities among the samples sites. Three bacterial phyla, Proteobacteria, Bacteroidetes, and Firmicutes, were dominant in all samples. Correlation analysis showed there was a significant correlation between some soil properties and bacterial community associated with T. matsutake. This study demonstrated that the bacteria associated with T. matsutake fruiting bodies were diversified. Among these bacteria, we may find some strains that can promote the growth of T. matsutake.
The spore of Tricholoma matsutake is considered to be the starting point of the mushroom growth cycle, but the mechanism of mycelial development from the spore stage is not yet clarified. In this study, we tried to measure how far the spores of T. matsutake disperse from a fruiting body located at a Pinus densiflora stand in Korea. We established 16 slide glasses coated with glycerin near a fruiting body in four directions separated by four different distance intervals within a mushroom productive stand after removing all other fruiting bodies from three plots. The number of dispersed spores increased with time from the first day (475 $spores/cm^2$) to the fourth day (836 $spores/cm^2$) after the pileus opened. The number of spores dispersed downward was about 1.5 times greater than that dispersed toward the ride. The number of dispersed spores decreased exponentially as the distance from each fruiting body increased. More than 95% of the spores dropped within a meter from the fruiting body, with 75% dropping within 0.5 m. Even so, the number of spores dispersed over 5 m from the fruiting body was more than 50 million when considering the total number of spores produced by a fruiting body is about 5 billion.
Tricholoma matsutake is a traditional favorite food in East Asia, cultivated in fairy rings called "shiro," which are found near Pinus densiflora. For effective artificial cultivation of Tri. matsutake, microorganisms from symbiotic fairy rings are co-cultivated. In this study, one bacterial isolate (Y22_B35) and two fungal isolates (Y22_F64 and Y22_F68) displayed growth-promoting effects on Tri. matsutake mycelium (158.47, 125.00, and 122.26% enhanced growth, respectively). For identification, 16S rRNA or ITS regions from the microorganisms¡¯ genomes were sequenced. Other sequences, including BenA, CaM, and RPB2 were sequenced in the fungal isolates. The bacterial isolate Y22_B35 was identified as Bacillus cereus. Y22_F64 and Y22_F68 were identified as Umbelopsis nana and Aspergillus parvulus, respectively. To identify the effects of the dominant microorganisms on Tri. Matsutake cultivation, metagenomic analyses were performed. Discovery of these Tri. matsutake mycelium growth-promoting microorganisms and metagenomics analyses are expected to contribute to our understanding of Tri. matsutake fruiting body growth and construction of biomimicry.
Tricholoma matsutake is an ectomycorrhizal fungus, related with the host of Pinus densiflora. Most of studies on T. matsutake have focused on mycelial growth, genes and genomics, phylogenetics, symbiosis, and immune activity of this strain. T. matsutake is known for its unique fragrance in Eastern Asia. The most major component of its scent is (R)-(-)-1-octen-3-ol and is biosynthesized from the substrate linoleic acid by the sequential reaction of lipoxygenase and peroxide lyase. Here, we report for the first time the biosynthesis of (R)-(-)-1-octen-3-ol of T. matsutake using the yeast Saccharomyces cerevisiae as a host. In this study, cDNA genes correlated with these reactions were cloned from T. matsutake, and expression studies of theses genes were carried out in the yeast Saccharomyces cerevisiae. The product of these genes expression study was carried out with Western blotting. The biosynthesis of (R)-(-)-1-octen-3-ol of T. matsutake in recombinant Saccharomyces cerevisiae was subsequently identified with GC-MS chromatography analysis. The biosynthesis of (R)-(-)-1-octen-3-ol with S. cerevisiae represents a significant step forward.
This study was carried out in order to produce useful material for the forest multiple use and forest protection by physico-chemical soil analysis of studied area in Sokwang-ri Forest Genetic Resource Protection Forest which was divided into in standard plots include Tricholoma matsutake and Sarcodon aspratus production forest. The result of physico-chemical soil analysis represented as following. The soil type of T. matsutake production forest was Dry brown forest soil(B1), while on the other hand the soil type of S. aspratus production forest was Moderately moist brown forest soil(B3). Between T. matsutake and S. aspratus production forest did not result in significant changes in soil pH(5.22-5.60) and soil depth(47cm), but available phosphorus, carbon, and nitrogen contents were different results. CN ratio of the fairy ring of T. matsutake was quite lower than that in S. aspratus production forests, which indicated that T. matsutake production forest was built up in the relatively immature soils which contain little organic matter. Generally, it was predicted that Pinus densiflora for. erecta forest succeeded to deciduous tree forest in stable soil environments. To conserve these T. matsutake and S. aspratus production forest, the contents of available phosphorous and exchangeable cation should be increased by continuous soil environment management and it should be established the secondary growth forests of old aged Pinus densiflora for. erecta trees as soon as possible.
Ka, Kang-Hyeon;Hur, Tae-Chul;Park, Hyun;Kim, Hee-Su;Bak, Won-Chull
The Korean Journal of Mycology
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v.38
no.1
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pp.16-20
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2010
Transplantation of matsutake-infected pine tree into a pine forest has great potential as an artificial cultivation method of Tricholoma matsutake. Matsutake-infected pine trees had previously transplanted by this research group into the experimental area from 2001 to 2004 and its survival rate determined in 2006 was 20%. For the survived samples, the characteristics of mycelial growth and the development of fairy-ring formation of T. matsutake have been evaluated until 2009. It was found that size of the indeterminate ring showed significant differences among the individual trees and varied from $4\;cm\;{\times}\;4\;cm$ to $52\;cm\;{\times}\;35\;cm$. The variation was possibly resulted from the differences in production area of the matsutake-infected pine tree and those in site characteristics of the transplanted spots. For the characteristics of mycelial growth, it grew in the shape of a cudgel or an acute-angled 'V' in early stage, and then the shape became more wider and changed into an obtuse-angled 'V' as time passed. We expect that matsutake mushrooms may occur from the fairy-rings of some of these matsutake-infected pine trees in the autumn of 2010.
Kim, In-Yeup;Jung, Gwang-Reul;Han, Sang-Kuk;Cha, Joo-Young;Sung, Jae-Mo
The Korean Journal of Mycology
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v.33
no.1
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pp.22-29
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2005
The main objectives of this research were to study the cultural and nutritional characteristics of Tricholoma matsutake and to establish its liquid culture system. The optimum growth of T. matsutake was observed in HA and TMM agar media. Similarly highest growth was observed in PDB and TMM liquid media. The optimal temperature for the mycelial growth was $25^{\circ}C$. The most suitable carbon source was dextrin among 12 different carbon sources tested. Yeast extract and peptone were best nitrogen sources among 17 different sources tested. The optimum mineral salts were $Fe_{2}(SO_{4})_{3}{\cdot}H_{2}O$ and KCl among 9 different sources tested. Shaking culture gave higher mycelial growth compared to stationary culture. Similarly, optimum medium amount for shaking culture was 100 ml per 250 ml flask. The highest mycelial growth was obtained when $5{\sim}7$ mycelial discs were inoculated in 100 ml of medium and incubated for $8{\sim}9$ weeks, respectively. The highest proportion of mycelial growth was observed at 40 : 1 ratio of medium to inoculum volume in 8 l air-lift fermenter.
Kim, Miae;Yoon, Hyeokjun;You, Young-Hyun;Kim, Ye-Eun;Woo, Ju-Ri;Seo, Yeonggyo;Lee, Gyeong-Min;Kim, Young Ja;Kong, Won-Sik;Kim, Jong-Guk
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.23
no.10
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pp.1347-1356
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2013
Tricholoma matsutake, an ectomycorrhiza that has mutual relationships with the rootlet of Pinus denisflora, forms a fruiting body that serves as a valuable food in Asia. However, the artificial culture of this fungus has not been successful. Soil fungi, including T. matsutake, coexist with many other microorganisms and plants; therefore, complex microbial communities have an influence on the fruiting body formation of T. matsutake. Here, we report on the structures of fungal communities associated with the fairy ring of T. matsutake through the pyrosequencing method. Soil samples were collected inside the fairy ring zone, in the fairy ring zone, and outside the fairy ring zone. A total of 37,125 sequencing reads were obtained and 728 to 1,962 operational taxonomic units (OTUs) were observed in the sampling zones. The fairy ring zone had the lowest OTUs and the lowest fungal diversity of all sampling zones. The number of OTUs and fungal taxa inside and outside the fairy ring zone was, respectively, about 2 times and 1.5 times higher than the fairy ring. Taxonomic analysis showed that each sampling zone has different fungal communities. In particular, out of 209 genera total, 6 genera in the fairy ring zone, such as Hemimycena, were uniquely present and 31 genera, such as Mycena, Boletopsis, and Repetophragma, were specifically absent. The results of metagenomic analysis based on the pyrosequencing indicate a decrease of fungal communities in the fairy ring zone and changes of fungal communities depending on the fairy ring growth of T. matsutake.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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