The purpose of this study was to develop Streptococcus sobrinus-specific qPCR primers based on the nucleotide sequence of the RNA polymerase ${\beta}-subunit$ gene (rpoB). The specificity of the primers was determined by conventional polymerase chain reaction (PCR) with 12 strains of S. sobrinus and 50 strains (50 species) of non-S. sobrinus bacteria. The sensitivity of the primers was determined by quantitative real-time PCR (qPCR) with serial dilutions of the purified genomic DNAs (40 ng to 4 fg) of S. sobrinus ATCC $33478^T$. The specificity data showed that the S. sobrinus-specific qPCR primers (RTSsob-F4/RTSsob-R4) detected only the genomic DNAs of S. sobrinus strains with a detection limit of up to 4 fg of S. sobrinus genomic DNA. Our results suggest that the RTSsob-F4/RTSsob-R4 primers are useful in detecting S. sobrinus with high sensitivity and specificity for epidemiological studies of dental caries..
This study was undertaken to develop species-specific forward and universal reverse PCR primers for the detection of Streptococcus sobrinus. These primers target the variable regions of the 16S ribosomal RNA coding gene (rDNA) and their specificity was tested against 10 strains of S. sobrinus strains and 20 different species of oral bacteria using serial dilutions of the purified genomic DNA of S. sobrinus ATCC $33478^T$. Our data show that species-specific amplicons were obtained from all the S. sobrinus strains tested but not from other species. Both direct and nested PCR could detect as little as 400 pg and 4 fg of genomic DNA from S. sobrinus ATCC $33478^T$, respectively. This result suggests that these PCR primers are highly specific and sensitive and applicable to the detection of S. sobrinus.
Journal of the Korean Applied Science and Technology
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v.37
no.2
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pp.279-286
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2020
Natural extracts were isolated from 20 kinds of medicinal plants that have been traditionally widely used in Korea to develop treatments for dental caries. Medicinal plants showing antibacterial activity against a cariogenic bacterium, Streptococcus sobrinus KCOM 1157 were investigated. The natural extracts of Glycyrrhiza uralensis, Sophora flavescens, Coptis Chinensis, Mentha arvensis, Pinus densiflora, Spirodela polyrhiza showed antimicrobial activities against S. sobrinus KCOM 1157. The extracts of Pinus densiflora, Sophora flavescens, Coptis Chinensis among these medical herbs showed significant antimicrobial activity. These results suggested that the natural products of Pinus densiflora, Sophora flavescens, Coptis Chinensis could be the potential source of anticariogenic agent against dental pathogens including S. sobrinus.
Plant extract has attracted considerable interest in oral disease therapy. The present study was performed to observe the antibacterial effect on cariogenic Streptococcus mutans GS5 and Streptococcus sobrinus 6715, and periodontopathic Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4 of phytoncide from Chamaecyparis obtusa Sieb. et Zucc employing the measurement of optical density, viable cell counts, and antibiotic sensitivity. The results were as follows: 1. Minimum inhibitory concentration of the phytoncide for S. mutans, S. sobrinus, and A. actinomycetemcomitans was observed to be 0.5%, 1%, and 0.2%, respectively. 2. Minimum bactericidal concentration of the phytoncide for S. mutans, S. sobrinus, and A. actinomycetemcomitans was determined to be 0.5%, 2%, and 0.2%, respectively. 3. The bacteria exposed to the phytoncide become more sensitive to antibiotics. The phytoncide enhanced significantly antibacterial activity of ampicillin against S. mutans and S. sobrinus. It also increased significantly the activity of penicillin and amoxicillin against S. sobrinus. In contrast, the phytoncide augmented the activity of amoxicillin and cefotaxime against A. actinomycetemcomitans but the increase was not statistically significant. The overall results indicate that phytoncide from Chamaecyparis obtusa Sieb. et Zucc used for this study has a strong antibacterial activity against cariogenic and periodontopathic bacteria and that it also has permeabilizing effect on certain antibiotics against these bacteria. Therefore, the phytoncide may be used as a candidate for prevention and therapeutic agent against oral infectious disease including dental caries and periodontal disease.
Kim, Si Yeong;Song, Yuri;Lee, Hyun Ah;Na, Hee Sam;Jung, Chul Jong;Bek, Gyung Yun;Chung, Jin
International Journal of Oral Biology
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v.45
no.4
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pp.143-151
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2020
Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus play important roles in dental caries. Coptis chinensis is a natural product with antimicrobial activity against enterobacteria; however, its effects on oral streptococci are still unknown. Therefore, the effects of C. chinensis on the growth and biofilm formation of the representative cariogenic bacteria S. mutans and S. sobrinus were investigated for the possible use of C. chinensis as an anticaries agent. The C. chinensis extract was diluted with sterile distilled water, and 0.1-2.5% of the extract was used in the experiment. The effects of the C. chinensis extract on the growth and glucan formation of S. mutans and S. sobrinus were measured by viable cell counting and spectrophotometry at 650 nm absorbance, respectively. Crystal violet staining was also carried out to confirm the C. chinensis extract's inhibitory effect on biofilm formation. The C. chinensis extract significantly inhibited the growth of S. mutans and S. sobrinus at concentrations of ≥ 0.3% as compared with the control group. The viable cell count of colonies decreased by 1.7-fold and 1.2-fold at 2.5% and 1.25%, respectively, compared with the control group. The biofilm formation of S. mutans and S. sobrinus was inhibited by > 20-fold at C. chinensis extract concentrations of ≥ 1.25% as compared with the control group. In summary, the C. chinensis extract inhibited the growth and biofilm and glucan formation of S. mutans and S. sobrinus. Therefore, C. chinensis might be a potential candidate for controlling dental caries.
Anti oralmicrobial effects of Nulembo nucifera were determined against S.mutans, S.sobrinus S.sobrinus, F.nucleatum, and A.actinomycetemcomitans using paper disc method, minimum inhibitory concentrate (MICs). Extracts of lotus leaf showed the highest yield. MeOH extract is 21%, Chloroform fraction is 4.2%, ethylacetate fraction is 8.2%, water fraction is 19%. Different parts such as flower, leaf, seed and pod showed antimicrobial effects against S.mutans, with flower and seed extracts showing strong antimicrobial effect aganinst S.sobrinus KCCM11897. Leaf extract(1000pm concentration) showed over 50% inhibitory effect against S.mutans and S.sobrinus KCCM11897. Flower extract showed over 40% inhibitory effect against F.nucleatum and A.actinomycetemcomitans. MICs of flower extract against S.sobrinus KCCM11897,11898 and leaf extract against S.mutans, S.sobrinus KCCM11897 were $625\;{\mu}g/ml$, indicating Nulembo nucifera extract can exert antimicrobial activity even at low concentration. All extractes with heat at $120^{\circ}C$ had antimicrobial activity, which means that is a very stable substances. F.nucleatum and A.actinomycetemcomitans was stable against acid it had a trend that the more akali side was the lower acitivity.
Proceedings of the Korean Institute of Information and Commucation Sciences Conference
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2011.10a
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pp.934-937
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2011
As part of our screening of anticariogenic agents from medicinal plants, the ethanol extracts of 10 herbs widely used in the fork medicine were tested for the antimicrobial activity against a cariogenic bacterium Streptococcus sobrinus. The ethanol extracts of Dryopteris crassirhizoma showed antimicrobial activities against S. sobrinus. These results suggested that the extracts of Dryopteris crassirhizoma could be the potential source of antimicrobial agent against S. sobrinus.
Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
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v.30
no.1
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pp.80-91
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2003
Mutans streptococci, especially S. mutans and S. sobrinus strongly implicated in pathogenesis of dental caries, the major cause of tooth loss in children. Use of an antibacterial agent controlling dental caries has been rationalized. The present study was performed to observe the antibacterial effect of inorganic polyphosphates (polyP) on S. mutans and S. sobrinus. S. mutans GS5 and S. sobrinus 6715 were grown in brain-heart infusion broth with or without polyP. Minimal inhibitory concentration (MIC) of polyP for S. mutans GS5 was determined to be 0.08% and that for S. sobrius 6715 was 0.17%. PolyP 15 added to the growing culture of S. mutans GS5 and S. sobrinus 6715 at their exponential phase was as effective in inhibiting the growth of S. mutans GS5 and S. sobrinus 6715 as polyP added at the very beginning of the culture. More than 85% of the cells lost their viability determined by viable cell count when polyP 15 was added to the culture of growing S. mutans GS5 at MIC, suggesting that polyP 15 has bacterial effect on the bacterium. And more than 99.9% of the cells lost their viability determined by viable cell count when polyP 15 was added to the culture of growing S. sobrinus 6715 at MIC, suggesting that polyP 15 has bacterial effect on the bacterium. Intracellular nucleotide release from S. mutans CS5 and S. sobrinus 6715 was increased in the presence of polyP 15 for 5h but was not really reversed by the addition of divalent cations like $Ca^{++}\;and\;Mg^{++}$. The majority of the cells appeared to be atypical in their shape, demonstrating accumulation of highly electron-dense granules and ghost cells. The overall results suggest that polyP have a strong bactericidal activity against S. mutans and S. sobrinus in which lysis in relation to chelation may not play the major role but unknown mechanism that possibly affects the viability of the bacterium may be involved. PolyP may be used as an agent for prevention of dental caries.
Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
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v.34
no.2
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pp.247-254
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2007
Mutans streptococci have been reported to be implicated in dental caries. Of these streptococcal species, Streptcoccus mutans and Streptococcus sobrinus are most commonly found in human dental caries. Prevalence of these bacterial species in dental caries is found to be varied in different races and countries. Therefore, importance of these bacteria in dental caries remains to be determined The present study was performed to find out correlation S. mutans and S. sobrinus with dental caries in 125 Korean children with mixed dentition between 6 to 11 years of age. They were classified as group A(6-8 years) and group B(9-11 years) by age. For the study, stimulated saliva samples were collected from each subject. The vials containing saliva specimens were serially diluted (1:10) in saline and plated in duplicate on tryptone-yeast extract-cysteine with sucrose and bacitracin (TYCSB) for S. mutans and S. sobrinus. After genomic DNA was extracted from the samples, polymerase chain reaction (PCR) amplification was performed for identification using universal primers and specific primers to S. mutans and S. sobrinus. Data of microbial variables were compared to caries status of the subjects. According to this study, the result were as follows : 1. S. mutans versus S. sobrinus were moderate positive linear correlated in both group A(r=0.70) and group B(r=0.50). 2. Between S. mutans and dental caries there were weak positive linear correlation in both group A(r= 0.25) and group B(r=0.34). 3. S. sobrinus versus dental caries were not correlated in group A but slightly correlated in group B(r=0.21). 4. Between S. mutans and age, there were not correlation in both group. 5. S. sobrinus versus age were weak correlated in group A(r=0.32) but not correlated in group B.
Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
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v.32
no.2
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pp.207-216
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2005
Mutans streptococci have been reported to be implicated in dental caries. Of these streptococcal species, Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus are most commonly found in human dental caries. Prevalence of these bacterial species in dental caries is found to be varied in different races and countries. Therefore, importance of these bacteria in dental caries remains to be determined. The present study was peformed to detect S. mutans and S. sobrinus in 52 Korean children with dental caries between 2 to 6 years of age. For the study, plaque samples were collected from caries-active(CA) and caries-free(CF) teeth of each subject. DNA was extracted from the plaques and amplified by polymerase chain reaction(PCR) using primers corresponding to dex and gtf genes. The results obtained from the study were as follows: 1. Of 52 children, 37 children (71.2%) were found to harbor S. mutans and/or S. sobrinus. 2. Of the MS-infected 37 children, 3 children (5.8%) harbored S. mutans and/or S. sobrinus in the CF plaques only, 22 children (42.3%) in the CA plaques only and 12 children (23.1%) in both CF and CA plaques. 3. S mutans and/or S. sobrinus were detected in 34 CA plaques (65.4%), while 15 in CF plaques (28.8%) 4. In the case of CF plaques, 8 plaques (15.4%) were observed to harbor S. mutans only, 6 plaques (11.5%) to harbor S. sobrinus only and 1 plaque (1.9%) to harbor both species. 5. Of CA plaques, 24 plaques (46.2%) were detected to have S. mutans only, 2 plaques (3.8%) to have S. sobrinus only and 8 plaques (15.4%) to have both species. 6. In comparison with the efficiency of two different primers for PCR, it was found that the primer based on gtf gene was more effective in detecting S. mutans, while the primer corresponding to dex gene was better for S. sobrinus. Overall results suggest that MS appears to be important in dental caries of the Korean children, and S. mutans is more closely associated with than dental caries as compared to S. sobrinus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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