Trypsin inhibtor produced by Streptomyces sp. S-217 was purified by solvent extraction and various column chromatographies. and physico-chemical properties of the inhibitor were investigated. Inhibitor complex was formed for incubation of 10 min. Streptomyces 5-217 showed the highest production of trypsin inhibitor when it was cultivated at $37^{\circ}C$ for 66 hr in the medium containing 2% mannitol & 0.9% peptone, pH 7.0. Trypsin inhibitor was purified by column chromatography and high performance liquid chromatography. Trypsin inhibitor indicated the maxium wavelength at 215 nm and solubilities in water, methanol and dimethyl sulfoxide were 95, 70 and 75%, respectively. The concentration of 50% inhibition ($IC^{50}$) was 15 $\mu$g/ml. The inhibitor was stable on heating at $100^{\circ}C$ for 60 min in pH 5~9 and was more stable in alkaline region than acidic region.
Cultural conditions for $\alpha$-D-Glucosidase Inhibitor production from Streptomyces sp. YS-221-B isolated from soil arid identified as Streptomyces flauovirens or a subspecies of it were investigated. When the strain was cultured in a flask containing 2% glucose, 0.3% asparagine, 0.0002% riboflavin, 0.05% $K_2$HPO$_4$, 0.1% MgSO$_4$.7$H_2O$, 0.05% NaCl, pH 8.0 at 3$0^{\circ}C$, maximum production of the inhibitor was obtained after 8-9 days of cultivation. Sugar alcohols such as mannitol, i-inositol, erythritol as carbon sources, asparagine and beef extract as nitrogen sources were favorable for inhibitor production. Among vitamins, riboflavin, p-aminobenzoic acid, pyridoxamine and folic acid promoted the production of inhibitor, but depressed by the addition of hesperidine, and also depressed by cobalt, lithium and ferrous salts.
A crystalline alkaline pretense- producing Streptomyce sp. YSA-130 was isolated from soil in alkaline medium(pH 10.5). The optimum culture condition of Streptomyce sp. YSA-130 for the production of alkaline protease was as follows; 2.0% soluble starch, 1.0% soytone, 0.3% $K_2$HPO$_4$, 0.02% MgSO$_4$.7$H_2O$, 0.8% Na$_2$CO$_3$, pH 10.5, 3$0^{\circ}C$, and 12 hr. The alkaline pretense from the culture broth of Streptomyce sp. YSA-130 was purified about 24 folds by ammonium sulfate precipitation , dialysis, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, gel filtration on Sephadex G-15 and crystallization. Optimum temperature and pH of purified enzyme were 6$0^{\circ}C$, and 11.5. Temperature and pH stability of purified enzyme were 5$0^{\circ}C$, and 5.5-12.0. Calcium ion was effective to stabilize the enzyme at higher temperature. The molecular weight of the purified enzyme was approximately 30,000. The purified enzyme was inactivated by diisopropyl flurophosphate(DFP) but not affected by metal ion, EDTA, sulfhydryl reagent and stable detergent.
A strain of Streptomyces sp producing chitinase was isolated from soil and its cultural condition and some properties of this enzyme were investigated. When 0.375 per cent of glucose was added to basal medium, this organism produced the most quantities of this enzyme after shaking culture at 3$0^{\circ}C$ for 48 hrs., while the production of the enzyme was repressed at the more concentration of glucose than that. The enzyme had a optimal pH of 7.0, optimal temperature of 5$0^{\circ}C$ and the activity of that was not decreased by heat treatment for 20 minute at 7$0^{\circ}C$. And then the activity was increased by Co$^{2+}$ but was slightly inhibited by Hg$^{2+}$, Ni$^{2+}$, Pb$^{2+}$.EX> 2+/.
In order to develop new anti-inflammatory agents having different action mechanisms compared with nonsteroidal and steroidal anti-inflammatory drugs, the culture broths of various actinomycetes isolated from soil were screened using an in vivo mouse ear edma assay and one strain (Streptomyces sp. MT 2705-4: KCTC 8651 P) was selected. Activity-guided purification led to the isolation of a polyether compound, dianemycin. Topically, dianemycin showed a potent anti-inflammatory activity in mouse ear edema induced by croton-oil or arachidonic acid.$ED_{50}$value of dianemycin was found to be 0.8 mg,/ear compared to 0.4 mg/ear of prednisolone in croton-oil ear edema. However, dianemycin did not show the inhibitory activity in UV-erythema and delayed hypersensitivity reaction. These results indicate that dianemycin is a potential topical anti-inflammatory agent.
This study was conducted to investigate physicochemical and microbiological properties on waste composts of mushroom. The waste compost of mushroom consisted of 43.29% organic matter(O.M.), 27.0 O.M./Nitrogen, 1.60% total nitrogen, 46.48% water content, 0.64% salt content, 1.32% $P_2O_5$ 1.18% $K_2O$ and dry base. The microorganisms in the waste compost of mushroom were counted $1.6{\times}10^{10}cfu/g$. The main population of aerobic bacteria were Bacillus lentimobus, B. coagulans, B. brevis, Clostridium thermocellum, Escherichia coli, Streptomyces thermovulgaris, S. thermofuscus, Micropolyspora faeni, Aspergillus sp. and Penicillum sp..
The extracellular endoinulase from Streptomyces sp. 556 was purified and characterized, The culture broth was fractionated by ammonium sulfate saturation followed by DEAE-cellulose column chromatography and 5ephadex G-200 gel filtration, The ultimately purified fraction revealed a single band in 7.5% polyacrylamide gel electropherogram. The purified enzyme showed the maximal activity at pH 5.5-6.0 and $50^{\circ}C$, but lost 93% of inulase activity after 30 min incubation at $55^{\circ}C$ . The essen.tial amino acid residue for catalytic activity appeared to be tryptophan. This endo inulase was activated by $Mn^{2+}$, whereas inactivated by $Ag^{+}$, $Hg^{+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{3+}$ and $Mo^{6+}$ EDTA and 8-hydroxyquinoline inhibited the enzyme so that the enzyme was considered to be a metalloenzyme. The Km value for inulin was 0.287 mM, and no invertase or $\alpha$-glucosidase activity was found in the enzyme.
Stenotrophomonas sp. OK-5 capable of degrading TNT has been found to have three nitroreductase fractions designated as NTR fractions I, II, and III. NTR in a previous study. This study was attempted to reveal physiological and molecular characteristics of NTR fractions I, II, and III in strain OK-5. Several chemicals (e.g., EDTA, NaCl, dithiothreitol, $\beta$-mercaptoethanol) were tested for their effect on enzyme activity of NTRs, demonstrating that enzyme activities of NTR fractions I, II, and III from OK-5 were inhibited in the presence of $\beta$-mercaptoethanol. Substrate specificity test showed that NTR fractions I, II, and III all have over 70% enzyme activities for nitrobenzene or RDX as a substrate. N-terminal amino acid sequence of NTR fraction I from Stenotrophomonas sp. OK-5 was $^1MSDLLNADAVVQLFRTARDS^20$ and exhibited 70% sequence homology with that of NTR from Xanthomonas campestris. NTR I gene from Stenotrophomonas sp. OK-5 (SmOK5nrI) shared extensive sequence homology in deduced amino acid sequence of PCR product with NTRs from Xanthomonas campestris (81 %), X. axonopodis (75%), Streptomyces avermitilis(30%), whereas they had low homology with that from P. putida KT2440 (pnrB) (16%).
Virginiae butanolide C(VB-C) is one of the butyrolactone autoregulators, which triggers the production of virginiamycin in Streptomyces virginiae. In order to investigate the function of VB-C as inducer in other strains, Streptomyces erythraeus was used as a test strain(parent). VB-C binding receptor gene was introduced into S. erythraeus(transformant) and the production of VBs and specific VB-C binding protein were analysed in parent and transformant. When 300ng/ml of the synthetic VB-C was added at 0, 20, 44 h cultivation of the parent and at 44 h cultivation of the transformant, the initial production times a antibiotics were shortened by more than 8 and 6 h, respectively. The transformant showed strong antibiotic activity against B. subtilis. These results suggest that the VB-C might have an ability to induce the production of secondary metabolites in S. erythraeus.
Pasteurella haemolytica is well known to cause severe pneumonia, consolidation and oedema of the lung, and fibrinous pleurisy under the stress and infection of virus in the cattle. In the course of our screening for antimicrobial agents against P.haemloytica, compound 51086 has been isolated from the fermentation broth of Streptimyces sp. 51086. The compound 51086 was purified by SiO2, Sephadex LH-20 and ODS column chromatographies and HPLC, subsequently. The structure of compound 51086 was determined as hygromycin A by combination of 1H NMR, 13C NMR, HMBC, and ESI-MS. This compound showed significant antibacterial activity against P.haemolytica and P.multocida.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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