• Molecules and Cells
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• 제28권1호
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• pp.13-17
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• 2009

Basic fibroblast growth factor (bFGF) plays an important role in angiogenesis. However, the underlying mechanisms are not clear. $Mg^{2+}$ is the most abundant intracellular divalent cation in the body and plays critical roles in many cell functions. We investigated the effect of bFGF on the intracellular $Mg^{2+}$ concentration ($[Mg^{2+}]_i$) in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). bFGF increased ($[Mg^{2+}]_i$) in a dose-dependent manner, independent of extracellular $Mg^{2+}$. This bFGF-induced $[Mg^{2+}]_i$ increase was blocked by tyrosine kinase inhibitors (tyrphostin A-23 and genistein), phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitors (wortmannin and LY294002) and a phospholipase $C{\gamma}$ ($PLC{\gamma}$) inhibitor (U73122). In contrast, mitogen-activated protein kinase inhibitors (SB202190 and PD98059) did not affect the bFGF-induced $[Mg^{2+}]_i$ increase. These results suggest that bFGF increases the $[Mg^{2+}]_i$ from the intracellular $Mg^{2+}$ stores through the tyrosine kinase/PI3K/$PLC{\gamma}$-dependent signaling pathways.

• 대한치과교정학회지
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• 제33권3호
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• pp.199-210
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• 2003

치아이동 시 발생하는 골흡수에서 이미 여러 cytokine의 중요성이 강조된 바 있으며 이 가운데 interleukin-6는 구강 및 연골조직 등에서 많은 연구의 초점이 되어 왔으나 확실한 기전은 아직까지 정확히 확립되어 있지 못하다 골흡수 시 조골세포에서 유리되는 interleukin-6 (IL-6)와 nitric oxide (NO) 등이 골흡수의 조절자로 최근 대두되고 있으며 Mitogen-activated Protein kinase (MAPK)의 활성화로 인해 염증성 cytokine등이 유리될 수 있음이 최근 macrophage 등에서 증명된 바 있다. 그러므로 치아이동을 비롯한 구강 내 여러 염증의 조건에서 골흡수의 대표인자인 IL-6및 NO유리가 MAPK등의 활성 등을 통해 조절될 수 있는 가능성을 시사하고 있다. 본 연구에서 조골세포 특징을 대부분 가지고 있는 조골세포주 MC3T3El에서 p-38 MAP kinase을 매개로 NO와 IL-6가 유리됨을 확인하고자 하였다. $10\%$ Fetal Bovine Serum이 첨가된 -MEM 배양액으로 배양한 조골세포주인 MC3T3El 세포에 tumor necrosis $factor-\alpha(TNF-\alpha)$, $interferon-\gamma(IFN-\gamma)$ 및 lipopolysacchalide(LPS) 등의 단독처리 시 NO와 IL-6의 증가는 확인되지 않았으나 $TNF-\alpha/IFN-\gamma$ 혹은 $LPS/IFN-\gamma$ 등의 처치시 NO와 IL-6의 유의한 증가를 보였으며, NO발현에 직접 관여하는 inducible nitric oxide synthase (iNOS)와 IL-6 단백질 및 mRNA의 발현을 관찰하였다. 또한 specific p-38 MAP kinase inhibitor인 SB203580의 NO와 IL-6의 생성 억제를 관찰하고 단백질과 mRNA발현억제를 통해서도 확인함으로써 SB203580은 transcription 단계에서 NO와 IL-6의 생성을 조절하고 있음을 시사하여 주고 있다. $TNF-\alpha/IFN-\gamma$ 혹은 $LPS/IFN-\gamma$ 처치 시 p-38 MAP Kinase의 활성을 관찰하였으나 단독 처치 시 역시 P-38 MAP Kinase의 활성을 확인함으로써 NO와 IL-6생성기전에는 p-38 MAP Kinase이외에 다른 인자 역시 관여하고 있음을 보여주고 있다. 본 연구에서는 치아 등의 골조직의 구성 세포인 조골세포에서 NO와 IL-6유리를 확인하였으며, 또한 이들의 생성기전중의 하나로 p-38 MAP Kinase가 transcription 단계에서 관여하고 있음을 확인하였다.

• 한국균학회지
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• 제45권3호
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• pp.212-223
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• 2017

비병원성 야생효모들로부터 새로운 항염물질을 생산하고자 우리나라 주요 섬과 산에서 분리, 동정한 야생 효모들 중 비병원성 효모들의 무세포 추출물들을 제조하여 이들의 nitric oxide (NO) 생성 저해활성을 측정하였다. 182 균주 중 Metschnikowia reukaufii SY20-7, Rhodotorula ingeniosa SY1-1, Yarrowia lipolytica SY51-1, 51-3, Meyerozyma guilliermondii YJ34-2, Rhodotorula graminis YJ36-1, Rhodotorula nothofagi YJ1-1, YJ22-2, Metschnikowia koreensis UL32-1, Sporobolomyces carnicolor UL32-3 등 10 균주들의 무세포 추출물들이 30% 이상의 NO 생성 저해활성을 보였다. 이들 중 유포자효모들에서는 Rhodotorula graminis YJ36-1가 가장 높은 57.4%의 NO 생성 저해활성을 보였고 무포자효모들에서는 Meyerozyma guilliermondii YJ34-2가 47.0%로 가장높아 항염물질생산 우수효모로 최종 선발하였다. 선발된 야생효모들의 미생물학적 특성을 조사한 결과 Rhodotorula graminis YJ36-1 균주는 자낭포자와 위균사를 형성하였고 $25^{\circ}C$에서 잘 생육하였으며 Meyerozyma guilliermondii YJ34-2는 자낭포자와 위균사를 형성하지 않았고 $30^{\circ}C$, 5%의 NaCl 함유 YPD 배지에서도 잘 생육하였다. 또한, 두 효모 모두 pH 4.0~8.0에서 생육하였고 YM, PD, YPD, 비타민 무함유 배지 등에서 잘 생육하였다.

• 생명과학회지
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• 제18권7호
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• pp.952-957
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• 2008

본 실험에서는 THP-1 세포의 PMA에 의하여 유도되는 초기 세포부착에 관한 메카니즘을 이해하기 위하여 다양한 요인(혈청, 신규 단백질의 합성, 세포 골격 저해제, 단백질 인신화 저해제)들의 효과를 조사하였다. 또한 본 실험에서는 이들 세포부착의 정도를 일반적으로 세포증식 분석에 사용되고 있는 SRB염색법을 도입하여 세포부착 분석에 간편한 방법의 조건을 확립하였다. PMA에 의한 초기 세포부착에는 배양액중의 혈청의 유무는 영향이 없었으나, 신규 단백질의 합성이 요구되는 것을 확인하였다. 또한 이들 초기 세포부착에 PMA처리에 의한 PKC의 활성화는 필수적이나, 그 하류 활성화 인자로 잘 알려진 MAP-kinase (erk1/2)의 인산화는 필요치 않음을 알 수 있었다. 흥미롭게도 액틴 중합 저해제인 cytochalasin D의 PMA와 공 처리는 오히려 세포부착을 PMA 단독 처리시 보다 증가시켰다. 또한 본 실험에서 사용된 SRB 염색법을 통한 세포부착 분석법은 최근 암 등 다양한 질환의 신약 표적 분자로 주목을 받고 있는 PKC 저해제의 초기 세포 기반 분석에 매우 유용하리라고 생각된다.

• 동의생리병리학회지
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• 제23권1호
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• pp.76-83
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• 2009

Rehmannia Radix Preparata (RRP) used to nourish Eum and enrich blood for consumptive fever, aching, and limpness of the loins and knees, and to replenish essence for tinnitus, premature greying of beard and hair. In the present study, we studied about the protective effect of RRP on hydrogen peroxide-induced oxidative stress in human vascular endothelial cells. ECV304 cells were preincubated with RRP (100, 200, 300 and $400{\mu}g/m{\ell}$) for 12hr and then treated with $600{\mu}M$ $H_2O_2$ for 12hr. The protective effects of RRP on $H_2O_2$-induced apoptosis in ECV304 cells was determined by using MTT assay, FDA-PI staining, flow cytometric analysis, caspase-3 activity assay, ROS assay and western blot. The results of this experiment showed that RRP inhibited $H_2O_2$-induced apoptosis and ROS production in ECV304 cells. Moreover, RRP increased ERK activation that decreased in $H_2O_2$-treated ECV304 cells, and inhibited p38 and JNK activation. Furthermore, RRP increased expression of heme oxygenase-1 (HO-1) in $H_2O_2$-treated ECV304 cells. Also, HO-1 protein expression induced by RRP was reduced by the addition of ERK inhibitor (PD98059) in $H_2O_2$-treated ECV304 cells. These results suggest that protective effect of RRP on $H_2O_2$-induced oxidative stress in ECV304 cells may be associated with increase of ERK activation and HO-1 protein, and reduction of p38 and JNK activation.

• BMB Reports
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• 제34권3호
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• pp.237-243
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• 2001

Taxol, a natural product extracted from the Taxus brevifolia, is known to have significant anti-tumor activities against many common cancers, including ovarian and breast cancers. Despite the pronounced anti-tumor activity of this compound, its poor solubility in aqueous solutions hampers its clinical applications. We studied the anticancer mechanisms of the water-soluble taxol diethylenetriamine pentaacetate (DTPA) used for radiolabeling, and compared it to that of taxol. In vitro cytotoxicities of taxol and taxol-DTPA conjugate were tested in HT29 human colorectal cancer cells by the MTT method. As the result, the $IC_{50}$ value of the taxol-DTPA conjugate was about three fold higher than that of taxol. When analyzed by an agarose gel electrophoresis, the DNA ladders became evident after the incubation of cells with the taxol-DTPA conjugate for 24 h. We also found morphological changes of the cells undergoing apoptosis with electron microscopy Next, we examined the signal pathway of taxol-DTPA conjugate-induced apoptosis in HT29 cells. The activation of extracellular signal-regulated protein kinase (ERK1/2) occurred at 10, 30, 60 and 120 min after 200 nM taxol-DTPA conjugate treatment. The pretreatment of the MEK inhibitor (PD98059) completely blocked the taxol-DTPA conjugate-induced ERK1/2 activation. The activated ERK1/2 translocated into the nucleus at the same time and phosphorylated its transcriptional factor, c-Jun. These results suggest that the taxol-DTPA conjugate has an apoptotic activity in HT29 cells, and that its proapoptic activity might be related with the signal transduction via ERK1/2 and c-Jun similar to that of taxol.

• 대한치과교정학회지
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• 제33권3호
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• pp.169-183
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• 2003

교정력에 의한 치아 이동은 기계적인 힘에 의하여 압박측에는 다양한 구조를 가진 치주 조직에 혈류의 변화가 생기며 국소적으로 산소 장력에도 변화가 생겨 저산소 상태 가 유발됨은 이미 확인한 바 있다. 본 연구는 치아 주위 골격을 형성하는 조골세포를 대상으로 교정적 치아 이동과 유사한 시험관내 조건을 설정하여 저산소 상태 시 유발되는 조골세포 고사조절 기전을 규명하고자 시행하였다. 생리적인 저산소증의 실험조건으로 $2\%$ 산소상태를 설정하여 저산소 하에서 세포가 고사(apoptosis) 됨을 확인하였고, stress유발 시 많은 관련을 가진 것으로 알려진 p-38 MAPK의 활성을 관찰하였다. 또한 p-38 MAPK의 억제제인 SB203580의 전처치로 인하여 세포의 죽음이 억제됨을 확인하였고, 저산소 상태 시 활성형태로 분절되는 caspase-3, -6및 9등의 세포고사관련 효소들의 활성 형태로의 분절이 억제됨을 확인하였으며 이러한 caspase의 기질인 Lamin-A등의 분절 또한 억제됨을 밝혔다. 또한 마이토콘드리아 내의 cytochrome c의 세포질내로의 이동 또한 조절됨을 확인함으로써 p-38 MAPK의 조절단계를 시사하여 주고 있다. 본 연구로 치아 이동 시 유발되는 저산소 상태 하에서 발생하는 조골세포의 고사 조절에 p-38 MAPK가 관여함을 확인하였다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권4호
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• pp.211-219
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• 2004

The effects of adenosine 5'-triphosphate (ATP) and ATP analogs, P/sub 2y/ purinoceptor agonists, on growth of normal mouse mammary epithelial cells (NMuMG) were examined. Cells were plated onto 24 well plates in DMEM supplemented with 10 % fetal calf serum. After serum starvation for 24 hours, ATP, P/sub 2y/ purinoceptor agonists (AdoPP[NH]P, ATP-α-S, ATP-γ-S, β, γ-me-ATP and 2me-S-ATP), P/sub 2u/ purinoceptor agonist (UTP) and P/sub 2y/ purinoceptor antagonists (Reactive Blue 2, more selective to P/sub 2y/ receptor than PPADS; PPADS) were added. DNA synthesis was estimated as incorporation of 3H-thymidine into DNA (1 hour pulse with 1 μ Ci/ml, 18～19 hours after treatment). ATP, Adopp[NH]P, ATP-α-S or ATP-γ-S, significantly increased DNA synthesis at 1, 10 and 100 μM concentrations with dose-dependency (P<0.05), and the maximum responses of ATP and ATP analogs were shown at 100 μM concentration (P<0.05). The potency order of DNA synthesis was ATP≥ATP- γ -S>Adopp [NH]P>ATP-α-S. β, γ -me-ATP, 2me-S-ATP and UTP did not increase DNA synthesis. In autoradiographic analysis of percentage of S-phase cells, similar results were observed to those of DNA synthesis. Addition of 1, 10 or 100 μM Reactive Blue 2 or PPADS significantly decreased ATP (100 μM)-induced DNA synthesis, however, PPADS was less effective than Reactive Blue 2. In Elvax 40P implant experiment, ATP directly stimulated mammary endbud growth in situ suggesting the physiological regulator of ATP in mammary growth. ATP 100 μM rapidly increased MAPK activity, reaching a maximum at 5 min and then gradually decreasing to the base level in 30 min. ATP analogs, Adopp[NH]P and ATP-γ-S also increased MAPK activity, however, β, γ-me-ATP and 2me-S-ATP did not. The inhibitor of the upstream MAPK kinase (MEK), PD 98059 (25 μM), effectively reduced ATP (100 μM) or EGF(10 ng/ml, as positive control)-induced MAPK activity and DNA synthesis (P<0.05). These results indicate that ATP-induced DNA synthesis was prevented from the direct inhibition of MAPK kinase pathway. Overall results support the hypothesis that the stimulatory effects of normal mouse mammary epithelial growth by addition of ATP or ATP analogs are mediated through mammary tissue specific P/sub 2y/ purinoceptor subtype, and MAPK activation is necessary for the ATP-induced cell growth.

• 대한한의학회지
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• 제26권1호
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• pp.174-186
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• 2005

Objectives : The water extract of Samul-tang (SMT) has traditionally been used for treatment of ischemic heart and brain damage in oriental medicine. However, little is known about the mechanism by which the water extract of SMT rescues cells from these damages. Methods: This study was designed to investigate the protective mechanisms of SMT on oxidative stress-induced toxicity in H9c2 cardiomyoblast cells. Treatment with $H_2O_2$ markedly induced death of H9c2 cardiomyoblast cells in a dose-dependent manner. Results: The characteristics of H20z-induced death of H9c2 showed apparent apoptotic features such as DNA fragmentation and morphological change. However, SMT significantly reduced both H202-induced cell death and morphological change. The decrease of Bc-2 expression by High were inhibited by SMT. In addition, the increase of Bax expression was also inhibited by SMT. The cotreatment of SMT and $H_2O_2$ in H9c2 cells also induced the phosphorylation of ERK in a time-dependent manner. Moreover, PD98059, a specific inhibitor of ERK1/2 attenuated the protective effects of SMT on $H_2O_2-induced$ toxicity in H9c2 cardiomyoblast cells. These results suggest that both ERK1/2 signaling pathways play important roles in the protective effects of SMT on $H_2O_2-induced$ apoptotic death of H9c2 cells. Also, the expression profile of proteins in $H_2O_2$ cardiomyoblast cells were screened by using two-dimensional (2-D) gel electrophoresis. Among 300 spots resolved in 2-D gels, the comparison of control versus apoptosis cells revealed that signal intensity of 17 spots increased and 11 spots decreased. Conclusions: Taken together, this study suggests that the protectiw effects of the water extract of SMT against oxidative damages may be mediated by the modulation of Bc1-2 and Bax expression via the regulation of the ERK signaling pathway.

• 생명과학회지
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• 제19권12호
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• pp.1690-1697
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• 2009

CD11c와 CD80 및 CD86과 같은 보조 수용체는 주로 수지상 세포에서 발현되는 세포 표지 인자이다. 본 연구에서는 KG-1, HL-60, NB4 및 THP-1 세포와 같은 여러 종류의 백혈병 세포를 이용하여 이들 세포에 재조합 Flt-3 리간드를 처리하였을 때 수지상 세포의 표면 인자인 CD11c의 발현에 어떠한 변화가 있는가를 조사하였다. KG-1 세포뿐만 아니라 NB4세포와 HL-60 세포에서도 Flt-3 수용체가 발현됨을 확인하였으나 THP-1 세포에서는 이들 수용체가 발현되지 않았다. KG-1 세포를 Flt-3 리간드나 granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF)와 tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$를 섞은 배양액에서 배양하였을 때 세포 증식은 억제되었으며 CD11c 발현은 현저히 증가되었다. 그러나 Flt-3 리간드를 처리한 KG-1세포에서는 GM-CSF와 TNF-$\alpha$를 처리한 세포에서와는 다르게 major histocompatibility complex (MHC)-I 및 MHC-II의 발현은 증가되지 않았다. Flt-3 리간드는 HL-60 세포와 NB4 세포의 CD11c 발현도 증가시켰으나 THP-1 세포에서는 아무런 영향이 없었다. CD11c의 발현과 비교하여 CD11b의 발현은 Flt-3 리간드에 의하여 KG-1 세포에서는 약하게 증가하였으나 NB4 세포와 HL-60 세포에서는 증가되지 않았다. KG-1 세포를 Flt-3 리간드로 처리하였을 때 extracellular signal-regulated kinase-1/2 (ERK-1/2)와 p38-mitogen-activated protein kinase (p38-MAPK)의 단백질 인산화가 증가되었으며 Flt-3 리간드에 의한 CD11c 발현의 증가는 MEK의 억제제인PD98059에 의하여 사라짐을 확인하였다. 본 연구 결과는 Flt-3 수용체 리간드의 처리에 의하여 $CD34^+$ myelomonocyte분화 단계인 KG-1 세포와 promyelocyte 분화 단계의 백혈병 세포에서 수지상 세포와 유사한 세포 형으로 분화된다는 것을 보였고 Flt-3 수용체 리간드에 의한 이들 백혈병 세포의 수지상 세포유사 세포로의 분화는 ERK-1/2의 활성화에 의하여 일어날 수 있음을 보여 준다.