The purpose of this study was to develop Streptococcus sobrinus-specific qPCR primers based on the nucleotide sequence of the RNA polymerase ${\beta}-subunit$ gene (rpoB). The specificity of the primers was determined by conventional polymerase chain reaction (PCR) with 12 strains of S. sobrinus and 50 strains (50 species) of non-S. sobrinus bacteria. The sensitivity of the primers was determined by quantitative real-time PCR (qPCR) with serial dilutions of the purified genomic DNAs (40 ng to 4 fg) of S. sobrinus ATCC $33478^T$. The specificity data showed that the S. sobrinus-specific qPCR primers (RTSsob-F4/RTSsob-R4) detected only the genomic DNAs of S. sobrinus strains with a detection limit of up to 4 fg of S. sobrinus genomic DNA. Our results suggest that the RTSsob-F4/RTSsob-R4 primers are useful in detecting S. sobrinus with high sensitivity and specificity for epidemiological studies of dental caries..
This study was undertaken to develop species-specific forward and universal reverse PCR primers for the detection of Streptococcus sobrinus. These primers target the variable regions of the 16S ribosomal RNA coding gene (rDNA) and their specificity was tested against 10 strains of S. sobrinus strains and 20 different species of oral bacteria using serial dilutions of the purified genomic DNA of S. sobrinus ATCC $33478^T$. Our data show that species-specific amplicons were obtained from all the S. sobrinus strains tested but not from other species. Both direct and nested PCR could detect as little as 400 pg and 4 fg of genomic DNA from S. sobrinus ATCC $33478^T$, respectively. This result suggests that these PCR primers are highly specific and sensitive and applicable to the detection of S. sobrinus.
치아우식증 치료물질을 개발하기 위하여 한국에서 전통적으로 널리 사용되어왔던 20종류의 약용식물로부터 추출물을 분리하였다. 이를 이용하여 치아우식증 원인균인 Streptococcus sobrinus KCOM 1157에 대한 항균 활성을 나타내는 약용식물들을 조사하였다. 감초, 고삼, 황련, 박하, 송절, 부평초 등의 추출물들이 S. sobrinus KCOM 1157에 대해서 항균 활성을 보여주었다. 이 중 송절, 고삼, 황련 등의 천연물들은 높은 항균 활성을 나타내었다. 이 결과들은 송절, 고삼, 황련의 천연물들이 S. sobrinus 를 포함한 구강질환 세균들에 대한 항우식증 치료제로서의 가능성이 있음을 의미한다.
천연 식물 추출물을 구강 질환 분야에 활용하는 방안이 다양하게 모색되고 있다. 본 연구는 편백나무에서 추출한 휘발성 정유인 피톤치드를 치의학분야에 활용하고자 치아우식증 원인균인 Streptococcus mutans GS5와 Streptococcus sobrinus 6715, 급진성 치주염에 관련된 Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4에 대한 항균효과를 미생물학적으로 실험하였다. 흡광도 측정, 생균수 검사, 항생제 감수성 검사를 통해 다음과 같은 결과를 얻을 수 있었다. 1. 피톤치드의 최소억제농도(minimum inhibitory concentration; MIC)는 S. mutans GS5는 0.5%, S. sobrinus 6715는 1%, A. actinomycetemcomitans Y4는 0.2%로 측정되었다. 2. 피톤치드의 최소살균농도(minimum bactericidal concentration; MBC)는 S. mutans GS5는 0.5%, S. sobrinus 6715는 2%, A. actinomycetemcomitans Y4는 0.2%로 측정되었다. 3. 피톤치드에 노출된 실험균주에 대한 항생제 감수성 실험에서 피톤치드를 적용했을 경우, S. mutans GS5과 S. sobrinus 6715는 ampicillin에 대한 감수성이 유의성 있게 증가하였다. S. sobrinus 6715의 경우는 penicillin과 amoxicillin에 대한 감수성도 피톤치드에 의해 유의성 있게 증가하였다. 반면, A. actinomycetemcomitans Y4는 amoxicillin과 cefotaxime에 대한 감수성이 다소 증가하였으나 유의성은 없었다. 이상의 결과로, 편백 피톤치드 정유는 치아우식증 원인균인 Streptococcus mutans와 Streptococcus sobrinus, 급진성 치주염 원인균인 Actinobacillus actinomycetemcomitans에 대한 살균효과가 있을 뿐만 아니라 이들 균의 항생제 감수성을 높이는 것으로 판단된다. 따라서, 피톤치드는 치아우식증과 치주질환을 포함한 구강질환에 대해 예방적이고 치료적인 효과를 얻을 가능성이 있는 것으로 생각된다.
Kim, Si Yeong;Song, Yuri;Lee, Hyun Ah;Na, Hee Sam;Jung, Chul Jong;Bek, Gyung Yun;Chung, Jin
International Journal of Oral Biology
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제45권4호
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pp.143-151
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2020
Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus play important roles in dental caries. Coptis chinensis is a natural product with antimicrobial activity against enterobacteria; however, its effects on oral streptococci are still unknown. Therefore, the effects of C. chinensis on the growth and biofilm formation of the representative cariogenic bacteria S. mutans and S. sobrinus were investigated for the possible use of C. chinensis as an anticaries agent. The C. chinensis extract was diluted with sterile distilled water, and 0.1-2.5% of the extract was used in the experiment. The effects of the C. chinensis extract on the growth and glucan formation of S. mutans and S. sobrinus were measured by viable cell counting and spectrophotometry at 650 nm absorbance, respectively. Crystal violet staining was also carried out to confirm the C. chinensis extract's inhibitory effect on biofilm formation. The C. chinensis extract significantly inhibited the growth of S. mutans and S. sobrinus at concentrations of ≥ 0.3% as compared with the control group. The viable cell count of colonies decreased by 1.7-fold and 1.2-fold at 2.5% and 1.25%, respectively, compared with the control group. The biofilm formation of S. mutans and S. sobrinus was inhibited by > 20-fold at C. chinensis extract concentrations of ≥ 1.25% as compared with the control group. In summary, the C. chinensis extract inhibited the growth and biofilm and glucan formation of S. mutans and S. sobrinus. Therefore, C. chinensis might be a potential candidate for controlling dental caries.
Anti oralmicrobial effects of Nulembo nucifera were determined against S.mutans, S.sobrinus S.sobrinus, F.nucleatum, and A.actinomycetemcomitans using paper disc method, minimum inhibitory concentrate (MICs). Extracts of lotus leaf showed the highest yield. MeOH extract is 21%, Chloroform fraction is 4.2%, ethylacetate fraction is 8.2%, water fraction is 19%. Different parts such as flower, leaf, seed and pod showed antimicrobial effects against S.mutans, with flower and seed extracts showing strong antimicrobial effect aganinst S.sobrinus KCCM11897. Leaf extract(1000pm concentration) showed over 50% inhibitory effect against S.mutans and S.sobrinus KCCM11897. Flower extract showed over 40% inhibitory effect against F.nucleatum and A.actinomycetemcomitans. MICs of flower extract against S.sobrinus KCCM11897,11898 and leaf extract against S.mutans, S.sobrinus KCCM11897 were $625\;{\mu}g/ml$, indicating Nulembo nucifera extract can exert antimicrobial activity even at low concentration. All extractes with heat at $120^{\circ}C$ had antimicrobial activity, which means that is a very stable substances. F.nucleatum and A.actinomycetemcomitans was stable against acid it had a trend that the more akali side was the lower acitivity.
약용식물로부터 충치예방물질을 개발하기 위하여 우리나라에서 전통적으로 널리 사용되어 왔던 10종류의 약용식물로부터 에탄올 추출물을 분리하였다. 이를 대상으로 충치 원인균인 Streptococcus sobrinus에 대한 항균활성을 나타내는 약용식물을 조사하였다. 관중의 에탄올 추출물이 S. sobrinus에 대해 항균활성을 나타냈다. 이 결과를 근거로 하여 관중의 추출물은 S. sobrinus에 대한 충치 예방물질로서 가능성이 있음을 나타낸다.
치아우식증의 원인균인 S. mutans GS5와 S. sobrinus 6715에 대한 polyP의 효과를 관찰하여 보다 안전하고 효과적인 치아우식증 예방을 위한 임상적용의 가능성을 고찰하고자 첫째, 다양한 사슬길이의 polyP를 첨가한 후 흡광도를 측정하여 MIC를 결정하고, 둘째, 실험균주를 흡광도 $0.3{\sim}0.5$까지 증식시킨 후 MIC 농도의 polyP를 첨가하여 흡광도의 변화를 측정함으로써 균주증식 후 성장 억제효과를 관찰하였으며, 셋째, 생균수 측정으로 polyP의 항균효과를 평가하였고, 넷째, 핵산유리의 정도로 polyP의 킬레이션 작용여부를 관찰하였으며, 다섯째, polyP의 비수용성 글루칸 합성능력을 관찰하였으며, 여섯째, 투과전자현미경으로 세포막과 세포질 내의 구조적 변화를 관찰하였다. 이상의 연구를 통하여, polyP의 살균작용이 S. mutans와 S. sobrinus에 대한 성장을 억제시키는 효과가 있는 것으로 가늠된다. 이와 같은 성장 억제효과는 polyP의 킬레이션에 의한 것이라기보다는 균주 세포의 구조적, 형태적 변화가 주된 요인이었던 것으로 판단된다.
본 연구는 125명의 6-11세 혼합치열기 아동을 대상으로 연령에 따라 초기 혼합치열기 A군(6-8세; 62명)과 후기 혼합치열기 B군(9-11세; 63명)으로 분류하고 유치의 dfs, 영구치의 DFS를 기록한 후 자극성 타액을 채취하여 TYCSB 배지에 배양해서 S. mutans와 S. sobrinus를 구분하였으며 PCR을 시행하여 확인하였다. S. mutans와 S. sobrinus의 분포도와 치아우식증과의 상관관계를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. S. mutans와 S. sobrinus의 상관계수는 A군 0.70, B군 0.50로 두 군 모두에서 높은 상관관계를 보였다. 2. S. mutans와 치아우식증과의 관계는 A군(r=0.25)과 B군(r=0.34) 모두에서 약간의 관련성이 나타났다. 3. A군에서 S. sobrinus와 치아우식증간에 상관관계가 없는 것으로 나타났으며, B군(r=0.21)에서는 미약한 상관관계가 성립되었다. 4. S. mutans와 나이의 상관관계는 A군과 B군 모두에서 관련성이 없는 것으로 나타났다. 5. S. sobrinus와 나이의 상관관계는 A군(r=0.32)에서는 약간의 관련성이 나타났고, B군에서는 관련성이 없는 것으로 나타났다.
Mutans streptococci는 치아우식증과 관련이 있다고 보고되고 있으며, 이 streptococci 종 중에서 S. mutans나 S. sobrinus가 인간의 치아우식증에서 가장 일반적으로 나타난다. 치아우식증에서 이 세균종의 분포는 인종과 지역에 따라 다양하다. 본 연구에서는 2-6세인 52명의 치아우식증 환자에서 비우식부위와 우식부위로부터 치태를 채취하여 DNA를 추출한 후 dex와 gtf 유전자에 기초한 S. mutans와 S. sobrinus에 특이한 primer를 제작한 후 PCR을 시행하여 S. mutans와 S. sobrinus의 분포도를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 어린이 치아우식증 환자에서 S. mutans나 S. sobrinus가 발견된 어린이는 37명(71.2%)이었다. 2. 이들 어린이 중에서, S. mutans 또는 S. sobrinus가 비우식부위에서만 발견된 어린이는 3명(5.8%), 우식부위에서만 발견된 어린이는 22명(42.3%), 두 부위 모두에서 발견된 어린이는 12명(23.1%)이었다. 3. S. mutans나 S. sobrinus가 나타난 비우식부위 치태는 15개(28.8%), 우식부위치태는 34개(65.4%)였다. 4. 비우식부위의 경우 S. mutans만 출현한 어린이는 52명 중 8명(15.4%), S. sobrinus만 출현한 어린이는 6명(11.5%), 두 세균종이 같이 출현한 어린이는 1명(1.9%)이었다. 5. 우식부위에서 S. mutans만 출현한 어린이는 52명 중 24명(46.2%), S. sobrinus만 출현한 어린이는 2명(3.8%), 두 세균종이 같이 출현한 어린이는 8명(15.4%)이었다. 6. S. mutans는 gtf에 기초한 primer, S. sobrinus는 dex에 기초한 primer가 PCR에서 효과적으로 각각의 세균을 검출하였다. 이상의 결과로 미루어 우리나라 어린이의 경우 치아우식증은 MS와 밀접한 연관성이 있으며, MS중에서도 S. mutans가 중요하다고 판단된다. 한편 S. mutans와 S. sobrinus의 동반출현은 치아우식증과 더욱 밀접한 관련이 있는 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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