RAPD 분석은 한 개의 primer를 이용하여 임의의 DNA 조각을 증폭하는 것이다. 이때 만들어지는 여러 형태의 DNA pattern을 이용하여 리스테리아 모노사이토제네스를 분류할 수 있다. 리스테리아균들을 효과적으로 RAPD typing 할 수 있는 primer들을 엄선하기 위하여 리스테리아 표준균주 13종을 대상으로 총 31가지 primer들의 RAPD 분리력을 비교하여 보았다. 결과는 재현성이 높았으며 이중 6가지 primer(primer 6, HLWL74, UBC155, UBC127, Lis5, Lis11)가 discrimination index, band의 숫자, band scoring의 난이도 등을 고려해 볼 때 나머지 primer 들에 비해 우수한 분리력을 보였다. 이들 primer들은 장차 리스테리아의 RAPD typing에 이용될 수 있을 것으로 보이며, 현재는 이들을 이용하여 돈육공장의 오염원 규명을 위한 연구를 수행 중이다.
본 연구에서는 국내시장에서 유통되는 육류, 냉동식품, 생우유, 조개류 등과 같은 식품으로부터 L. monocytogenes들을 분리하고 혈청형을 결정하였다. RAPD 결과를 통해서 L. monocytogenes는 Listeria 속의 다른 균주들과 전체 밴드의 수와 크기에서 구별이 되었다. 또한, L. monocytogenes는 2개 그룹으로 구별되었으며, 그룹 I은 L. monocytogenes 1/2b, 4e, 4b, 그룹 II는 L. monocytogenes 1/2a, 1/2c, 3 혈청형 그룹별로 분류되었다. 결론적으로 RAPD 방법과 serotyping은 L. monocytogenes를 분류하는 데에 있어서 기존의 방법의 단점을 보완한 새로운 가능성을 제시하였다.
The random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique was used to anlayze six isolates of two species of Porphyra, P. yezoensis and P. tenera. Four 21-mer prrmers were combined randomly into six groups of double primers and screened for DNA amplification using nuclear and chloroplast tempate DNA. The RAPD patterns resulting from RnRc and CnCc primers provided evidence for both genetically homo-and heterogeneous populations of P. yezoensis and P. tenera. Similarity values obtained by RnRc primer analysis of nuclear DNA varied from 0.364 to 0.714 and those of chloroplast DNA were high, ranging from 0.727 to 1.000, except for P. yezoensis (Enoura).
요코가와흡충과 미야타흡충의 genomic DNA를 RAPD 분석을 이용하여 비교하였다. 상업적으로 구 입한 60-70%의 G+C 성분을 가진 무작위 10-mer oligonucleotide 표지자 (Kit A, Operon Technologies Inc., CalifDmia, USA) 20개 중에서 다음의 8개를 이용하여 두 홉충간에 구별이 가능한 밴드양상을 관찰할 수 있었다: OPA-02,5-TCCCGAGCTG-3; OPA-09,5-GGGTAACGCC-3; OPA-10, 5-GTGATCGCAG-3; OPA-11, 5-CAATCGCCGT-3; OPA-13, 5-CAGCACCCAC-3; OPA-17, 5-GACCGCTGT-3; OPA-19,5-CAAACGTCGG-3; OPA-20, 5-GTrCCGATCC-3. 이 연구의 결과로 미야타흡충은 요코가와흡충과 서로 다른 유전자 염기 서열을 가지고 있음이 암시 되었다.
본 연구는 RAPD표지를 이용하여 국내외에서 수집된 고추 유전자원들간의 유전적관계를 평가하고자 수행되었다. Random primer를 이용한 고추의 PCR반응은 $MgCl_2$ 3mM, Taq. DNA polymerase 1.5U, 주형 DNA 10ng, dNTPs $200{\mu}M$, random primer 200nM 그리고 $42^{\circ}C$의 annealing 온도조건으로 최적화하였다. 80개의 random primer로부터 높은 밴드선명도와 재현성을 보이는 16개가 선발되었으며 70%의 GC함량을 갖는 primer들이 GC함량이 60%인 것보다 DNA증폭에 있어 효과적이었다. 31개의 고추품종및 계통들에 대해 71개의 polymorphic밴드와 22개의 monomorphic밴드를 포함하는 총 93개의 DNA밴드가 선발된 16개의 random primer들로부터 형성되었다. Primer당 약 4.4개의 polymorphic밴드가 형성되었다. 이들 71개의 polymorphic밴드를 이용하여 유사도지수가 구해졌으며 이를 근거로 31고추 계통 또는 품종들을 뚜렷이 구분하는 dendrogram이 작성되었다.
RAPD 분석은 한 개의 primer를 이용하여 임의의 DNA조각을 증폭하는 것이다. 이때 만들어지는 여러 형태의 DNA band유형을 이용하여 살모넬라를 분류할 수 있다. 살모넬라를 효과적으로 RAPD typing할 수 있는 primer들을 엄선하기 위하여 살모넬라 표준군주 16종을 대상으로 총 20가지 primer들의 RAPD 분리력을 비교하여 보았다. 결과는 재현성이 높았으며 이중 primer A, OPG04, OPG10, OPL-03을 16가지 균 모두를 다른 유형으로 분리하였고 primer OPB-17, OPB-6, OPG08, OPL-02는 15가지 유형으로 분리하였다. 이들은 discrimination index, band의 숫자, band scoring의 난이도 등을 고려해 볼 때 나머지 primer 들에 비해 우수한 분리력을 보였다. 이들 primer들은 장창 살모넬라의 RAPD typing에 이용될 수 있을 것으로 보이며, 현재는 이들을 이용하여 돈육 공장의 오염원 구명을 위한 연구를 수행 중이다.
본 연구는 정자세포로부터 분리된 genome 내 DNA를 PCR 기법으로 증폭시킨 후 random amplified polymorphic DNA(RAPD) 분석을 통해 무지개송어의 품종 내 유전적 특성과 변이성을 해석하고 품종의 특이 유전적 표지를 개발하기 위해서 수행되었다. 20 종류의 primer를 사용하여 RAPD 양상을 검색한 후 다형현상의 출현빈도와 band 수에 기초하여 이들 중 6개의 primer를 선정하여 이용하였다. 그 중에 4개의 primer는 17개의 RAPD marker를 나타내었고, 그중 primer 당 8개인 48개 (28%)의 band 가 다형성을 보여주었다. 6개의 primer 중 4개는 개체들 사이에 다형성을 나타내는 band를 나타내었다. Bandsharing 의 경우 연어와 비교될 만큼 무지개송어는 3개의 특이적인 DNA marker를 가지고 있었다 (2.3. 2.0 및 1.3kb). 같은 무작위 primer를 이용해서 나타난 개별적인 band는 단일 primer 가 무지개송어의 정자핵 DNA의 경우 적어도 3개의 독립적인 genome 내 다형성을 탐지해 낼 수 있다는 것을 제시하고 있다. 이러한 primer에 의해서 나타난 RAPD 다형성은 개체식별을 위한 유전적 표지인자로서 사용될 수 있는 가능성을 제시하였으며, RAPD-PCR은 많은 어종에서 다형현상을 밝혀내는 기술이라 할 수 있다. 본 연구는 RAPD marker가 풍부하고 재현성이 있으며 RAPD 다형성을 지닌 marker를 사용하여 이러한 중요한 양식대상어종에서 미래의 gene mapping과 MAS 를 위한 기초를 제공해 줄 수 있다. RAPD 다형성은 어류의 품종 분화를 위한 유전적 표지로서 유용한 것으로 결론지을 수 있을 것이다.
곤충세포주로 널리 이용되고 있는 Sf 세포주와 Bm 세포주의 분자생물학적 표식자를 탐색하기 위하여, 총 세포 단백질의 SDS-PAGE와 genomic DNA를 RAPD(Random Amplification of Polymorphic DNA) 방법으로 분석하였다. 그 결과, 총 세포 단백질 및 genomic DNA, 패턴에서 두 세포주를 뚜렷하게 구별할 수 있는 밴드를 탐색하였으며, 이들은 유용한 분자 생물학적 표식자로 이용될 수 있을 것이다.
리스테리아를 보다 효과적으로 typing할 수 있는 방법을 찾기 위해 표준균주 13종을 대상으로 하여 RAPD, ERIC (Enterobacterial repetitive intergenic consensus) fingerprinting, ribotyping-PCR의 분리력을 비교해 보았다. DG107 (primer 6) 또는 DG122 (Lis 11) primer를 이용한 RAPD의 경우 11가지의 유형으로 분류되는 반면, ERIC fingerprinting은 9가지, ribotyping-PCR은 7가지씩의 유형을 보였다. 그러나 2가지 primer를 이용하여 각각 행한 RAPD 결과를 종합하거나, DG122를 이용한 RAPD와 ribotyping-PCR의 결과를 종합할 경우 13가지의 유형으로 모두 분리할 수 있었다.
CHO Jung Jong;KIM Yong-Tae;HUR Sung Bum;KIM Young Tae
한국수산과학회지
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제29권6호
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pp.761-769
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1996
The random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique was used to characterize 18 reference strains of microalgae, mostly Chlorella species, collected from various localities around Korea peninsular. Eighteen strains consist of four genera of the family marine Chlorella from 12 samples, two genera of fresh water Chlorella from three samples, and three genera on Nannochloris. Twenty 10-mer anonymous primers were screened for amplification of genomic DNA extracted from samples using the CTAB extraction method. Nineteen of these oligonucleotide primers were positive or band producing. Three of 20 random primers (OPA 10, OPA 12, and OPA 18) resulted in both clear band and a high degree of reproducibility and showed some potential to be used to discriminate individual samples of both genetically hetero-and homogeneous populations, in determining phylogenetic relationships between species within a genus and developing individual fingerprints for each samples.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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