• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2000년도 제17차 정기총회 및 학술발표
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• pp.75-77
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• 2000

Retaining migratory activity is a prerequisite for the manipulation and use of PGCs. This study was conducted to examine whether migratory activity is retained in the primordial germ cells(PGCs) from gonads at the later embryonic developmental stage. In the present study, gonads were dissected from 5-, 6- and 10-day-old quail embryos and treated with trypsin-EDTA for the degradation of gonadal tissue. Gonadal PGCs (gPGCs) were purified by Ficoll density gradient centrifugation and labeled with PKH26 fluorescent dye. The PKH26-labeled gPGCs were microinjected into the blood vessels of recipient quail embryo. After further incubation of 3 days, the manipulated recipients were embedded in paraffin and sectioned. The gPGCs were detected by their fluorescence under the fluorescent microscopy and the confocal laser microscopy. As a result, 10-day-old quail gPGCs as well as 5-and 6-day-old gPGCs, could migrate to recipient embryonic gonads and settle down. These results suggest that the 10-day-old gPGCs have the properties of circulating PGCs at early stage. Therefore the PGCs from 10-day old embryonic gonads can be used for the tools of genetic manipulation.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제18권1호
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• pp.51-56
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• 2014

This study describes the developmental process of gonads in chameleon goby, Tridentiger trigonocephalus from the stage of hatching to 100 days after hatching (DAH). Based on histological observation, the primordial germ cells were observed in mesentery between mesonephric duct and gut at 15 DAH (total length, TL: $6.8{\pm}0.2mm$). At 20 DAH (TL: $7.9{\pm}0.1mm$), the primordial gonad began to protrude into peritoneal cavity and developed between mesonephric duct and gut. Initial ovarian differentiation was identified by the presence of ovarian cavity and oogonia in the gonads at 55 DAH (TL: $21.1{\pm}1.3mm$). Testicular differentiation started at 65 DAH (TL: $23.7{\pm}0.9mm$) with appearance of spermatogonial cells in the gonads. These findings indicate that sex differentiation in T. trigonocephalus occurs earlier in females than males, suggesting that this species can be classified as an undifferentiated gonochorist.

• 한국가금학회지
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• 제37권2호
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• pp.139-143
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• 2010

조류의 원시생식세포는 수용체 배자로의 주입을 통해서 생식선 카이메라 생산을 가능하게 하기 때문에 유전자 도입에 매우 효율적인 도구이다. 특히, 메추리는 성성숙이 빠르며 산란능력이 뛰어 나기 때문에 형질전환 조류 생산과 유전자 기능 연구에 매우 적합하다. 형질전환 조류 생산 효율을 높이기 위해서는 수용체 배자 내의 원시생식세포의 수를 줄이는 것이 필수적인 요소이지만, 아직까지 메추리에서 이러한 시도를 했다는 보고는 없다. 본 연구는 감마선 조사가 수용체 내의 원시생식세포의 수를 감소시킬 수 있는지 알아보았다. 먼저 0, 250, 500, 750, 1,000 rads 강도의 감마선을 갓 산란된 메추리알에 조사 후 5일령 배자에서 기형 발생빈도를 측정하였고, 0과 500 rads에서 17일째 부화율을 검정하였다. 그리고 500 rad의 감마선을 산란된 알에 73초간 조사 후 5일간 배양시킨 뒤 원시생식세포의 수를 측정하였다. 그결과, $1{\times}10^4$개의 세포 당 원시생식세포의 수는 수컷은 $107.75{\pm}3.96$에서 $80.30{\pm}4.34$로, 암컷에서 $99.56{\pm}3.22$에서 $81.67{\pm}3.72$로 원시생식세포수가 감소되었다. 이상의 연구 결과는 감마선 조사가 수용체 배자내의 원시생식세포를 감소시킬 수 있고, 이를 형질 전환 기술에 접목시켜서 생식선 카이메라 효율을 높일 수 있는 가능성을 보여 주고 있다.

• 한국가축번식학회지
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• 제19권1호
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• pp.55-63
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• 1995

The putative totipotency germ cells has a relative abundance of alkaline phosphatases. Thus, histological staining of AP activity offers a new route to isolate totipotent cells and also provides insights into culture systems of these cells. Furthermore, the AP staining technique is simple and fast, requires only the napthol AS/MS substrate in combination with trapping diazonium salts such as fast red or fast blue. However, our unexpected finding was that AP staining of mouse ES cells were detected in the undifferentiaed epiblast-derived cells as well as several types of differentiating cells. This findings are different from results of Talbot et al. (1993) reported usefulness of the AP staining and implies that histological staining of AP may not by useful to determine undifferentiaed state or totipotency of ES cells. Thus, we have investigated the patterns of AP expression by RT-PCR in order to identify a marker of undifferentiated ES/primordial germ (PG) cells. In RT-PCR analysis, embryonic (E)-AP was detected only in undifferentiated ES cells, but intestinal(I)-AP was not detected in all of the examined ES and PG cells. In addition, nonspecific (NS)-AP wasdetected in undifferentiated PG cell from day 7, 5 to 13 of gestation. Histological activity of AP in ES cells was completely suppressed by addition of L-phenylalanine (Phe), L-homoarginine (Har), and L-phenylalanylglycylglycine (PheGlyGly) as an inhibitor, but RT-PCR showed the same results as in the absence of an inhibitors. Our findings suggested that expression of E-AP and NS-AP may use as a marker to determine the undifferentiated status in ES and PG cells.

• 한국동물학회지
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• 제21권2호
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• pp.43-58
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• 1978

양서류 수정란을 제 1 난할전에 중금속으로 처리하였던바 개구리의 시원생식세포수의 양전변화를 가져 왔다. 중금속의 일정량의 처리는 양서류 초기발생중에 시원생식세포 형성을 저하시켰다. 납 70ppm과 카드뮴 4ppm 이상에서 배양하면 9내지 12mm배에서 시원생식세포의 수적감소를 가져 왔으나 그후의 발생에서는 거의 정상군과같은 증가율을 보였다. 한편 수은 0.8ppm이상의 처리군에서는 생식 세포형성에 보다 심한 저하를 가져 왔으며 그후의 증가율도 대체로 낮았다. 위의 사실들은 자외선 조사 실험에서 얻은 결과와는 달리 양서류란에 있어서 중금속 처리는 조직에 심한 손상을 주는 다량투여에도 시원생식세포의 완전 배제에는 효과가 적다는 것을 암시한다.

• BMB Reports
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• 제43권6호
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• pp.438-444
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• 2010

Dnd (dead end) gene encodes an RNA binding protein and is specifically expressed in primordial germ cells (PGCs) as a vertebrate-specific component of the germ plasma throughout embryogenesis. By utilizing a technique of specific nucleic acids associated with proteins (SNAAP), 13 potential target mRNAs of zebrafish Dnd (ZDnd) protein were identified from 8-cell embryo, and 8 target mRNAs have been confirmed using an RT-PCR analysis. Of the target mRNAs, the present study is focused on the regulation of geminin, which is an inhibitor of DNA replication. Using electrophoretic mobility shift assay (EMSA), we demonstrated that ZDND protein bound the 67-nucleotide region from 864 to 931 in the 3'UTR of geminin mRNA, a sequence containing 60.29% of uridine. Results from a dual-luciferase assay in HEK293 cells showed that ZDND increases the translation of geminin. Taken together, the identification of target mRNA for ZDnd will be helpful to further explore the biological function of Dnd in zebrafish germ-line development as well as in cancer cells.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제25권3호
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• pp.173-183
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• 2021

The incidence of infertility among individuals of reproductive age has been growing due to genetic and environmental factors, and considerable research efforts are focused on solving this issue. Ovarian development is an overly complex process in the body, involving the interaction between primordial germ cells and gonad somatic cells. However, follicles located in the center of the in vitro ovary are poorly formed owing to ovarian complexity, nutrient deficiency, and signaling deficiency. In the present study, we optimized methods for dissociating gonads and culture conditions for the in vitro generation of miniaturized ovaries. The gonads from embryos were dissociated into cell masses and cultured on a Transwell-COL membrane for 3-5 weeks. Approximately 12 follicles were present per in vitro ovary. We observed that miniaturized ovaries successfully matured to MII oocytes in vitro from 150 to 100 ㎛ gonad masses. This method will be useful for investigating follicle development and oocyte production.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2003년도 학술발표대회 발표논문초록집
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• pp.51-51
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• 2003

Oct-4 is a maternally expressed octamer-binding protein encoded by the murine Oct-4 gene. It is present in unfertilized oocytes, but also in the inner cell mass and in primordial germ cells. In addition, Oct-4 is the first transcrition factor described that is specific for the blastocysts stage bovine embryos. The spatial and temporal expression patterns were further determined using Immunohistochemistry. With this technique Oct-4 protein expression is detected in the oocyte, in the blastocyst. After pregnancy Oct-4 expression is restricted ovary and placental tissue. Therefore Oct-4 is a transcription factor that is specifically expressed in cells participating in the pregnancy of Korean native cattle. These result suggest that Oct-4 localization and expression may contribute to the defects in the developmental normal seen in Korean native cattle.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2004년도 제21차 정기총회 및 학술발표회
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• pp.9-10
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• 2004

형질전환 가금의 생산은 생체반응기(Bioreactor)가금에 의한 고부가가치의 생의약 물질을 저비용, 고효율로 생산할 수 있으며, 배 발달과정 및 유전자 조절기작 규명을 통한 학문적 이용성 등 다양한 분야에 응용될 수 있다. 형질전환 가금을 생산하기 위한 방법 중 닭의 배 발생 초기에 발생하는 성세포(정자 혹은 난자)의 전구세포인 원시생식세포를 이용한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 그러나 이를 검증할 원시생식세포 특이적 마커의 부재로 많은 어려움을 겪고 있다. 따라서 본 연구는 원시생식세포의 특성 분석을 위해 PAS(Periodic acid-Schiff) 염색 및 특이항체 (SSEA-1,3,4 & Integrins $\alpha$6, $\beta$l) 그리고 lectins (STA, DBA, ConA, WGA)를 이용하였다. 이번 연구결과를 통한 닭 원시생식세포의 특이적 마커의 개발은 원시생식세포를 이용한 가금의 형질전환 연구에 기여할 것이다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제9권3호
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• pp.255-260
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• 1994

원시생식세포(primordial germ cell; PGC)는 성성숙 이후에 기능을 갖는 생식세포의 근원이 되는 세포로서, 다능성을 갖고 있는 것으로 알려져 있다. 그러므로 chimera 및 유전자 변환동물 생산을 위해 널리 사용되어 온 배아주(embrynic stem; ES)세포를 대신할 다른 세포계라고 생각되어져 많은 연구가 진행되고 있다. 본 실험은 체외배양을 통하여 원시생식세포의 증식과 확립을 위해 배양조건을 구명하고, 또한 성장인자의 효과를 검증하기 위하여 실시되었다. 원시생식세포는 12.5일째의 ICR 생쥐태아의 원시생식선 융기조직으로부터 추출하였으며, DMEM + 20% FCS + nucleosides + antibiotics로 조성된 sDMEM 배양액을 사용하여 mitomycin C로 전처리한 되먹임세포단층(feeder layer)위에서 체외배양하였다. bFGF 및 LIF를 20, 40ng/ml농도로 각각 또는 함께 첨가하여 성장인자의 효과를 검토하였다. 원시생식세포는 성에 따라 유의적인 colony 형성율을 보였고(♂:1.9 colonies / genital ridge, ♀:1.3 colonies / genital ridge), bFGF 및 LIF의 첨가 및 첨가농도에 따라서도 유의성 있는 결과를 보였다(0.3~1.9 colonies / genital riege). 그러나 3회 이상 계대배양을 할 경우, 원시생식세포의 colony를 4% prarformaldehyde로 20분간 고정한 후, tris-maleate buffer(pH 9.0)로 10분간 3회 세정하였다. Fast Red로 염색을 실시한 결과, 대부분의 colony가 염색반응을 보여 다능성을 갖는 원시생식세포의 colony임이 입증되었다. 그러나 대부분의 colony가 3회 이상의 계대배양시 생종율이 급격히 떨어지는 것을 감안하면, 또 다른 미지의 성장인자나 보다 적절한 배양조건이 요구된다고 생각된다.