In order to establish the enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) of sterigmatocystin produced by Aspergillus versicolor, we experimented and obtained following results. Two of three rabbits which had been immunized with sterigmatocystin-hemiacetal-BSA produced antibodies against sterigmatocystin at 15 weeks. The produced antibodies were specific for sterigmatocystin and sterigmatocystin-hemiacetal but didn't cross react with other sterigmatocystin analogues in a significant degree. DMF : 4% KC1 (18 : 2) mixed solution was most effective to dissolve sterigmatocystin. For the preparation of sample solution to determine sterigmatocystin by ELISA, sample was extracted with CHC13 and dried, than the dried sample was redissolved with 100 ${mu}ell$ DMF + 4% KC1 mixture. 10~1,000 ng/$m\ell$ level of standard sterigmatocystin could be applied to the established ELISA. When artifically contaminated rice were assayed by the ELISA, the average recovery of sterigmatocystin spiked to 25~500 ng/g was 109% (97~116%), and mean interwell coefficient of variation was 21% (11~28%).
Sterigmatocystin bears a close structural relationship to aflatoxin $B_1$ and is a carcinogenic compound that has been shown to affect various species of experimental animals. Reaction and toxicity of sterigmatocystin in the artificial gastric juice were investigated. Sterigmatocystin was degraded in artificial gastric juice and extracted by the method of A.O.A.C. After cleaned up by silica gel column chromatography, this substance was detected and characterized by thin layer chromatography, UV, IR and mass spectra. It showed $R{\mathcal{f}}$ 0.4 and brick-red color by TLC. Especially, in the mass spectrum of it, fragment peak at m/e 327 was due to the loss of the $-CH_3$ and $-H_2O$, fragment peak at m/e 341 was due to the loss of the $H_2O$ and $-H^+$, and fragment peak at m/e 239 was due to the loss of the 2-chloro-tetrahydrofuran and methyl group from the parent molecule. Therefore, a degraded substance of sterigmatocystin reacted in artificial gastric juice (Sub. K) was estimated with additional formation of hydrochloric acid. In four-day-old chicken embryos, the mean lethal dose $(LD_{50})$ was $140\;{\mu}g/egg$, and 90 to 100% of the embryos were killed with 1 mg/egg. This $LD_{50}$$140\;{\mu}g/egg$ compared with an $LD_{50}$$14.69\;{\mu}g/egg$ for sterigmatocystin (acute toxicity) showed the substance to be much less toxic than sterigmatocystin.
무우에 함유된 allylisothiocyanate의 첨가가 Aspergillus parasiticus R-716의 배양시 sterigmatocystin, 지질, 단백질, RNA, citrate 및 AMP 등의 각종 대사산물의 생합성에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 aflatoxin의 전구체인 sterigmatocystin의 함량은 배양 48시간 후에는 50ppm allyli-sothiocyanate 첨가구가 대조구보다 낮게 나타난 반면, 144시간째부터는 첨가구가 대조구보다 오히려 높게 나타났다. Allylisothiocyanate의 첨가로 Aspergillus parasiticus R-716의 배양액에서 citrate는 높은 함량을 나타내었으며, 또한 균체내 지질, 단백질, RNA의 함량은 높게 나타났으나 AMP 함량은 낮았다.
RNA-binding proteins are involved in RNA metabolism and posttranscriptional regulation of various fundamental biological processes. The PUF family of RNA-binding proteins is highly conserved in eukaryotes, and its members regulate gene expression, mitochondrial biogenesis, and RNA processing. However, their biological functions in Aspergillus species remain mostly unknown in filamentous fungi. Here we have characterized the puf genes in the model organism Aspergillus nidulans. We generated deletion mutant strains for the five putative puf genes present in the A. nidulans genome and investigated their developmental phenotypes. Deletion of pufA or pufE affected fungal growth and asexual development. pufA mutants exhibited decreased production of asexual spores and reduced mRNA expression of genes regulating asexual development. The pufE deletion reduced colony growth, increased formation of asexual spores, and delayed production of sexual fruiting bodies. In addition, the absence of pufE reduced both sterigmatocystin production and the mRNA levels of genes in the sterigmatocystin cluster. Finally, pufE deletion mutants showed reduced trehalose production and lower resistance to thermal stress. Overall, these results demonstrate that PufA and PufE play roles in the development and sterigmatocystin metabolism in A. nidulans.
The prevalence and population density of the mycobiota of 50 samples belonging to 10 kinds of spices (anise, black pepper, red pepper, black cumin, peppermint, cardamom, clove, cumin, ginger and marjoram) which collected from different places in Jeddah Governorate were studied. The natural occurrence of mycotoxins in those samples was also investigated. Fifteen genera and thirty-one species of fungi in addition to one species variety were isolated and identified during this study. The most common genera were Aspergillus, Penicillium and Fusarium. Aflatoxins ($12{\sim}40\;{\mu}g/kg$) were detected in the extract of 5 samples of each of anise seeds and black pepper fruits; three samples of black cumin seeds and on sample only of each of peppermint and marjoram leaves out of 5 samples tested of each. Sterigmatocystin ($15{\sim}20\;{\mu}g/kg$) was detected in some samples of red pepper, cumin and marjoram. The inhibitory effects of 10 kinds of powdered spices were tested against 3 toxigenic isolates of fungi (Aspergillus flavus, A. versicolor and Penicillium citrinum). Clove proved to be antimycotic compounds. It inhibited the growth of the tested toxigenic fungi. Black pepper, peppermint, cardamom, cumin and marjoram completely inhibited aflatoxins production, while black pepper and cardamom also completely inhibited sterigmatocystin production.
An endophytic fungus strain DYSJ3 was isolated from a stem of Aphanamixis grandifolia Blume, which was identified as Aspergillus versicolor based on the morphological characteristics, internal transcribed spacer (ITS) and calmodulin gene sequences analyses. A. versicolor DYSJ3 exhibited strong antagonistic activity against Colletotrichum musae, C. gloeosporioides and Fusarium oxysporum f. sp. cubense with the inhibition rates of 61.9, 51.2 and 55.3% respectively. The antifungal metabolites mainly existed in the mycelium of A. versicolor DYSJ3, and its mycelial crude extract (CE) had broad-spectrum antifungal activities against plant pathogenic fungi. The CE had a good thermal stability, and the inhibition rate of 100 mg/mL CE against C. musae was above 70.0% after disposing at 120 ℃ for 1 h. Five secondary metabolites were isolated from the CE and identified as averufanin, ergosterol peroxide, versicolorin B, averythrin and sterigmatocystin. Activity evaluation showed versicolorin B exhibited inhibitory effects on the mycelial growth and conidial germination of C. musae, and sterigmatocystin had a weak inhibitory effect on the mycelial growth of C. musae.
The velvet regulators VosA and VelB are primarily involved in spore maturation and dormancy. Previous studies found that the VosA-VelB hetero-complex coordinates certain target genes that are related to fungal differentiation and conidial maturation in Aspergillus nidulans. Here, we characterized the VosA/VelB-inhibited developmental gene vidD in A. nidulans. Phenotypic analyses demonstrated that the vidD deleted mutant exhibited defect fungal growth, a reduced number of conidia, and delayed formation of sexual fruiting bodies. The deletion of vidD decreased the amount of conidial trehalose, increased the sensitivity against heat stress, and reduced the conidial viability. Moreover, the absence of vidD resulted in increased production of sterigmatocystin. Together, these results show that VidD is required for proper fungal growth, development, and sterigmatocystin production in A. nidulans.
농산물 및 그 가공식품을 수확·저장·가공하는 기간중에 Aspergillus parasiticus가 오염되어 aflatoxin을 생성하는 것을 방지할 목적으로 생육배지에 graefruit 종자추출물(GFSE)을 처리하여 곰팡이의 생육 및 aflatoxin 생합성을 저해하는 뚜렷한 효과를 관찰할 수 있었다. 4000 ppm의 GFSE농도 처리로 Aspergillus parasiticus의 생육을 92% 저해하였으며, 5000ppm 농도에서는 곰팡이 생육을 완전히 저해하였고 3000ppm 이상의 농도에서 aflatoxin 의생성을 100% 억제하였다. 한편, GFSE 처리에 의하여 aflatoxin 생합성 경로증, averufin, versiconal acetate 등의 중간대사산물이 aflatoxin으로 주입되는 것이 완전히 저해된 반면, versicolorin A, versicolorin A hemiacetal, sterigmatocystin 등은 aflatoxin 으로 전환되는 결과를 보여주어 GFSE는 versiconal acetate를 포함한 그 이전의 중간 대사물이 반응기질이 되는 효소 반응계를 저해하는 것으로 나타났다. 전자현미경을 이용한 곰팡이균체 및 포자의 형태변화는 GFSE처리에 의하여 세포막기능에 파괴되어 세포구성 내용물이 유실되고 곰팡이가 사멸하고 aflatoxin 생합성 기작이 중단되는 결과를 초래하였다.
Seo-Yeong Jang;Ye-Eun Son;Dong-Soon Oh;Kap-Hoon Han;Jae-Hyuk Yu;Hee-Soo Park
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제33권11호
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pp.1420-1427
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2023
The forkhead domain genes are important for development and morphogenesis in fungi. Six forkhead genes fkhA-fkhF have been found in the genome of the model filamentous Ascomycete Aspergillus nidulans. To identify the fkh gene(s) associated with fungal development, we examined mRNA levels of these six genes and found that the level of fkhB and fkhD mRNA was significantly elevated during asexual development and in conidia. To investigate the roles of FkhB and FkhD, we generated fkhB and fkhD deletion mutants and complemented strains and investigated their phenotypes. The deletion of fkhB, but not fkhD, affected fungal growth and both sexual and asexual development. The fkhB deletion mutant exhibited decreased colony size with distinctly pigmented (reddish) asexual spores and a significantly lower number of conidia compared with these features in the wild type (WT), although the level of sterigmatocystin was unaffected by the absence of fkhB. Furthermore, the fkhB deletion mutant produced sexual fruiting bodies (cleistothecia) smaller than those of WT, implying that the fkhB gene is involved in both asexual and sexual development. In addition, fkhB deletion reduced fungal tolerance to heat stress and decreased trehalose accumulation in conidia. Overall, these results suggest that fkhB plays a key role in proper fungal growth, development, and conidial stress tolerance in A. nidulans.
Gery, Antoine;Seguin, Virginie;Bonhomme, Julie;Garon, David
Mycobiology
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제50권1호
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pp.96-98
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2022
The Aspergilli of the section Nidulantes series Versicolores are among the most recurrent molds in indoor environments. These species cause damage to the quality of air. Indeed, they are responsible for allergies, aggravation of asthma and can even cause infections in immunocompromised patients. Molds belonging to the Versicolores series also produce sterigmatocystin, a mycotoxin classified as potential human carcinogen by the International Agency for Research on Cancer (group 2B). Here, we provide for the first time the genome of three species of the series Versicolores: Aspergillus creber, Aspergillus jensenii and Aspergillus protuberus which are the most abundant species of this series in bioaerosols. The genomes of these three species could be assembled with a percentage of completeness of 97.02%, 96.21% and 95.35% for Aspergillus creber, A. jensenii and A. protuberus respectively. These data will allow to study the genes and gene clusters responsible for the expression of virulence factors, the biosynthesis of mycotoxins and the proliferation of these ubiquitous and recurrent molds.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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