Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.28
no.3
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pp.165-170
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2008
Timothy (Phleum pratense L.) is an important grass species as forage. In order to optimize tissue culture conditions of timothy, the effects of plant growth regulators on callus induction and plant regeneration was investigated with mature seeds of colt cultivar. The optimal concentration of 2,4-D for the induction of primary callus from mature seeds was 3 mg/L. The highest embryogenic callus frequenc (25%) was observed when the mature seed were cultured on MS medium supplemented with 3 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L BA. The highest plant regeneration frequency was observed when type B callus was transferred to N6 medium supplemented with 1 mg/L 2,4-D and 3 mg/L BA. Regenerated plants were grown normally when shoots were transplanted to the soil. A short tissue culture period and regeneration system would be beneficial for molecular breeding of timothy by the production of transgenic plant.
This study was carried out to investigate the possibility of plant regeneration through somatic embryogenesis in suspension culture of Aralia elata S. Callus was induced from the explants of leaf and petiole cultured in the MS media containing 2,4-D and TDZ. More embryogenic calli were formed from petiole and with combination treatment of 24-D and TDZ. The quarter strength MS medium was effective for increasing number of somatic embryos. Mannitol supplemented to the quarter strength MS medium, reduced somatic embryo formation but inositol increased. Normal plantlets(86%) were regenerated from mature somatic embryos in MS basal medium and 50% of those survied when transplanted to the vermiculite in greenhouse.
Sweet potato has low regeneration capacity, which is a serious obstacle for the fruitful production of transgenic plants. Simple and rapid regeneration method from storage root explants of purple sweet potato (Ipomoea batatas L.) was investigated. The embryogenic callus was observed from 4 cultivars and its highest rate was induced at 1 μM 2,4-D after 5 weeks of culture. Result revealed that a low concentration of 2,4-D and low light intensity was important factors for embryogenic callus formation. After subculture on medium with 5 μM ABA for 4 days, subsequently, occurred the regeneration of shoots within 4 weeks when these embryogenic callus was transferred onto the MS hormone free medium. Regenerated shoots were developed into platelets, and grown normal plants in the greenhouse. We developed a simple and quickly protocol to regenerate plantlets in storage root explants of purple sweet potato. This regeneration system will facilitate tissue culture and gene transfer research of purple sweet potato.
The effects of plant growth regulators on callus formation and organogenesis in shoot tip explant of Belancanda chinensis were examined. Shoot tip explants cultured in full salt strength of MT(Murashige and Tucker) medium containing 2,4-D 1.0 or 2.0mg/l were vigorously formed callus. Full salt strength of MT medium and 1/2 MT medium supplemented with zeatin 1.0mg/l were more effective than that with combination treatments of 2,4-D on the formation of shoots from calli. When shoots regenerated from shoot tips were transplanted into 1/2 MT medium added with 1.0mg/l, 41% of shoots formed roots.
In this study, we established a novel somatic embryogenesis and plant regeneration system through cell suspension culture of white dandelion (Taraxacum coreanum NAKAI.). Embryogenic calli could be initiated from leaf and root explants of sterile seedlings on solid Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 1.0 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) after 3-week cultures. To proliferate embryogenic calli rapidly, cell suspension culture was performed with transferred to liquid MS medium with various combinations of plant growth regulators (PGRs) including 2,4-D, ${\alpha}$-naphthalene acetic acid (NAA), indole-3-acetic acid (IAA), $N^6$-benzylamino purine (BAP), thidiazuron (TDZ), and kinetin. During suspension cultures, embryogenic calli not only greatly proliferated, but shoot organogenesis also simultaneously occurred from the surface of somatic embryos. Among them, TDZ at lower concentration, 0.1 mg/L produced the highest efficiency of somatic embryo formation and shoot organogenesis. Rooting of embryogenic calli with adventitious shoots was done on solid MS medium containing 0.1 mg/L NAA and 0.3% activated carbon. Nearly 80% of embryogenic calli with shoot organogenesis could be rooted normal. Well-rooted plantlets were transferred into pots under a greenhouse condition, and plants derived from this system appeared phenotypically normal.
New tree wound-treatment formulations (WTF) were developed in this study. Stimulating effects of plant growth regulating substance on callus formation were evaluated in vivo twig disc culture of Zelkova serrata, Ziziphus jujuba, Pinus densiflora, Ginkgo biloba. and Aesculus turbinata. Based on the evaluation, WTF were prepared with 2,4-D, NAA, and IBA using xanthan gum as an extending agent. WTF were pasted on $2{\times}10cm$ artificial wound on the stem and the effects were evaluated 12 weeks later with the thickness of new callus-tissues. The effects varied with tree species and the growth regulators. In Z. serrata and A. turbinata, 2 mg/L of 2,4-D was the best WTF. In P. koraiensis and G. biloba, 8 mg/L of NAA and 1 mg/L of IBA were the best, respectively. Callus formation was quite lower in G. biloba compared to other species. Stimulating effect of thiophanate-methyl paste was excellent only in Z. serrata and lower than certain WTF in other species. Vaseline, which was used generally as an WTF, remained longer on the wound and causing decay. From the results, it could be recommended that 2,4-D, NAA and IBA were the best WTF for Z. serrata/A. turbinata, P. koraiensis and G. biloba, respectively.
Camptothecin is an anti-cancer monoterpene indole alkaloid. The gene encoding 1-hydroxy-2-methyl-2-(E)-butenyl 4-diphosphate reductase (designated as CaHDR), the last catalytic enzyme of the MEP pathway for terpenoid biosynthesis, was isolated from camptothecin-producing Camptotheca acuminata. The full-length cDNA of CaHDR was 1686 bp encoding 459 amino acids. Comparison of the cDNA and genomic DNA of CaHDR revealed that there was no intron in genomic CaHDR. Southern blot analysis indicated that CaHDR belonged to a low-copy gene family. RT-PCR analysis revealed that CaHDR expressed constitutively in all tested plant organs with the highest expression level in flowers, and the expression of CaHDR could be induced by 100 ${\mu}M$ methyl-jasmonate (MeJA), but not by 100 mg/L salicylic acid (SA) in the callus of C. acuminata. The complementation of CaHDR in Escherichia coli ispH mutant MG1655 demonstrated its function.
Kim Do-Hyun;Lee Dong-Gi;Lee Sang-Hoon;Woo Hyun-Sook;Lee Ki-Won;Choi Myung-Suk;Lee Byung-Hyun
Journal of Plant Biotechnology
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v.32
no.3
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pp.187-193
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2005
In an effort to optimize tissue culture conditions for genetic transformation of tall fescue (Festuca arundinacea Schreb.), an efficient plant regeneration system from seed-derived calli was established. MS medium containing 6 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) and 0.1 mg/L benzyladenine (BA) were optimal for embryogenic callus formation from mature seed and had a strong effect on successive plant regeneration. The plant regeneration frequency above 50% was observed when embryogenic calli induced in this medium were transferred to N6 medium supplemented with 1 mg/L 2,4-D and 3 mg/L BA. Among several basic media, MS and N6 medium were optimal for callus induction and plant regeneration, respectively. 'Kentucky-31' showed to have high frequencies of embryogenic callus induction and plant regeneration up to 58.3 and 50%, respectively. Addition of sucrose to the regeneration medium as a carbon source increased regeneration frequency up to 55%. A short tissue culture period and high-frequency regeneration system established in this study will be useful for molecular breeding of tall fescue through genetic transformation.
Park, Hyae-Jeong;Ahn, Young-Sup;Jeong, Byeong-Choon;Park, Hyeon-Yong
Journal of Plant Biotechnology
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v.30
no.3
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pp.245-249
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2003
This study was carried out to establish a regeneration system from leaf explant of purple sweetpotato(Ipomoea batatas L.) The optimal concentrations of plant growth regulators for callus induction and shoot formation were determined. The optimal combination for callus formation was 1$\mu$M 2,4-D 5$\mu$M BM, and highest yield of embryogenic calli were observed on Murashige and Skoog basal medium containing 0.5$\mu$M 2,4-D under light condition after 4weeks of culture. Embryogenec callus was subcultured on medium supplemented with 5$\mu$M ABA for 4 days. Subsequently, regeneration of adventitious shoots occurred when these embryogenic calli were transferred onto medium with 3∼6$\mu$M gibberellic acid. Regenerated shoots were developed into normal plantlets.
CaCDPK4, a full-length cDNA clone encoding Capsicum annuum calcium-dependent protein kinase 4, was isolated from chili pepper (Capsicum annuum L.). Deduced amino acid sequence of CaCDPK4 shares the highest homology with tobacco NpCDPK8 and chickpea CaCDPK2 with 79% identity. Genomic blot analyses revealed that CaCDPK4 is present as a single copy in pepper genome, but it belongs to a multigene family. CaCDPK4 was highly induced when pepper plants were inoculated with an incompatible bacterial pathogen. Induced levels of CaCDPK4 transcripts were also detected in pepper leaves by the treatment of ethephon, an ethylene-inducing agent, and high-salt stress condition. The bacterial-expressed GST-CaCDPK4 protein showed to retain the autophosphorylation activity in vitro. GUS expression driven by CaCDPK4 promoter was examined in transgenic Arabidopsis containing transcriptional fusion of CaCDPK4 promoter. GUS expression under CaCDPK4 promoter was strong in the root and veins of the seedlings. GW (-1965) and D3 (-1377) promoters conferred on GUS expression in response to inoculation of an incompatible bacterial pathogen, but D4-GUS (-913) and DS-GUS (-833) did not. Taken together, our results suggest that CaCDPK4 can be implicated on signal transduction pathway of defense response against an incompatible bacterial pathogen in pepper.
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