We herein report the development of an agarose-gel-immobilized recombinant bacterial biosensor simple system for the field monitoring of phenolic compounds. Escherichia coli cells harboring the pLZCapR plasmid, which was previously designed to express the ${\beta}$-galactosidase reporter gene in the presence of phenolic compounds, were co-immobilized with a substrate [chlorophenol red ${\beta}$-galactopyranoside (CPRG) in agarose gel, and dispensed to the wells of a 96-well plate. Field samples were added to the wells and color development was monitored. In the presence of 5 ${\mu}M$ to 10 mM of phenol, the biosensor developed a red (representing hydrolysis of CPRG) color. Other phenolic compounds were also detected by this immobilized system, with the pattern resembling that previously reported for the corresponding non-immobilized biosensor. The immobilized cells showed optimum activity when the gel was simultaneously supplemented with 6% dimethyl formamide (DMF), 0.1% SDS and 10 mM $CaCl_2$. The immobilized biosensor described herein does not require the addition of a substrate or the use of unwieldy instruments or sample pretreatments that could complicate field studies.
Effects of various nitrogenous compounds on the peroxidative activity of Korean radish (Rophanus sativus L.) isoperoxidase $A_1$ were examined by using anilino substrates, such as dianisidine and phenylenediamine. We also used phenolic substrates such as guaiacol, chlorogenic acid, caffeic acid, ferulic acid and esculetin. The peroxidation of dianisidine was stimulated by adenine and imidazole as much as 5 fold and 11 fold, respectively at pH 8. Moreover, about 4.8 fold and 8 fold stimulation of phenylenediamine peroxidation occurred by adenine and imidazole, respectively at pH 8. The stimulation by adenine and imidazole did not occur at the acidic pH range. The peroxidations of phenolic substrates, such as guaiacol, chlorogenic acid, caffeic acid, ferulic acid and esculetin, were not boosted greatly by any of the nitrogenous compounds tested. Notably, ammonium salt, which has been known for the excellent booster of horseradish peroxidase, did not affect the peroxidation of the Korean radish isoperoxidase $A_1$. The kinetic studies of dianisidine peroxidation with imidazole, as a model of boosting reaction, showed that neither the affinity of imidazole against dianisidine, nor the activation energy of dianisidine peroxidation changed during the activity boosting of isoperoxidase $A_1$.
The free, ester and insoluble bound phenolic acids in the extracts from defatted perilla seed flour were isolated and their antioxidative activities were evaluated in comparison with commercial synthetic antioxidants. Total phenolic content of the perilla seed was 0.75% as chlorogenic acid. Each percent ratio of the content of free, ester, and insoluble bound phenolic acid to total phenolic content was 87.5, 7.5 and 5.0% respectively. Chlorogenic acid was identified as a major phenolic acid and a small amount of caffeic acid was also identified in the free phenolic acid extract, but they were not found in soluble ester and insoluble bound phenolic extracts by two dimensional paper chromatography. Each type phenolic extract from 30g of deffated perilla flour showed antioxidant activity similar to that of BHT (0.02%, w/w) in 200g of soybean oil substrate inspite of the difference of each phenolic content.
In this study, antioxidative effectiveness of BHA, BHT of 0.02% was compared to that of separated phenolic acid, ester form and insoluble phenolic acid were extracted from 50g mustard seed removed fat antioxidative effectiveness was assumed, measuring Peroxide value, TBA value for 5 days, storaging respective substrate and contrast tube at $45{\pm}1^{\circ}C$ for 25 days. 1. Laboratory tube was added by BHA, BHT separated phenolic acid ester form and insoluble phenolic acid extract and peroxide value of contrast tube after 25 days storage were 31.9, 13.2, 16.6, 11.2, 35.91. On the other hand at the same condition TBA of each antioxidativity matter were 0.24, 0.16, 0.19, 0.17, 027, 0.35 as a result remarkably appeared antioxidative effectiveness in meal soybean oil substrate. 2. Total phenolic contents of free phenolic acid and insoluble phenolic acid in mustard were 13.2mg/10ml, 340.5mg/10ml, 2.1mg/10ml. 3. Phenolic acid separated and identificated were catechol, methylcatechol, salicylic acid, cinnamic acid, p-hydroxybenzoic acid, syringic acid, caffeic acid, sinapic acid.
Arylsulfate sulfotransferase (ASST) transfers a sulfate group from a phenolic sulfate ester to a phenolic acceptor substrate. In the present study, the gene encoding ASST was cloned from a genomic library copy of Citrobacter freundii, subcloned into the vector pGEM3Zf(-) and sequenced. Sequencing revealed two contiguous open reading frames (ORF1 and ORF2) on the same strand and based on amino acid sequence homologyl they were designated as astA and dsbA, respectively. The amino acid sequence of astA deduced from C. freundii was highly similar to that of the Salmonella typhimurium, Enterobacter amnigenus, Klebsiella, Pseudomonas putida, and Campylobacter jejuni, encoded by the astA genes. However, the ASST activity assay revealed different acceptor specificities. Using p-nitrophenyl sulfate (PNS) as a donor substrate, $\alpha$-naphthol was found to be the best acceptor substrate, followed by phenol, resorcinol, p-acetaminophen, tyramine and tyrosine.
Background: Red-skin root disease has seriously decreased the quality and production of Panax ginseng (ginseng). Methods: To explore the disease's origin, comparative analysis was performed in different parts of the plant, particularly the epidermis, cortex, and/or fibrous roots of 5-yr-old healthy and diseased red-skin ginseng. The inorganic element composition, phenolic compound concentration, reactive oxidation system, antioxidant concentrations such as ascorbate and glutathione, activities of enzymes related to phenolic metabolism and oxidation, and antioxidative system particularly the ascorbate-glutathione cycle were examined using conventional methods. Results: Aluminum (Al), iron (Fe), magnesium, and phosphorus were increased, whereas manganese was unchanged and calcium was decreased in the epidermis and fibrous root of red-skin ginseng, which also contained higher levels of phenolic compounds, higher activities of the phenolic compound-synthesizing enzyme phenylalanine ammonia-lyase and the phenolic compound oxidation-related enzymes guaiacol peroxidase and polyphenoloxidase. As the substrate of guaiacol peroxidase, higher levels of $H_2O_2$ and correspondingly higher activities of superoxide dismutase and catalase were found in red-skin ginseng. Increased levels of ascorbate and glutathione; increased activities of $\text\tiny L$-galactose 1-dehydrogenase, ascorbate peroxidase, ascorbic acid oxidase, and glutathione reductase; and lower activities of dehydroascorbate reductase, monodehydroascorbate reductase, and glutathione peroxidase were found in red-skin ginseng. Glutathione-S-transferase activity remained constant. Conclusion: Hence, higher element accumulation, particularly Al and Fe, activated multiple enzymes related to accumulation of phenolic compounds and their oxidation. This might contribute to red-skin symptoms in ginseng. It is proposed that antioxidant and antioxidative enzymes, especially those involved in ascorbate-glutathione cycles, are activated to protect against phenolic compound oxidation.
Klebsiella K-36 producing novel sulfotransferase was isolated from rat intestinal flora. The novel sulfotransferase catalyzed the transfer of sulfate group from p-nitrophenylsulfate to phenolic compounds but it did not use PAPS(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate) as a donor substrate. The present enzyme was 160 K daltons. Optimal pH was 10. When p-nitrophenyl sulfate was used as a donor substrate, 1-naphthol was the best substrate, followed by phenol, phenanthrol and tyrosine. The apparent Km for phenol using p-nitrophenylsulfate as a donor substrate and that for p-nitrophenylsulfate using phenol as an acceptor substrate were determined to be 0.66 mM and 0.11 mM, respectively.
Sixteen kinds of naturally occurring phenolic compounds including 5 stilbenes, 7 flavonoids and 4 anthraquinones were examined in the inhibitory activity against rat liver AADC(aromatic L-amino acid decarboxylase) in vitro, using 5-hydroxytryptophan as a substrate. Three hydroxystilbenes, resveratrol 1, rhapontigenin 3 and piceatanol 5, which were known to be monoamine oxidase A inhibitors, exhibited a significant inhibition against AADC($IC_{50}$=20, 8 and $5\;{\mu}M$, respectively). By the comparison of the activity of each phenolic compound, it was suggested that the 3',4'-dihydroxyphenyl group of stilbenes or flavones was the best pharmacophore for the AADC inhibitory activity.
The current investigation was carried out to explore the possibility of submerged fermentation of Saccharina japonica as sole substrate using Aspergillus oryzae. In this study we used 2% S. japonica powder as fermentation media for A. oryzae. Fermentation period was optimized by monitoring the fermented sample at regular intervals for a period of 7 days. Results found that a fermentation period of 5 days was effective with maximum desirable characteristics such as total sugar, total phenolic and flavonoid contents. Under optimum fermentation period, fermented extracts showed enhanced antioxidant activity as determined by different assays such DPPH radical scavenging, ABTS scavenging and phosphomolydenum assay. This study provides the information for the enhancement of bioactive molecules in an eco-friendly manner and also paves way towards the development of wide range of seaweed-based functional foods.
Three microbial consortia were screened for their ability to degrade phenolic resin, resole as a sole carbon source. These microbial consortia were derived from soil samples collected from a phenolic resin manufacturing plant site. Among the consortia, the test consortium, designated as MS2, displayed approximately 70% degradation of the substrate, 100 mg of resole per liter, within the fist twelve days of incubation but the degradation was inhibited. During the incubation period, pH was decreased from 7.0 to 2.7, and the resole degradation became inhibited under the conditions. UV-scans of spent culture showed that the wavelength of maximum absorption was 261 nm for resole.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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