본 연구는 제주도에 자생하는 차나무과 식물을 대상으로 식품소재 또는 생약으로의 활용 방안을 모색하고자 angiotensin I converting enzyme(ACE) 저해활성, aminopeptidase N(APN) 저해활성 및 $\alpha$-amylase 저해활성을 조사하고, 항산화활성을 검색하고 TLC를 이용하여 분석하였다. ACE 저해활성은 후피향나무(수피)와 비쭈기나무(잎)에서 50% 이상의 저해활성을 보였으며, APN 저해활성은 비쭈기나무(잎과 수피)와 후피향나무(수피)에서만 양의 활성을 보였다. $\alpha$-amylase 저해활성은 동백나무(열매), 우묵사스레피나무(수피), 후피향나무(수피)와 차나무(줄기)에서 30% 이상의 저해활성을 보였다. 항산화활성은 비쭈기나무(수피), 후피향나무(수피), 차나무(잎)에서 30% 이상의 다소 높은 전자공여능을 나타내었다. 특히, 비쭈기나무(수피)는 dot-blot test에 의해 다른 종에 비해 활성이 높아 $1.25\;{\mu}g/ml$의 낮은 농도에서도 높은 항산화활성을 보였다. TLC 분석에 의해 비쭈기나무(수피)에서 EGC(Rf 0.26) 활성이 높았으며, 비쭈기나무, 우묵사스레피나무, 후피향나무의 수피에서 EGCG(Rf 0.09) 활성이 높게 검출되었다. 그리고, 표준 catechin류와는 다른 것으로 보이는 5개의 밴드(Rf 0.54, 0.46, 0.44, 0.16, 0.03)는 Folin-Ciocalteu Reagent 방법과 Ferric chloride-alcohol 방법을 이용하여 polyphenol류인 것으로 추정되었다. 이상의 결과를 토대로 사스레피나무를 제외한 차나무과 식물들은 생리활성이 높아 식품 소재 또는 생약으로의 활용이 가능할 것으로 보이며, 활성성분의 분리 및 동정 그리고 이들 물질을 이용한 임상실험 등 보다 심도있는 연구가 필요할 것으로 보인다.
본 연구는 산돌배나무(Pyrus ussuriensis) 잎에서 추출한 분획물의 항산화능을 조사하여 화장품소재로 적용 가능성을 확인하기 위하여 수행하였다. 산돌배나무 잎을 채취하여 건조시킨 후 분쇄하여 60% acetone-$H_2O$(6:4, v/v)로 추출하고, 아세톤 가용부를 분획하여 동결건조 시켰다. 아세톤 및 물 가용부를 Sephadex LH-20으로 충진한 칼럼에서 메탄올 MeOH을 용출용매로 사용하여 칼럼크로마토그래피를 실시하고 또한 MeOH를 전개용매로 사용한 MICgel을 이용했다. 단리된 화합물들은 Silica-gel TLC로 확인하였다. 폴리페놀 함량은 산돌배나무 잎의 아세톤 분획물에서 914 mg/g으로 정량되어 높은 함량이었다. 산돌배나무 잎의 아세톤 분획물을 이용하여 항산화효과를 분석하여 얻은 결론을 요약하면 다음과 같다. 전자공여능의 경우 산돌배나무 잎의 아세톤 분획물의 100 ppm농도에서 80%이상의 전자공여능을 나타내었다. 산돌배나무 잎의 아세톤 분획물 중 한 분획물의 Superoxide dismutase(SOD) 유사활성은 1000 ppm에서 77%의 활성을 보였다. 분획물의 Xanthine oxidase 저해능은 10 ppm에서 38%의 저해률을 보였다. 이상의 결과로 미루어 보아 산돌배나무 잎의 아세톤 분획물은 항산화효과를 가진 천연소재임을 확인할 수 있었다.
동결 오디(Mulberry) 10 kg을 80% 에탄올(EtOH)로 추출하고 분획깔때기 상에서 헥산(n-hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 물 가용부로 분획하였다. 에틸아세테이트 가용부(22 g)를 Sephadex LH-20으로 충진한 칼럼에서 MeOH-$H_2O$ (2 : 1~1 : 3, v/v)을 용출용매로 사용하여 칼럼크로마토그래피를 실시하였다. 단리된 화합물들은 셀룰로오스 박층크로마토그래피(TLC)로 확인한 후 $^1H-$, $^{13}C$-NMR 등의 스펙트럼을 사용하여 정확한 구조를 구명하였고 FAB 및 EI-MS로써 분자량을 측정하였다. 오디의 에틸아세테이트 가용부에서 quercetin-3-O-${\beta}$-D-glucopyranoside (화합물 1), protocatechuic acid (화합물 2), p-hydroxybenzoic acid (화합물 3)을 단리할 수 있었다. 항산화 시험 결과 에틸아세테이트와 물 가용부에서 BHT보다 우수한 활성을 나타내었으며 MTT assay에 의한 세포생존율 측정결과 세포독성은 없는 것으로 나타났다. 또한, 미백활성 및 항암활성은 낮았지만 세포신장 효과가 우수하여 주름개선 화장품 소재로서 충분히 이용 가능성이 있는 것으로 판단되어 진다.
수삼 및 수삼을 기질로 한 배양물로부터 조사포닌을 분리하여 TLC를 확인한 결과 목질진흙버섯 및 영지버섯 균사체 배양물 조사포닌에서 $Rg_{2}$와 $Rh_{1}$ 위치에서 spot을 볼 수 있었으며, 노루궁뎅이버섯 균사체 배양물에서는 $Rg_{3}$와 $Rh_{1}$과 같은 위치에서 spot을 볼 수 있었다. 배양물의 총페놀성 화합물 함량은 수삼, 목질진흙버섯, 영지버섯 및 노루궁뎅이버섯 균사체 배양물 조사포닌에서 1.04, 1.11, 1.45, 1.29%로 나타나 수삼보다는 수삼 배양물에서 높았으며, 특히 영지버섯 균사체 배양물에서 가장 높은 폐놀성 화합물 함량을 나타내었다. 수삼 배양물 조사포닌의 전자공여능의 경우 목질진흙버섯 균사체 배양물 1mg/mL 및 10mg/mL에서 각각 92.8, 94.9%로 가장 높았다. 지질과산화 억제효과는 영지버섯 균사체 배양물 조사포닌이 29.5%로 목질진흙버섯 균사체나 노루궁뎅이버섯 균사체 배양물 보다 높았다. Tyrosinase 저해활성은 영지버섯 균사체 배양물 조사포닌이 65.5%로 가장 높았다.
본 연구는 머루종자 에탄올 추출물로부터 항산화 활성물질을 분리 동정하고 분리 물질의 항산화 활성을 검토하기 위하여 수행되었다. 머루종자 70% 에탄올 추출물로부터 hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol, 및 수용액으로 순차 용매분획하여 그들의 항산화 활성 및 환원력을 비교한 결과, ethyl acetate층이 가장 강한 활성을 나타냈으며, 각 획분의 TLC-DPPH 분석에서도 ethyl acetate층에서 현저히 높은 항산화활성을 보인 화합물의 존재가 확인되었다. 이에 ethyl acetate층을 대상으로 ODS column chromatography 및 HPLC를 이용하여 활성본체를 단리하고, 1H-NMR 분석을 통하여 (+)-catechin으로 동정하였다. 머루종자 중의 (+)-catechin 함량은 52.7 mg/100 g으로 확인되었으며, (+)-catechin이 머루종자 중의 주요한 항산화 물질로서 사료되었다. 한편, 같은 농도$(15\;{\mu}g/{\mu}L)$에서 (+)-catechin과 ethyl acetate 분획물의 DPPH radical 소거활성이 약 80%로 비슷한 결과를 나타낸 것으로 보아 ethyl acetate 분획물에는 (+)-catechin이외의 미확인 물질들이 서로 상승작용을 하여 강한 항산화 활성을 나타내는 것으로 판단되었다.
본 연구에서는 저온진공조건에서 추출 시간과 농도에 따른 녹차 열수추출조건을 최적화한 후 HP-20 column으로 caffeine을 제거한 녹차 추출물을 이용해 theanine 함유 기능성 젤리를 제조하였다. 또한, theanine 함유 젤리의 품질 특성, 제형안정성 및 항산화 효과, AChE 억제능을 조사하였다. 최적추출조건은 8% 녹차 분말을 2시간 추출하여 theanine 0.95 mg/mL, GABA 0.28 mg/mL, caffeine 1.45 mg/mL 추출액을 HP-20 column을 이용해 80% 에탄올로 카페인을 제거하였다. 3종의 겔화제와 농도별로 4종의 theanine 추출물 S1-S4(10-50%)을 제조해 품질 특성을 조사한 결과, 젤리에 theanine 추출물이 많을수록 L값과 b값이 증가하였다. 젤리의 물리적 특성을 조사한 결과, 3가지 겔화제 중 타마린드검, 잔탄검, 로거스트콩검(2:3:5=w/w/w)을 조합한 겔화제 III이 경도와 점착성이 낮고 탄력성이 높아 조직감이 가장 뛰어났다. 제형안정성 조사 시, 35%가 첨가된 S3가 이수율 25.88%과 붕괴율 1.31%로 우수한 제형안정성을 나타냈다. 또한 theanine 함유 젤리는 95℃, 30분간 가열조건에도 theanine과 GABA 성분이 파괴되지 않고 대부분 잔존하는 것을 TLC와 LC-MS 분석을 통해 확인했다. Theanine 추출물의 농도가 높을수록 DPPH radical 소거능은 증가하며, S4(50%)는 0.075 mg/mL ascorbic acid 수준과 유사한 항산화력을 나타냈다. AChE 저해 효과는 S3(35%)가 가장 높았으며 이는 donepezil 2.5 μM과 동일한 수준의 AChE 저해 활성을 나타냈다. 따라서 본 연구는 녹차 추출물에서 caffeine을 제거한 theanine 추출물로 기능성 젤리를 제조하였으며 품질 특성을 조사하였다.
약용식물인 도꼬마리 추출물을 사용하여 유산균을 이용한 단일 및 복합배양을 통하여 새로운 기능성 물질의 생산을 검토하였다. 도꼬마리 추출물의 유산발효 시 단일배양 결과에서 유산생산을 통해 대체로 잘 증식하는 것이 확인되었으며, H. pylori의 항균 활성은 단일배양보다 복합배양 시 항균활성이 아주 우수하였다. 항균성 물질의 분리는 $C_{18}$ Seppak cartridge에 흡착시켜 30% methanol 용출획분에서 항균성물질이 확인되었으며, TLC로 분석한 결과 $R_f$ 0.46의 위치에서 항균성 물질을 확인하였다. 도꼬마리 유산발효액의 항산화활성은 총 polyphenol 함량 및 radical 소거능을 검토하였으며, 그 결과 총 polyphenol 함량은 미발효시에 비해 도꼬마리 추출물의 저농도에서 단일배양의 경우 2~4배 증가하였으며, Lactobacillus brevis KCTC 3498과 Lactobacillus helveticus KCTC 3545를 복합배양한 경우 1 mg/mL 첨가농도에서 polyphenol이 가장 높게 나타났다. Radical 소거능은 도꼬마리 추출물을 0.1 및 0.5 mg/mL로 첨가하여 발효하였을 때 30~40%의 scavenging이 확인되어 발효를 하지않았을 때 (25%)보다 발효를 하였을 때 높아지는 것으로 나타났다. 특히 Lactobacillus casei KCTC 3109의 경우 0.1 mg/mL의 농도에서 70%의 scavenging을 나타내었다. 이들 결과로부터 도꼬마리 추출물의 유산발효는 미발효시에 비해 Helicobactor pylori에 대한 항균활성물질의 생산과 기능성물질인 항산화물질의 생산성이 우수하다고 사료되었으며 천연한약재의 발효를 통한 천연물 신약 등 신기능물질의 생산가능성을 확인하였다.
Objective: The study was carried out to evaluate the hepatoprotective and antioxidant potential of Ziziphus mucronata (ZM) fruit extract. Methods: The different types of fruit extract were prepared by soaking the dry powdered fruit in different solvents followed by rotary evaporation. Each extract was tested for its phenol content and antioxidant activities. An in vivo study was performed in Sprague-Dawley (SD) rats. Thirty adult male SD rats (aged 21 weeks) were divided into six groups of five rats each and treated as follows: The normal control (NC) received distilled water while the dimethoate control (DC) received 6 mg/kg.bw.day-1 dimethoate dissolved in distilled water. The experimental groups E1, E2, E3, and E0 received dimethoate (6 mg/kg.bw) + ZMFM (100 mg/kg.bw-1), dimethoate (6 mg/kg.bw) + ZMFM (200 mg/kg.bw-1), dimethoate (6 mg/kg.bw) + ZMFM (300 mg/kg.bw-1), and ZMFM (300 mg/kg.bw-1) only. Both the normal control and the dimethoate control groups were used to compare the results. After 90 days, rats were sacrificed, blood was collected for biochemical assays, and livers were harvested for histological study. Results: High phenol content was estimated, and 2, 2-diphenyl-1-picryl hydrazyl radical (DPPH) spectrophotometric, thin layer chromatography (TLC) and 2, 2-Azobis-3-ethyl benzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) assays showed a high antioxidant activity among the extracts. The preventive effects observed in the E1, E2 and E3 groups proved that the extract could prevent dimethoate toxicity by maintaining normal reduced glutathione (GSH), vitamin C and E, superoxide dismutase, catalase, cholineasterase and lipid profiles. The preventive effect was observed to be dose dependent. The EO group showed no extract-induced toxicity. Histological observations agreed with the results obtained in the biochemical studies. Conclusion: The study demonstrated that ZM methanol fruit extract is capable of attenuating dimethoate-induced toxicity because of its high antioxidant activity.
배추김치의 dichloromethane 획분의 수율은 약 1.66% 이었으며, 이로부터 silica gel column chroamtography, Sepadex LH-20 column chromatography, Sep-pack catridge 등을 이용하여 활성물질을 분리 정제하였고, IR, EI-MS, GC-MS. $^{1}H-NMR,\;^13C-NMR$로 구조를 확인하여 분자량 226인 3-(4'-hydroxyl-3',5'-dimethoxyphenyl)propionic acid로 밝혀다. 비추김치 활성성분의 DPPH 유리기 소거능은 vitamin C에 비해 3.4배 높았고, LDL 산화억제 효과는 대조군에 비해 현저히 높아 인체에서 지질저하 효과 및 동맥경화 억제 효과가 있을 것으로 예상된다.
홍삼및 백삼에서 용매추출법(溶媒抽出法)에 의해 fr. 1과 fr. 2를 분리하여 양자의 차이점(差異點)을 몇가지 관점에서 조사하고 홍삼에서 강하게 나타나는 항산화(抗酸化) 활성물질(活性物質)을 단리(單離)하여 실험한 결과는 다음과 같다. 1. fr. 1과 fr. 2에서의 항산화(抗酸化) 활성(活性)은 공히 홍삼(紅蔘) 분획(分劃)이 백삼(白蔘) 분획(分劃)보다 강했다. 2. 홍삼의 fr. 2에 비해 fr. 1이 비활성(比活性)이 훨씬 강했다. 3. 홍삼의 fr. 1에서 단리(單離)한 Spot a는 강력한 항산화 활성을 가졌으로 indophenol용액을 탈색(脫色)시켰다. 4. 홍삼의 fr. 2에서 단리(單離)한 Spot b도 항산화활성물질(抗酸化活性物質)로서 남색의 indophenol용액을 홍색으로 변색시켰다. 5. 인삼제품으로부터 fr. 1과 fr. 2를 분리하여 TLC 또는 HPLC에 의해 그 패턴을 조사하며 원료삼(原料蔘)이 홍삼인지 백삼인지 식별(識別)할 수 있는 지표(指標)로 활용할 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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