This study was initiated to evaluate genetic relationship among various domestic and exotic pepper accessions using random amplified polymorphic DNA(RAPD) markers. The results suggested that the optimum conditions for PCR with random primers in Capsicum spp. could be obtained with 3mM of $MgCl_2$, 1.5U of Taq. DNA polymerase, 10ng of template DNA, $200{\mu}M$ of dNTPs, 200nM of random primer, and $42^{\circ}C$ of annealing temperature. Sixteen random primers showing high band intensity and reproducibility were selected from 80 random primers. Primers having 70% GC content were more effective in DNA amplification than primers having 60% GC content. The total 93 DNA bands including 71 polymorphic bands and 22 monomorphic bands were obtained with selected 16 random primers for 31 pepper cultivars and lines. About 4.4 polymorphic bands per primer were produced. Similarity coefficients were calculated by using 71 polymorphic bands and dendrogram based on the similarity coefficient showed clear classification of 31 peppers into three Capsicum species of Capsicum annuum, Capsicum chinense and Capsicum chacoense.
Doo, Hong-Soo;Ryu, Jeom-Ho;Lee, Kang-Soo;Li, Hu Lin;Liu, Xian Hu
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.10
no.3
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pp.194-199
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2002
Extracted genomic DNA from 16 accessions of Codonopsis lanceolata collected from South Korea and the Baekdoo Mt. areas of China were analyzed for their genetic relationships by RAPD. Twenty 10-mer-oligonucleotide primers having reproductive polymorphism were selected for the RAPD analysis. The size of amplified DNA was almost between 125 bp and 2.0 kbp. Sixteen collected Codonopsis lanceolata were analyzed with 20 primers which generated 73(49.3%) polymorphic bands among 148 PCR products. The mean number of polymorphic bands were 7.4 and varied $1{\sim}9$ per primer. It was, thus, demonstrated that RAPD was useful for detecting polymorphism in Codonopsis lanceolata. The range of 1-F value(genetic similarity) was from 0.682 to 0.959. These results indicate variable genetic similarities. By UPGMA (Unweighted Pair Group Method using an Arithmetic average) cluster analysis based on 1-F value, genetic distance among the 16 collected Codonopsis lanceolata was $0.133{\sim}0.400$. It was certainly classified into two groups between collected accessions from Korea and China, and the genetic distance was about 0.281. Both accessions collected from Korea and China showed miner differences, while the genetic relationships of Tonghua Xian and Liuhe Xian from China was farthest with other accessions collected.
Streptococcus sp. were isolated from cultured flounder (Paralichthys olivaceus) having Streptococcosis during 2004 to 2005 in Jeju Island. Ninety four Streptococcus iniae strains were isolated using biochemical test and multiplex PCR assay. Three genotypes (A, B, C-type) of S. iniae were appeared in the RAPD analysis and they showed international or local genetic polymorphism. Presently, S. iniae having A-type is a dominant S. iniae genotype in Jeju and showed band patterns at about 550, 850, 1000, 1300 and 2000 base pares. In this study, the reported P14 random primer, that used to distinguish serotypes of S. iniae could not be applied to distinguish Jeju island S. iniae's genetic polymorphism.
Kim, Seong-Cheol;Jung, Yong-Hwan;Seong, Ki-Cheol;Chun, Seung-Jong;Kim, Chun Hwan;Lim, Chan Kyu;Joa, Jae-Ho;Lee, Dong-Sun
Korean Journal of Plant Resources
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v.27
no.3
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pp.236-241
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2014
A sex-linked random amplified polymorphic DNA (RAPD) marker was identified from Asparagus officinalis L. and was converted into a sequence-characterized amplified regions (SCAR) marker for the large-scale screening of male and female plants. A total of 100 arbitrary decamer oligonucleotide primers were used for the RAPD analysis. Among them, the primer UBC347 amplified one female-specific 400 base pair DNA. Subsequently, the amplified RAPD fragment was cloned and sequenced. The fragment was abundant in AT and shared sequence homology with retrotransposon elements. On the basis of the sequence obtained, a pair of SCAR primer was designed. The amplification product, named F400, was the same size as the respective RAPD fragment from which it was derived. The F400 SCAR marker resulted to be female-specific in the three asparagus varieties tested in this study. This SCAR marker can be used for an early and rapid identification of female and male plants during breeding programs of asparagus.
For preliminary molecular typing, PCR-based fingerprinting using random amplified polymorphic DNA (RAPD) is the method of choice. In this study, 14 bacterial strains were isolated from different Korean food sources, identified using 16S rRNA gene sequencing, and characterized through RAPD-PCR. Two PCR primers (239 and KAY3) generated a total of 130 RAPD bands, 14 distinct PCR profiles, 10 polymorphic bands, one monomorphic band, and four unique bands. Dendrogram-based analysis with primer 239 showed that all 14 strains could be divided into seven clades out of which clade VII had the maximum of seven. In contrast, dendrogram analysis with the primer KAY3 divided the 14 L. citreum strains into four clades out of which clade IV consisted of a maximum of 10 strains out of 14. This research identified and characterized bacterial populations associated with different Korean foods. The proposed RAPD-PCR method, based on sequence amplification, could easily identify and discriminate the lactic acid bacteria species at the strain-specific level and could be used as a highly reliable genomic fingerprinting tool.
Kim, Beom-Gi;Jeong, Mi-Jeong;Lee, Chang-Soo;Lee, Hee-Kyung;Yoo, Young-Bok;Ryu, Jin-Chang
The Korean Journal of Mycology
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v.23
no.3
s.74
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pp.202-208
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1995
This study describes the effects of several components on PCR amplification used for RAPD. We used different concentrations of reaction components to obtaine discrete and reproducible PCR products from Pleurotus cornucopiae. The optimum concentrations of reaction components were found to be 80 ng of template DNA, 30 pmole of 10-mer primer, $200\;{\mu}M$ dNTP, 2mM $MgCl_2$, 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl(pH 9.0), 0.1% Triton X-100, 1.5 unit of Taq DNA polymerase (promega) in $50\;{\mu}l$ reaction volume. The optimum annealing temperature was $35^{\circ}C$. These results proved to be valuable for characterization of Pleurotus spp.
Bacillus anthracis is a gram-positive spore-forming bacterium that causes the disease anthrax. In order to develop a DNA marker specific for Bacillus anthracis and to discriminate this species from Bacillus cereus group, we applied the randomly amplified polymorphic DNA (RAPD)-PCR technique to a collection of 29 strains of the genus Bacillus, including 22 species of the B. cereus group. A 709-bp RAPD marker (KHT5) specific for B. anthracis was obtained from B. anthracis BAK. The PCR product of internal primer set from the KHT5 fragment distinguished B. anthracis from the other species of the B. cereus group.
Decamer RAPD primers were tested on dioeceious and hermaphrodite plants of Commiphora wightii to identify sex-specific molecular markers. Sixty different random decamer primers were screened out of which only three primers were found to be associated with sex expression. A ~1,280-bp fragment from the primer OPN06 was found to be present in all the female individuals. Another primer OPN 16 produced a unique ~400-bp amplification product in only hermaphrodite individuals. The third marker, OPA20 amplified a ~1,140-bp fragment from female and hermaphrodite DNAs, but failed to do so from the male plant DNAs.
Mulberries have importance in the sericulture industry as food for Bombyx mori, silkworm reared for its silk. Korean Morus alba have many cultivars and, for the protection of these cultivars and for utilization in plant-breeding programs, genetic information and the diversity among cultivars are essential. This study with 14 mulberry genotypes was undertaken using RAPD and ISSR fingerprinting to discover the genetic divergences between cultivars. Polymorphism rate among the cultivars produced by RAPD primer was found to be 64.48% and 66.29% relative to ISSR primer. The genetic relationships among the cultivars were identified using a dendrogram constructed with the UPGMA clustering method. Nei's method was used to calculate the genetic dissimilarity coefficients between each pair of genotypes, and the highest dissimilarity coefficient of 0.246 was exhibited between Suwon and Hwanggum cultivars. To determine the efficiency of each primer, a polymorphic index was calculated, and the robustness of the dendrogram was checked using cophenetic correlation coefficient. The results of this study can be utilized for the improvement of mulberry varieties in plant-breeding programs.
In order to develop a rapid and simple method for testing the purity of radish hybrid seeds using a procedure based on the PCR(Polymerase chain reaction), eighty random primers were screened with the genomic DNA extracted from five day old seedlings of inbred parent lines and their F1 hybrids. Two primers, HRM-02 (5'-GAGACCAGAC-3') and HRM-19(5'-TGAGGCGTGT-3'), generate reproducible unique PCR patterns which can identify each parent lines as well as their hybrids. In actual test of randomly selected hybrid seeds using the two marker primers, the purity tested by one primer was exactly same as that of other primer. It suggests that one marker primer selected in this experiment is enough for the purity test of radish hybrid seeds. We demonstrates the use of RAPD(randomly amplified polymorphic DNAs) markers to identify each of inbred parent lines and hybrids by rapid and simple method.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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