The Dps protein, which is overexpressed in harsh environments, is known to playa critical role in the protection of DNA against oxidative stresses. In this study, the roles of Fur in the expression of the dps gene in Salmonella and the protection mechanisms against oxidative stress in Salmonella cells preexposed to iron-stress were investigated. Two putative Fur boxes were predicted within the promoter region of the S. typhimurium dps gene. The profile of dps expression performed by the LacZ reporter assay revealed growth-phase dependency regardless of iron-status under the culture conditions. The fur mutant, $_X4659$, evidenced a reduced level of ${\beta}$-galactosidase as compared to the wild-type strain. The results observed after the measurement of the Dps protein in various Salmonella regulatory mutants were consistent with the results acquired in the reporter assay. This evidence suggested that Fur performs a function as a subsidiary regulator in the expression of dps. The survival ability of Salmonella strains after exposure to oxidative stress demonstrated that the Dps protein performs a pivotal function in the survival of stationary-phase S. typhimurium against oxidative stress. Salmonella cells grown in iron-restricted condition required Dps for full protection against oxidative stress. The CK24 (${\Delta}dps$) cells grown in iron-replete condition survived at a rate similar to that observed in the wild-type strain, thereby suggesting the induction of an unknown protection mechanism(s) other than Dps in this condition.
Jeong, Seon Mi;Lee, Hwa Jeong;Park, Yoon Mee;Kim, Jin Seok;Lee, Sang Dae;Bang, Iel Soo
Food Science of Animal Resources
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v.37
no.1
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pp.134-138
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2017
Salmonella enterica infects a broad range of host animals, and zoonostic infection threatens both public health and the livestock and meat processing industries. Many antimicrobials have been developed to target Salmonella envelope that performs essential bacterial functions; however, there are very few analytical methods that can be used to validate the efficacy of these antimicrobials. In this study, to develop a potential biosensor for Salmonella envelope stress, we examined the transcription of the S. enterica serovar typhimurium spy gene, the ortholog of which in Escherichia coli encodes Spy (${\underline{s}}pheroplast$${\underline{p}}rotein$${\underline{y}}$). Spy is a chaperone protein expressed and localized in the periplasm of E. coli during spheroplast formation, or by exposure to protein denaturing conditions. spy expression in S. typhimurium was examined by constructing a spy-gfp transcriptional fusion. S. typhimurium spy transcription was strongly induced during spheroplast formation, and also when exposed to membrane-disrupting agents, including ethanol and the antimicrobial peptide polymyxin B. Moreover, spy induction required the activity of regulator proteins BaeR and CpxR, which are part of the major envelope stress response systems BaeS/BaeR and CpxA/CpxR, respectively. Results suggest that monitoring spy transcription may be useful to determine whether a molecule particularly cause envelope stress in Salmonella.
This study was carried out to examine a novel inactivated Salmonella Typhimurium (S. Typhimurium) vaccine candidate for protection of mice against salmonellosis by immunization of BALB/c mice using various type adjuvant. The novel type-inactivated vaccine candidate was constructed by adding Chlorhexidine digluconate solution. BALB/c mice were divided into 6 groups of 15 mice apiece. The mice were intramuscularly (IM) primed at 6 weeks of age and were IM boosted 8 weeks of age. Groups A and B mice were injected with sterile phosphate-buffered saline as controls; group C mice were inoculated with 5×108 cells/100 µL of formalin-inactivated S. Typhimurium cells and adjuvant ISA70; groups D~F mice were immunized with 5×108 cells/100 µL of the inactivated vaccine candidate and adjuvant ISA70, adjuvant IMS1313 and adjuvant IMS1313 containing 30 ㎍/mL of GI24, respectively. All mice (except group A mice) were orally challenged with a virulent S. Typhimurium strain at 10 weeks of age. Mice from groups C-F had significantly increased IgG levels compared to control groups (A-B) mice. The levels of splenocyte IFN-γ and IL-4 in mice of all groups were measured by ELISA, resulting in increased immunity in group F mice compared to those of groups A-E mice. These data suggested that systemic and cell-mediated immune responses were highly induced by IM immunization with the vaccine candidate and adjuvant IMS1313 containing GI24. Furthermore, clinical signs such as death were observed in only 20% of group F mice after virulent Salmonella strain challenge, however, groups B and C (100%), and groups D and E (60%) mice died. This data suggested that mice immunized by intramuscular prime and booster with this vaccine candidate and adjuvant IMS1313 containing GI24 effectively protected mice from salmonellosis.
To control the growth of Salmonella on raw chicken supplied in food service, they were isolated and analysed for their physiological characteristics. Total viable microbe counts under the skin of the chicken amounted to 10% of numbers on their skin. Fifty one of Salmonella were isolated and identified from 75 chicken carcass samples. About 70% of the isolates showed resistance to more than four antibiotics, which indicated very high resistance among the strains ever reported in Korea. Lactic acid and trisodium phosphate(TSP) as sanitizing agent were applied to the Salmonella spp. isolates by agar diffusion method. The resistance by isolates to those sanitizing agents was compared with type strains of S. typhimurium ATCC 14028, S. typhimurium ATCC 12023, S. heidelberg and S. enteritidis. The isolates showed similar or less resistance to the type strains as for the lactic acid. However, as for trisodium phosphate known recently as a good sanitizer, 50% of the isolates showed more resistant compared with the type strains. Also, the treatment time and regeneration medium affected significantly the resistance of the isolates, which indicates that more careful test might be needed for TSP's practical application to raw chicken. Therefore, From the results, it is suggested that antibiotic treatment during breeding broiler and contamination after slaughtering should be minimized along with careful use of sanitizing agent in order to ensure more safe raw chicken supply.
The ability to detect Salmonella spp. is essential in the prevention of foodborne illness. This study examined a Salmonella spp. detection method involving the application of immunomagnetic separation and immunoliposomes (IMS/IL) encapsulating sulforhodamine B (SRB), a fluorescent dye. A quantitative assay was conducted by measuring the fluorescence intensity of SRB that was produced from an immunomagnetic bead-Salmonella spp.-immunoliposome complex. The results indicated detection limits of $2.7{\times}10^{5}$ and $5.2{\times}10^{3}$ CFU/ml for Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis (S. Enteritidis) and Salmonella enterka subsp. enterka serovar Typhimurium (S. Typhimurium), respectivley. The signal/noise ratio was improved by using 4% skim milk as a wash solution rather than 2% BSA. In addition, higher fluorescence intensity was obtained by increasing the liposome size. Compared with the conventional plating method, which takes 3-4 days for the isolation and identification of Salmonella spp., the total assay time of to h only including 6 h of culture enrichment was necessary for the Salmonella detection by IMS/IL. These results indicate that the IMS/ IL has great potential as an alternative rapid method for Salmonella detection.
Kim, Gi-Young;Lee, Kang-Jin;Son, Jae-Yong;Kim, Hak-Jin
Food Science of Animal Resources
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v.30
no.2
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pp.185-189
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2010
An electronic nose was used to identify Salmonella contamination on beef based on odors. To detect pathogen contamination of beef, $100{\mu}L$ of $10^5CFU/g$ Salmonella Enteritidis or Salmonella Typhimurium cell suspensions were spiked onto 5 g beef sirloin samples in individual vials. Odor changes over time were then measured and analyzed using an electronic nose system to identify pathogen contamination. In principle, the electronic nose system based on a surface acoustic wave (SAW) detector produced different frequency responses depending on the time and amount of each chemical. Multivariate analysis of the odor data was conducted to detect Salmonella contamination of beef. Salmonella odors were successfully distinguished from uncontaminated beef odors by principal component analysis (PCA). The PCA results showed that Salmonella contamination of beef could be detected after 4 h of incubation. The numbers of cells enumerated by standard plate count after 4 h of inoculation were $2{\times}10^6CFU/g$ for both Salmonella Enteritidis and Salmonella Typhimurium.
This study was conducted to investigate the in vivo and in vivo antibiotic effect of crude fucoidan extracted from Hizikia fusiforme, and to investigate any possible structural changes of broiler chick's intestinal villi by the supplementation of fucoidan. Total 84 broiler chicks were randomly assigned to 7 treatments, control and Salmonella typhimurium infection groups. The broiler chicks was infected with Salmonella typhimurium at third days, and antibiotics, fucoidan, dried Hizikia fusiforme, dried Undaria pinnatifida and yeast cell debris was respectively supplemented for each group. Each treatment had 4 chicks with three replications. Extraction yield of crude fucoidan from Hizikia fusiforme was 5.453%. Antibiotic effect of fucoidan was not detected in vitro, inhibition zone and micoorganism growth test. Weight gains of broiler chicks were tend to higher in fucoidan treatment group and yeast cell significance was not found. In in vivo test, the number of viable Salmonella typhimurium was low in the antibiotics and fucoidan treatment groups. The intestinal villi were short in the fucoidan and marine algae treatment groups. The intestinal villi were densely distributed on the large intestinal wall, but the morphology was not different among treatments.
Lactobacillus species have been shown to enhance intestinal epithelial barrier function, modulate host immune responses, and suppress the growth of pathogenic bacteria, yeasts, molds, and viruses. Thus, lactobacilli have been used as probiotics for treating various diseases, including intestinal disorders, and as biological preservatives in the food and agricultural industries. However, the molecular mechanisms used by lactobacilli to suppress pathogenic bacterial infections have been poorly characterized. We previously isolated Lactobacillus plantarum JSA22 from buckwheat sokseongjang, a traditional Korean fermented soybean food, which possessed high enzymatic, fibrinolytic, and broad-spectrum antimicrobial activity against foodborne pathogens. In this study, we investigated the effects of L. plantarum JSA22 on the growth of S. Typhimurium and S. Typhimurium-induced cytotoxicity by stimulating the host immune response in intestinal epithelial cells. The results showed that coincubation of S. Typhimurium and L. plantarum JSA22 with intestinal epithelial cells suppressed S. Typhimurium infection, S. Typhimurium-induced NF-κB activation, and IL-8 production, and lowered the phosphorylation of both Akt and p38. These data indicated that L. plantarum JSA22 has probiotic properties, and can inhibit S. Typhimurium infection of intestinal epithelial cells. Our findings can be used to develop therapeutic and prophylactic agents against pathogenic bacteria.
In order to evaluate the mutagenic potential of SDK(skin decontamination kit) produced by Agency for Defense Development(ADD), were performed Salmonella typhimurium reversion assay, chromosomal aberration test on chinese hamster ovarian cells and in vivo micronucleus assay using mouse bone marrow cells according to the established regulation of Korean Food and Drug Administration. In the reverse mutation test using Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA1535 and TA1537 did not in-crease the number of revertant at any of the concentration tested in this study. SDK did not increase the number of cells having structural or numerical chromosome aberration in cytogenetic test. In mouse micronucleus test, no significant increase in the occurrence oj micro nucleated polychromatic erythrocytes were observed in ICR male mice intraperitoneally administered with SDK. These results indicate that SDK has no mutagenic effects under these experimental conditions.
The inhibitory effect of rice(Oryza sartiva L., illpumbyeo) against mutagenicity induced by tryptophan pyrolysates were investigated using Salmonella typhimurium reversion assay. Both methanol extracts of obtained from brown and white rice were found to possess strong activites of inhibiting the mutagenicities of 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyriod[4,3-b]indol(Trp-P-1) and 3-amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indol(Trp-P-2) on Salmonella typhimurium reversion assay. As the concentration of methanol extract increased, inhibitory effect on mutagenicity increased but reached at steady state as inhibition rate of 90% when the concentration was above 10mg/plate. There was no significant difference(p>0.05) in inhibitory effect of methanol extracts between brown and white rice against tryptophan pyrolysates.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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