본 연구는 오리엔탈 나리 'Casa Blanca' 의 기내인편에서 저반부가 비대된 자구를 형성하고, 형성된 자구절편을 배양하여 저반부가 비대된 자구의 증식 및 자구를 비대시키는, 5 L의 생물반응기를 이용한 일련의 대량생산 체계를 확립하기 위하여 실시하였다. 5 L airlift 생물반응기를 이용한 액체배양에서는 저반부가 비대된 자구의 형성 및 증식은 전혀 이루어 지지 않았으며, 인편엽만 무성하게 자랐다. 재료가 배지에 일시적으로 침지되는 ebb & flood형의 생물반응기에서 저반부가 비대된 자구 절편체를 배양한 결과, 저반부가 비대된 자구들이 증식하였다. 광은 자구의 증식에 영향을 미치지 않았으나, 명배양에서는 인편엽의 발생률이 높았으며, 저반부가 비대된 자구 증식은 MS 배지에 BA 2.0 mg/L와 IAA 0.3 mg/L가 첨가된 배지에서 양호하였다. 5L airlift 생물반응기에서 저반부가 비대된 자구 절편체로부터 자구비대는 MS 배지에 sucrose 70 g/L가 첨가된 배지에서 액체배양하는 것이 양호하였으며, 16주 배양기간 동안 배양 8주 후에 배지를 교체하는 것이 자구비대에 효과적이었다. 또한 5 L의 생물반응기에 3 L 액체배지에는 절편체를 15 g을 주입하는 것이 자구비대에 적절하였다.
양돈폐수의 효율적인 혐기성 처리를 위하여 실험실 규모 UASB, AF, 그리고 이단 ASBF 생물반응기를 구성하고 HRT 1일과 OLR $5.1kg-COD/m^3{\cdot}d$까지 200일간 연속운전하고 운전인자가 공정에 미치는 영향과 처리효율을 비교하였다. 양돈폐수는 유기물, 고형물, 그리고 암모니아를 고농도로 함유하고 있으며 축사의 형태와 계절의 변화에 큰 영향을 받는다. 하수종말처리장 혐기성 소화조 잉여 슬러지에 의한 혐기성 생물반응기의 식종은 효과적이었으며 적응기간은 약 40일 정도 소요되었으나 media로 충전된 필터형 생물반응기인 AF와 이단 ASBF의 적응 속도가 UASB보다 빨랐다. 유입수 T-N 370~800mg/L에서 생물반응기는 77~91% 의 높고 안정된 COD 제거율을 보였으나 유입수 T-N 760~1,310 mg/L에서 COD 제거율은 24~94%로 불안정하였으며 전반적으로 감소되었다. 양돈폐수에 함유된 암모니아는 메탄균에 대한 저해작용을 나타낼 수 있는 충분한 농도이므로 효율적인 혐기성 소화처리를 위하여 전처리로서 암모니아의 제거는 필수적이다. 생물반응기는 $1.1{\sim}2.2kg-COD/m^3{\cdot}d$의 비교적 낮은 OLR에서 COD 제거효율은 78.9~81.5%, 그리고 biogas 발생량은 $0.39{\sim}0.59m^3/kg-COD_r$로 효과적이었으나 유입수 COD의 증가 혹은 HRT 단축운전에 의한 OLR의 증가에 따라 COD 제거효율은 감소하였으며 UASB는 AF와 이단 ASBF보다 COD 제거효율 감소폭이 컸다. AF와 이단 ASBF는 충전된 media와 이단화에 의하여 biomass의 보유능력이 우수하며 높은 OLR에도 안정적이며 높은 COD 제거율올 나타내므로 고농도의 유기물을 함유하며 축사의 형태와 계절에 따라 특성의 변화가 큰 양돈폐수의 처리에 효율적이다.
Plant cell culture provides a viable alternative over whole plant cultivation for the production of secondary metabolites. In order to successfully cultivate the plant cells at large scale, several engineering parameters such as, cell aggregation, mixing, aeration, and shear sensitivity are taken into account for selection of a suitable bioreactor. The media ingredients, their concentrations and the environmental factors are optimized for maximal synthesis of a desired metabolite. Increased productivity in a bioreactor can be achieved by selection of a proper cultivation strategy (batch, fed-batch, two-stage etc.), feeding of metabolic precursors and extraction of intracellular metabolites. Proper understanding and rigorous analysis of these parameters would pave the way towards the successful commercialization of plant cell bioprocesses.
마늘 (Allium sativum L.) 다신초를 생물반응기를 이용, sucrose 2%가 포함된 MS 배지에서 3주간 증식시킨 후 microbulb의 형성을 위해 NAA 0.1 mg/L와 sucrose 11%가 포함된 MS 배지에서 9주간 배양하였다. 다신초 증식의 경우, 잎을 제거하지 않았을 때 90% 이상이 과수화되었고 과수화 된 신초의 세포는 크기와 형태가 일정하지 않았으며 microbulb의 형성도 이루어지지 않았다. 신초 배양 3주 후 표피의 부정아 세포에서 분열이 활성화되면서 부정아가 비대되었고 신초의 분열조직에서 수층과 병층으로 분열이 일어나 크게 비대된 후 배양 7주부터 microbulb를 형성하였다. Ploidy analyzer를 이용한 배수성 검정에서 다신초와 microbulb의 피크 모두, 모주 식물의 상대적인 피크와 동일한 위치에서 나타나 배수성의 변이가 없는 것으로 나타나 배양체가 모주 식물과 유전적으로 동일함을 입증하였다.
The kinetics of Ti-transformed Salvia miltiorrhiza cell cultures was studied in 250-$m\ell$ shake flasks by using B5 medium with addition of 30 gfL of sucrose. In the cell cultures, the maximum cell mass obtained was 11.5 g DW/L on day 15. The highest amount of phenolic compounds - rosmarinic acid (RA) and lithospermic acid B (LAB) reached 871.3 mg/L (day 15) and 121.3 mg/L (day 13), respectively. The total tanshinone production, i.e., intracellular plus extracellular cryptotanshinone, tanshinone 1, and tanshinone IIA, was 5.3 mg/L on day 13. For the cultivations in 2.4-L stirred bioreactors, the residual sugar level and medium conductivity were a little higher in a small turbine impeller reactor ($T_s$) than those in a large turbine impeller reactor ($T_L$), while a higher cell density was obtained in the $T_L$. For the production of tanshinones and phenolics, better results were obtained in the $T_L$ than in the $T_s$. In the $T_L$, similar or even a little higher production titers of tanshinones and phenolic compounds were achieved compared to those in the flasks. The results suggest that the shake flask results could be successfully scaled up to the $T_L$ reactor. Such a large impeller reactor like $T_L$ may be better than a small impeller one for the large-scale production of the valuable metabolites by the suspension cultures of Ti transformed S.miltiorrhiza cells. This is considered due to the beneficial culture environment in the $T_L$, such as low shear rates as estimated theoretically.
Plant expression systems have been developed to produce anti-cancer vaccines. Plants have several advantages as bioreactors for the production of subunit vaccines: they are considered safe, and may be used to produce recombinant proteins at low production cost. However, several technical issues hinder large-scale production of anti-cancer vaccines in plants. The present review covers design strategies to enhance the immunogenicity and therapeutic potency of anti-cancer vaccines, methods to increase vaccine-expressing plant biomass, and challenges facing the production of anti-cancer vaccines in plants. Specifically, the issues such as low expression levels and plant-specific glycosylation are described, along with their potential solutions.
Ochoa-Villarreal, Marisol;Howat, Susan;Hong, SunMi;Jang, Mi Ok;Jin, Young-Woo;Lee, Eun-Kyong;Loake, Gary J.
BMB Reports
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제49권3호
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pp.149-158
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2016
Plants have evolved a vast chemical cornucopia to support their sessile lifestyles. Man has exploited this natural resource since Neolithic times and currently plant-derived chemicals are exploited for a myriad of applications. However, plant sources of most high-value natural products (NPs) are not domesticated and therefore their production cannot be undertaken on an agricultural scale. Further, these plant species are often slow growing, their populations limiting, the concentration of the target molecule highly variable and routinely present at extremely low concentrations. Plant cell and organ culture constitutes a sustainable, controllable and environmentally friendly tool for the industrial production of plant NPs. Further, advances in cell line selection, biotransformation, product secretion, cell permeabilisation, extraction and scale-up, among others, are driving increases in plant NP yields. However, there remain significant obstacles to the commercial synthesis of high-value chemicals from these sources. The relatively recent isolation, culturing and characterisation of cambial meristematic cells (CMCs), provides an emerging platform to circumvent many of these potential difficulties.
Molecular farming is production of pharmaceutically and industrially important proteins in plants. Plants and plant cell culture systems have been used as bio-factory to produce recombinant proteins such as monoclonal antibodies, enzymes, vaccines, hormones, interleukins, commercial enzymes and etc. The terms molecular farming, biofarming, molecular pharming, phytomanufacturing, recombinant or plant-made industrials, planta-pharma, plant bioreactors, plant biofactory, and pharmaceutical gardening are used interchangeably. Molecular farming can provide safe and inexpensive pharmaceutical proteins as well as commercial ones. In spite of several advantages of molecular farming such as safety and inexpensive cost, there are also a couple of drawbacks in the existing technology. One of them is low expression level of target gene in plants, which has been improved by optimizing gene-based codon usage, screening of strong promoters, expression of transcription factors, subcellular targeting of target proteins, chloroplast transformation, and transient expression using viral expression system (magnifection). Some plant-based commercial proteins have already been in markets and more than twenty plant-based pharmaceuticals have been in clinical trials, from that we can expect that several plant-based pharmaceutical proteins will be seen in the markets in the near future.
Several genetic strategies have been proposed for the successful transformation and expression of microbial transgenes in model and crop plants. Here, we bring into focus the prominent applications of microbial transgenes in plants for the development of disease resistance; mitigation of stress conditions; augmentation of food quality; and use of plants as "bioreactors" for the production of recombinant proteins, industrially important enzymes, vaccines, antimicrobial compounds, and other valuable secondary metabolites. We discuss the applicable and cost-effective approaches of transgenesis in different plants, as well as the limitations thereof. We subsequently present the contemporary developments in targeted genome editing systems that have facilitated the process of genetic modification and manifested stable and consumer-friendly, genetically modified plants and their products. Finally, this article presents the different approaches and demonstrates the introduction and expression of microbial transgenes for the improvement of plant resistance to pathogens and abiotic stress conditions and the production of valuable compounds, together with the promising research progress in targeted genome editing technology. We include a special discussion on the highly efficient CRISPR-Cas system helpful in microbial transgene editing in plants.
Forest medicinal resources, which constitute one of the non-timber forest products, have been regarded as healthy and highly valued products. To meet the increasing demand of the medicinal resources, it is necessary to improve the propagation methods of medicinal plants. In vitro propagation not only allows an opportunity for propagating plants in large numbers but also allows for enhancing the quality and quantity of the desired functional component of a plant by altering the growth factors, such as medium, carbon source, and plant growth regulators influence plant. There have been several studies of in vitro propagation methods, such as axillary bud culture, shooting, and embryogenesis, on Kalopanax septemlobus, Eleutherococcus sessiliflorus, Hovenia dulcis, and Schisandra chinensis in Korea between from 2000 through 2010. Furthermore, there have been attempts to proliferate callus and plantlets for producing useful natural compounds by using bioreactors. Here, we provide an account of the in vitro propagation methods of medicinal trees in Korea based on a review of several micropropagation studies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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