• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제16권1호
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• pp.71-77
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• 2012

Mitochondrial dynamics and distribution is critical for their role in bioenergetics and cell survival. We investigated the consequence of altered fission/fusion on mitochondrial function and motility in INS-1E rat clonal ${\beta}$-cells. Adenoviruses were used to induce doxycycline-dependent expression of wild type (WT-Mfn1) or a dominant negative mitofusin 1 mutant (DN-Mfn1). Mitochondrial morphology and motility were analyzed by monitoring mitochondrially-targeted red fluorescent protein. Adenovirus-driven overexpression of WT-Mfn1 elicited severe aggregation of mitochondria, preventing them from reaching peripheral near plasma membrane areas of the cell. Overexpression of DN-Mfn1 resulted in fragmented mitochondria with widespread cytosolic distribution. WT-Mfn1 overexpression impaired mitochondrial function as glucose- and oligomycin-induced mitochondrial hyperpolarization were markedly reduced. Viability of the INS-1E cells, however, was not affected. Mitochondrial motility was significantly reduced in WT-Mfn1 overexpressing cells. Conversely, fragmented mitochondria in DN-Mfn1 overexpressing cells showed more vigorous movement than mitochondria in control cells. Movement of these mitochondria was also less microtubule-dependent. These results suggest that Mfn1-induced hyperfusion leads to mitochondrial dysfunction and hypomotility, which may explain impaired metabolism-secretion coupling in insulin-releasing cells overexpressing Mfn1.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제18권1호
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• pp.65-71
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• 2015

The functional utility of a transgenic marine medaka Oryzias dancena strain carrying the red fluorescent protein (RFP) gene driven by an endogenous choriogenin H (chgH) promoter was evaluated for its ability to detect waterborne $17{\alpha}$-ethinylestradiol (EE2), a synthetic estrogen derivative. The chgH:rfp transgenic marine medaka larvae showed an age-dependent tendency in the efficiency of EE2-mediated transgene expression, in which transgenic larvae older than 6 days post-hatching displayed a more effective response in their transgene expression to EE2 than did younger hatchlings. During experimental exposures to high concentrations of EE2 (200 to 1,000 ng/L), the transgenic responses in the hatchlings were broadly dose- and duration-dependent. With exposures using lower doses of EE2 (25, 50 and 100 ng/L), EE2-induced transgenic RFP was also observed in the transgenic larvae, although the lower doses required exposure of longer duration. Under the EE2 exposure and microscope assay conditions used in our study, transgenic marine medaka larvae exhibited a similar degree of EE2-mediated RFP phenotype expression at various salinity levels (0, 15 and 30 ppt).

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제27권1호
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• pp.78-84
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• 2019

Cell therapeutic agents for treating degenerative brain diseases using neural stem cells are actively being developed. However, few systems have been developed to monitor in real time whether the transplanted neural stem cells are actually differentiated into neurons. Therefore, it is necessary to develop a technology capable of specifically monitoring neuronal differentiation in vivo. In this study, we established a system that expresses cell membrane-targeting red fluorescent protein under control of the Synapsin promoter in order to specifically monitor differentiation from neural stem cells into neurons. In order to overcome the weak expression level of the tissue-specific promoter system, the partial 5' UTR sequence of Creb was added for efficient expression of the cell surface-specific antigen. This system was able to track functional neuronal differentiation of neural stem cells transplanted in vivo, which will help improve stem cell therapies.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권2호
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• pp.234-241
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• 2008

Agrobacterum tumefaciens-mediated transformation (ATMT) is becoming an effective system as an insertional mutagenesis tool in filamentous fungi. We developed and optimized ATMT for two Colletotrichum species, C. falcatum and C. acutatum, which are the causal agents of sugarcane red rot and pepper anthracnose, respectively. A. tumefaciens strain SK1044, carrying a hygromycin phosphotransferase gene (hph) and a green fluorescent protein (GFP) gene, was used to transform the conidia of these two Colletotrichum species. Transformation efficiency was correlated with co-cultivation time and bacterial cell concentration and was higher in C. falcatum than in C. acutatum. Southern blot analysis indicated that about 65% of the transformants had a single copy of the T-DNA in both C. falcatum and C. acutatum and that T-DNA integrated randomly in both fungal genomes. T-DNA insertions were identified in transformants through thermal asymmetrical interlaced PCR (TAIL-PCR) followed by sequencing. Our results suggested that ATMT can be used as a molecular tool to identify and characterize pathogenicity-related genes in these two economically important Colletotrichum species.

• 한국양식학회지
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• 제2권1호
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• pp.1-7
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• 1989

양식 해조류인 큰방사무늬김에 대한 조직배양을 종자 세포 보존 및 장차 세포수준의 내저 염성 품종개량을 목적으로 시도하였다. 김 엽체의 영양 성장부위를 무균적으로 PES-한천배지 상에 배양함으로서 callus의 형성을 유도하였으며 이 적갈색의 연약한 callus를 $16^{\circ}C$에서 12시간 주기로 2000 lux의 형광등 하에서 1개월마다 이식하면서 배양하였다. 총 탄수화물 및 단백질 함량을 측정하였으며, 최적 배양온도는 $14^{\circ}C\~18^{\circ}C$였다. PES-한천배지 상에서 $2.0\%$의 NaCl 농도가 callus의 성장에 가장 우수하였다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제28권1호
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• pp.15-23
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• 1986

인공사료개발연구의 일환으로 상육잠과 인공사료육잠 소화액에 대한 기초자료를 얻기 위해 상엽육잠과 인공사료육단을 공시하고 비교·분석하여 아래와 같은 결론을 얻었다. 1. 적색형광단백질은 50% 포화 acetone 용액에 침전하였고 n-butanol,용액중에 용해되지 않았으며, methanol 용액에는 용해되었다. 2. 상육잠과 인공사료육잠 소화액 acetone분획 전기영동은 이종도가 큰 단백질 band 부분에서 뚜렷한 차이가 있으며 상엽구에서만 첫 번째 band에서 적색형광이 관찰되었다. 3. 경과일수에 따른 상육잠소화액 전기영동상은 5령 1-3일에는 변화가 없으나 5령 4, 5일에 이종도가 큰 band에서 변화가 있었다. 4. 등전점전기영동결과 RFP는 PI 8-9의 염기성단백질이었다. 5. 상육잠소화액 acetone 분획의 SDS 전기영동상에 RFP로 추정되는 band가 나타났고 그 분자량은 27,000이었다. 6. 상육잠과 인공사료육잠소화액의 Sephadex G-75 permeation chromatography 결과 상육구 chromatogram에서는 16번부터 28번 사이에 3개의 흡수대가 있었으며 인공사료구 chromatogram에서는 18번부터 31번 사이에 2개의 흡수대가 있었다.

• 한국해양바이오학회지
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• 제2권2호
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• pp.81-85
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• 2007

글루코코르티코이드의 다양한 생리학적 과정은 이 호르몬에 의해 활성화된 수용체가 표적 유전자의 전사를 촉진 혹은 억제시킴으로써 일어나게 된다. 본 논문은 렌티바이러스 리포터 시스템을 이용하여 글루코코르티코이드 호르몬에 의한 GR 활성을 핵내에서 GRE에 의해 유도된 리포터 단백질인 mRFP 또는 루시퍼라아제의 발현을 통해 정성, 정량화 하였다. 그 결과 GR이 endogenous 하게 발현되는 HeLa 세포에서 코티졸을 처리하였을 때 활성화된 GR에 의해 GRE-inducible한 RFP와 루시퍼라아제의 발현이 각각 공초점 형광 현미경과 IVIS-200을 이용하여 형광 또는 BLI을 통해 증가함을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 렌티바이러스 리포터 시스템을 이용한 연구는 세포 내에서 뿐 만 아니라 향후 생체내에서의 GR signaling을 모니터링하는데 유용하게 사용되어질 수 있을 것이다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제22권4호
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• pp.55.1-55.17
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• 2021

Background: Naringenin and its glycoside naringin are well known citrus flavonoids with several therapeutic benefits. Although the anti-adipogenic effects of naringenin and naringin have been reported previously, the detailed mechanism underlying their anti-adipogenesis effects is poorly understood. Objectives: This study examined the anti-adipogenic effects of naringenin and naringin by determining differential gene expression patterns in these flavonoids-treated 3T3-L1 adipocytes. Methods: Lipid accumulation and triglyceride (TG) content were determined by Oil red O staining and TG assay. Glucose uptake was measured using a 2-[N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-d-glucose fluorescent d-glucose analog. The phosphorylation levels of AMP-activated protein kinase (AMPK) and acetyl Co-A carboxylase (ACC) were observed via Western blot analysis. Differential gene expressions in 3T3-L1 adipocytes were evaluated via RNA sequencing analysis. Results: Naringenin and naringin inhibited both lipid accumulation and TG content, increased phosphorylation levels of both AMPK and ACC and decreased the expression level of 3-hydroxy-3-methylglutaryl CoA reductase (HMGCR) in 3T3-L1 adipocytes. RNA sequencing analysis revealed that 32 up-regulated (> 2-fold) and 17 down-regulated (< 0.6-fold) genes related to lipid metabolism, including Acaca, Fasn, Scd1, Mogat1, Dgat, Lipin1, Cpt1a, and Lepr, were normalized to the control level in naringenin-treated adipocytes. In addition, 25 up-regulated (> 2-fold) and 25 down-regulated (< 0.6-fold) genes related to lipid metabolism, including Acaca, Fasn, Fabp5, Scd1, Srebf1, Hmgcs1, Cpt1c, Lepr, and Lrp1, were normalized to the control level by naringin. Conclusions: The results indicate that naringenin and naringin have anti-adipogenic potentials that are achieved by normalizing the expression levels of lipid metabolism-related genes that were perturbed in differentiated 3T3-L1 cells.

• 생명과학회지
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• 제32권2호
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• pp.142-147
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• 2022

Oxysterols은 콜레스테롤의 산화 유도체로서 죽상경화증(atherosclerosis)에서 병태생리학으로 큰 관련성을 가진다. 본 연구는 oxysterols 중 많은 양을 차지하는 7-ketocholesterol (7-KC)이 단핵구(monocyte)의 분화와 활성화에 미치는 영향을 인간 단핵구세포주 THP-1을 이용하여 조사하였다. 7-KC를 처리한 THP-1 세포는 세포독성 없이 약간의 세포증식이 감소하였고, 세포내 lipids의 양이 크게 증가함을 Nile red 염색에 의해 관찰하였다. 7-KC는 단독으로 세포의 부착능(adhesion)에 영향을 주지 않았지만, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)로 자극한 THP-1 세포에서는 부착능의 뚜렷한 감소를 나타내었다. 그리고, 형광이 부착된 latex beads를 이용하여 7-KC의 phagocytosis (포식능)를 조사하였다. 7-KC는 PMA로 분화를 자극한 세포의 phagocytosis를 현저히 감소시켰다. 또한, 7-KC를 처리한 THP-1 세포는 대식세포(macrophage)의 막표면 인자인 ICAM-1, CD11a, scavenger receptor(SR, 청소수용체) SR-A1, SR-B2 (CD36)의 발현을 감소시켰다. 하지만, 7-KC는 단독으로 혹은 PMA로 자극한 세포에서도 SR-D1 (CD68)의 발현을 현저히 증가시켰다. 이를 종합하면, 7-KC는 단핵구를 sterols이 풍부한 거품세포(foam cell)로 변형시킴으로써 생리적 자극에 의한 정상적인 단핵구의 분화와 활성화를 저해한다는 것을 시사한다.

• 생물환경조절학회지
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• 제25권2호
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• pp.77-82
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• 2016

본 연구는 식물공장 인공광원이 수경재배 케일의 생육, 수량 및 글루코시놀레이트(GLS) 함량에 미치는 영향을 구명코자 수행하였다. 인공광원으로 LED B:W(1:1, BW), R:B:W(2:1:3, RBW), BW+형광등(1:1+FL, BW+FL) 등 3처리를 하였다. 수확 엽수와 엽중은 BW+FL이 BW와 RBW보다 우수하였다. 엽장은 BW+FL에서, 엽폭은 RBW가 우수하여 다른 처리와 통계적인 유의성을 나타냈다. 엽록소 함량과 'L' 값은 처리간에 유의성이 없었으며, 'a' 값과 'b' 값은 BW+FL에서 가장 낮았다. GLS 함량은 모든 처리에서 glucobrassicin, glucoiberin, gluconasturtiin, sinigrin, progoitrin, glucoraphamin, epiprogoitrin 순으로 많았으며, 총 GLS 함량은 RBW에서 가장 높았다. 잎의 수분 함량, 조단백질, 조지방 함량, 회분 함량은 처리간에 유의성을 나타내지 않았다. 결론적으로 광은 생육과 2차 대사산물의 합성에 차이가 나타내며, 기능성 향상을 위해 후속 연구가 필요하다고 판단된다.