• Molecules and Cells
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• 제27권5호
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• pp.539-546
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• 2009

In Saccharomyces cerevisiae, ribosomal protein L7, one of the ~46 ribosomal proteins of the 60S subunit, is encoded by paralogous RPL7A and RPL7B genes. The amino acid sequence identity between RPl7a and RPl7b is 97 percent; they differ by only 5 amino acid residues. Interestingly, despite the high sequence homology, Rpl7b is detected in both the cytoplasm and the nucleolus, whereas Rpl7a is detected exclusively in the cytoplasm. A site-directed mutagenesis experiment revealed that the change in the amino acid sequence of Rpl7b does not influence its subcellular localization. In addition, introns of RPL7A and RPL7B did not affect the subcellular localization of Rpl7a and Rpl7b. Remarkably, Rpl7b was detected exclusively in the cytoplasm in rpl7a knockout mutant, and overexpression of Rpl7a resulted in its accumulation in the nucleolus, indicating that the subcellular localization of Rpl7a and Rpl7b is influenced by the intracellular level of Rpl7a. Rpl7b showed a wide range of localization patterns, from exclusively cytoplasmic to exclusively nucleolar, in knockout mutants for some rRNA-processing factors, nuclear pore proteins, and large ribosomal subunit assembly factors. Rpl7a, however, was detected exclusively in the cytoplasm in these mutants. Taken together, these results suggest that although Rpl7a and Rpl7b are paralogous and functionally replaceable with each other, their precise physiological roles may not be identical.

• Journal of Microbiology
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• 제45권1호
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• pp.34-40
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• 2007

In budding yeast, G2/M transition is tightly correlated with bud morphogenesis regulated by Swel and septin that plays as a scaffold to recruits protein components. BNI5 isolated as a suppressor for septin defect is implicated in septin organization and cytokinesis. The mechanism by which Bni5 regulates normal septin function is not completely understood. Here, we show that Bni5 phosphorylation is required for mitotic entry regulated by Swel pathway. Bni5 modification was evident from late mitosis to G1 phase, and CIP treatment in vitro of affinity-purified Bni5 removed the modification, indicative of phosphorylation on Bni5. The phosphorylation-deficient mutant of BNI5 (bni5-4A) was defective in both growth at semi-restrictive temperature and suppression of septin defect. Loss of Bni5 phosphorylation resulted in abnormal bud morphology and cell cycle delay at G2 phase, as evidenced by the formation of elongated cells with multinuclei. However, deletion of Swel completely eliminated the elongated-bud phenotypes of both bni5 deletion and bni5-4A mutants. These results suggest that the bud morphogenesis and mitotic entry are positively regulated by phosphorylation-dependent function of Bni5 which is under the control of Swel morphogenesis pathway.

• 미생물학회지
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• 제53권4호
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• pp.286-291
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• 2017

진핵 세포에서 히스톤의 변형은 크로마틴 구조를 조절하는 데에 있어서 중요한 메커니즘이다. Set1 복합체에 의한 히스톤 H3의 네 번째 라이신 잔기(H3K4)에 발생하는 메틸화는 다양하게 잘 알려져 있는 히스톤 변형 중 하나이다. Set1 complex는 H2B의 유비퀴틴화에 의존적으로 발생하는 H3K4 메틸화에 중요하다고 알려진 Swd2를 포함하여 7개의 소단위 단백질을 가지고 있다. Swd2는 Set1의 RNA recognition motif (RRM) 도메인 근처에 결합하여 Set1의 활성을 조절하고, 또 RNA의 3' 말단 형성에 관여하는 CPF (Cleavage and Polyadenylation Factors) 복합체의 구성성분이라고 보고되었다. 최근 보고들에 따르면, 이런 Swd2의 이중적인 기능이 서로 독립적으로 작용하며, Swd2 결실돌연변이 균주가 살지 못하는 이유가 CPF 복합체의 구성성분으로써의 기능 때문이라고 알려져 있다. 본 연구에서 우리는 Swd2가 Set1의 RRM 도메인에 결합하여 Set1의 활성을 조절할 수 있을 뿐만 아니라, Set1의 안정성에도 영향을 줄 수 있음을 발견하였다. 또 우리는 Swd2가 결합할 수 없는 truncated-Set1을 가지고 있는 ${\Delta}swd2$ 돌연변이가 사멸하지 않고 정상적으로 자라는 것을 관찰하였다. 이런 결과들은 Saccharomyces cerevisiae에서 H3K4 메틸화와 RNA 3' 말단 형성과정에서의 Swd2의 이중적인 기능이 서로 독립적인 것이 아님을 제안하다.

• 한국가금학회지
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• 제33권2호
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• pp.113-119
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• 2006

본 연구는 유기태 철과 효모철의 첨가가 육계의 생산성 및 체조성에 미치는 영향에 대하여 연구하였다. 공시동물은 Ross broiler 252수로 7처리 6반복 반복당 6수씩 사양시험을 실시하였다. 처리구는 1) 대조구, 2) YM03 0.1%, 3) YM03 1.0%, 4) YF04 0.1%, 5) YF04 1.0%, 6) 유기태 Fe 0.01% 및 7) 유기태 Fe 0.1%로 총 7처리로 나누어 실시하였다. 증체량은 대조구가 2,087 g으로 낮게 나타났으며, 유기태 Fe 0.01% 첨가구가 2.121 g으로 나타나 대조구보다 높은 경향을 보였으나 통계적인 유의차는 보이지 않았다(P>0.05). 사료섭취량은 대조구는 3,797 g으로 낮게 나타났으며, YM03 1.0% 첨가구가 3,827 g으로 높게 나타나 대조구보다 높은 경향을 보였으나 통계적인 유의차는 보이지 않았다(P>0.05). 도체 Fe 함량은 대조구가 30.51 mg/dL 로 낮게 나타났으며, YF04 0.1 % 첨가구가 41.58 mg/dL 로 높게 나타나 대조구보다 높은 경향을 보였으나 통계적인 유의차는 보이지 않았다(P>0.05). 육계에서 사료내 유기태 철 또는 효모철의 첨가는 도체내 철의 함량을 강화시키고 철분이 강화된 축산물 생산이 가능할 것으로 사료되나 사업화하기 위해서는 추후에 더욱 체계적인 연구가 요구된다.

• Mycobiology
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• 제42권4호
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• pp.427-431
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• 2014

Mitochondrial protein Nfu1 plays an important role in the assembly of mitochondrial Fe-S clusters and intracellular iron homeostasis in the model yeast Saccharomyces cerevisiae. In this study, we identified the Nfu1 ortholog in the human fungal pathogen Cryptococcus neoformans. Our data showed that C. neoformans Nfu1 localized in the mitochondria and influenced homeostasis of essential metals such as iron, copper and manganese. Marked growth defects were observed in the mutant lacking NFU1, which suggests a critical role of Nfu1 in Fe-S cluster biosynthesis and intracellular metal homeostasis in C. neoformans.

• 미생물학회지
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• 제38권2호
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• pp.96-102
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• 2002

S기 checkpoint기작은 DNA복제 저해나 DNA상해 등에 반응하여, S기 세포주기 정지를 일으키거나 상해 회복에 관련된 유전자들의 전사가 유도됨으로서 진핵세포에서의 유전적인 안정성을 유지한다. 이러한 반응에 대한것ba11 변이주의 결손을 확인하기 위해서, nPB11 (DNA polymerase B possible subunit)유전자의 과다발현 효과에 대해 조사하고, HU (Hydroxyurea)와 MMS (Methyl methanesulfonate)에 대한 감수성 및 DNA상해 물질에 의한 RNR3 (Ribonulectide reductase) mRNA의 전사 유도를 조사하였다. RNR3 mRNA의 전사는 DNA합성 저해에 의해 발생한 스트레스나 화학물질에 의한 직접적 인 DNA상해 등에 의해 유도되어진다. 그 결과, dpb11-1변이주는 DNA상해 물질에 감수성을 나타내었고, RNR3 mRNA전사유도 또한 야생형 균주에 비해 약 40% 정도 감소를 나타내었다. 더욱이 dpb2-1 균주에서도 이와 동일한 결과를 얻었다. 그러므로 DPB2와 DPB11 유전자는 복제에 대한 sensor로서, 복제 정지 요인에 대한 세포주기 반응과 전사 조절에 모두 작용하는 것으로 사료된다.

• Journal of Microbiology
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• 제45권4호
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• pp.344-349
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• 2007

We have isolated previously three synthetic lethal mutants in Schizosaccharomyces pombe, which genetically interact with mex67, in order to identify the genes involved in mRNA export. A novel nup97 gene was isolated by complementation of the growth defect in one of the synthetic lethal mutants, SLMex3. The nup97 gene contains one intron and encodes an 851 amino-acid protein that is similar to nucleoporins, Nppl06p in S. pombe and Nic96p in Saccharomyces cerevisiae. The nup97 gene is essential for vegetative growth, and nup97 null mutant harboring pREP41X-Nup97 showed $poly(A)^+$ RNA export defect when expression of nup97 is repressed in the presence of thiamine. These results suggest that nup97 is involved in mRNA export from the nucleus to cytoplasm.

• 미생물학회지
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• 제54권4호
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• pp.420-427
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• 2018

효모균 타이로실-tRNA 합성효소(Sc YRS)와 엠버 멈춤코돈을 인식하는 대장균 시작tRNA 변이체(fMam $tRNA_{CUA}$)쌍은 대장균에서 단백질 생합성시 원하는 특정 위치에 비천연아미노산을 도입하는데 활용된다. Sc YRS/fMam $tRNA_{CUA}$쌍의 엠버써프레션 활성을 높이기 위해 fMam $tRNA_{CUA}$의 첫번째 안티코돈 염기를 인식하는 Sc YRS의 320번, 321번 아미노산 잔기를 암호화하는 염기서열을 무작위로 돌연변이시킨 라이브러리를 제작하였다. 엠버써프레션에 의한 클로람페니콜 저항성을 이용해 라이브러리를 탐색하여 활성이 향상된 2개의 돌연변이주를 선별하였다. 이들의 클로람페니콜 저항성 성장의 $IC_{50}$값은 야생형 YRS보다 1.7~2.3배 높았으며, in vivo 엠버써프레션 활성을 비교한 결과 3~6.5배의 활성 증가가 나타났다. 높은 활성을 보인 mYRS-3 (P320A/D321A) 단백질의 fMam $tRNA_{CUA}$에 대한 in vitro aminoacylation kinetics 분석은 야생형보다 약 7배 높은 효소활성을 보였으며, 이는 주로 기질인 fMam $tRNA_{CUA}$에 대한 결합 친화도가 증가하여 나타났다. 이런 접근법을 이용하여 다양한 종류의 비천연 아미노산 도입에 활용되는 aminoacyl-tRNA 합성효소의 엠버써프레션 활성을 높임으로써 엠버 멈춤코돈을 이용한 비천연 아미노산 도입 효율성을 높일 수 있을 것이다.

• 미생물학회지
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• 제45권3호
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• pp.239-245
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• 2009

번역 개시 인자 eIF1A는 진핵생물에서 43S preinitiation complex 형성을 비롯한 번역 개시 과정의 여러 단계에서 필수적인 역할을 하며, 잘 보존된 oligonucleotide-binding (OB) fold를 가지고 있는 단백질이다. 본 연구진은 이전 연구에서 eIF1A가 RNA annealing 활성을 가지고 있으며 double-stranded RNA에 결합하여 안정된 복합체를 형성한다는 것을 발견한 바 있다. 본 연구에서는 이러한 활성을 나타내는데 필요한 active site를 찾고, 이러한 활성이 효모의 성장에 필수적인 기능인지를 알아보기 위하여 여러 가지 돌연변이를 제조하였다. N-말단과 C-말단은 제거되었지만 완전한 OB-fold를 가지고 있는 eIF1A($\Delta$T)는 RNA annealing 활성을 보이는 반면, OB-fold에 돌연변이가 도입된 단백질들은 모두 활성이 사라졌다. 또한, R57D 돌연변이를 제외한 모든 OB-fold 돌연변이는 dsRNA에도 결합하지 않았다. 이러한 결과는 eIF1A의 RNA annealing 활성과 dsRNA 결합에는 완전한 OB-fold domain이 필요하다는 것을 의미한다. 돌연변이들이 효모의 성장에 미치는 영향을 조사한 결과, RNA annealing 활성과 효모의 성장은 뚜렷한 연관성이 없었으며, 적어도 R57D와 K94D 경우에는 돌연변이가 성장하지 못하는 원인이 생체 내 eIF1A 단백질의 안정성과 관계있는 것으로 생각된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권12호
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• pp.1977-1988
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• 2015

β-1,3-glucanosyltransferases play essential roles in cell wall biosynthesis in yeast. Kluyveromyces lactis has six putative β-1,3-glucanosyltransferase genes. KlGAS1-1 and KlGAS1-2 are homologs of Saccharomyces cerevisiae gene GAS1. RT-qPCR indicated the transcription level of KlGAS1-1 was significantly reduced while heterologous protein (thermostable xylanase B) secretion was enhanced during medium optimization. To evaluate if these two events were related, and to improve xylanase B secretion in K. lactis, we constructed KlGAS1-1 and KlGAS1-2 single deletion strains and double deletion strain, respectively. KlGAS1-1 gene deletion resulted in the highest xylanase B activity among the three mutants. Only the double deletion strain showed morphology similar to that of the GAS1 deletion mutant in S. cerevisiae. The two single deletion strains differed in terms of cell wall thickness and xylanase B secretion. Transcription levels of β-1,3-glucanosyltransferase genes and genes related to protein secretion and transport were assayed. The β-1,3-glucanosyltransferase genes displayed transcription complementation in the cell wall synthesis process. KlGAS1-1 and KlGAS1-2 affected transcription levels of secretion- and transport-related genes. Differences in protein secretion ratio among the three deletion strains were associated with changes of transcription levels of secretion- and transport-related genes. Our findings indicate that KlGAS1-1 deletion is an effective tool for enhancing industrial-scale heterologous protein secretion in K. lactis.