The purpose of this study is to develop species-specific DNA probe for detection and identification of Prevotella intermedia (P. intermedia) G8-9K-3. This study procedure includes (1) whole-genomic DNA extraction of P. intermedia G8-9K-3 (2) construction of the genomic DNA library, (3) screening of strain-specific DNA probe by reverse dot hybridization, (4) confirmation of strain-specific DNA probe by Southern blot hybridization, (5) determination of nucleotide sequences of strain-specific DNA probe. Twenty-eight recombinant plasmids containing Hind III-digested DNA fragments of P. intermedia G8-9K-3 were obtained. Reverse Dot Hybridization and Southern blot analysis data showed that one of them, Pig3, could be P. intermedia G8-9K-3-specific DNA probe. This datum indicates that this Pig3 DNA probe could be useful in detection and identification of the P. intermedia G8-9K-3 strain.
본 연구는 hemin이 치주질환 주요 병인균주 중의 하나인 Prevotella intermedia의 성장 및 세포막 단백질의 발현에 미치는 영향을 규명하고, hemin 결합에 관여하는 것으로 추정되는 단백질의 순수분리 및 특성 분석을 위해 수행 되었다. 본 연구의 결과에 의하면, hemin은 P.intermedia의 성장 및 세포막 단백질의 발현에 영향을 미쳐, hemin이 고갈된 조건에서 균주의 성장이 현저히 억제되었으며, 약 50 kDa의 세포막 단백질이 현저히 강화되어 발현되었다. 본 연구에서는 hemin 결합에 관여하는 것으로 추정되는 이 50 kDa의 세포막 단백질을 순수분리하였으며, N'-terminal 아미노산 분석을 수행한 결과 이 단백질은 Streptococcus inter - medius의 Enolase와 아미노산 서열 및 분자량이 일치하였다. 한편, 이 단백질에는 disulfidebond가 존재하지 않았다. 본 연구는 P.intermedia에서의 porphyrin 생리 및 hemin 획득기전을 밝히는데 있어 중요한 의의가 있으리라 사료된다.
충치는 사람의 구강질환 중 가장 흔한 질환으로 Streptococcus mutans (S. mutans)균이 초기 충치를 형성하는데 매우 중요한 역할을 담당한다. Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis)는 대표적인 구취 유발균으로 구취 형성에 중요한 휘발성 황화합물을 생성하는데 관여한다. 치주질환은 치은결체조직과 치조골의 파괴를 유발하여 치아의 상실을 초래할 수 있는 만성 염증성 질환으로 Prevotella intermedia (P. intermedia)가 원인균이다. 이번 연구에서는 cetylpyridinium chloride (CPC), sodium fluoride (NaF), 녹차 추출액, 솔잎 추출액을 유효성분으로 하는 마우스워시 제품을 사용하여 S. mutans 균을 포함, 구강질환 균으로 널리 알려진 P. gingivalis, P. intermedia 대해 항균 효과를 확인하고자 하였다. 그 결과 시험군의 경우 S. mutans, P. gingivalis 에 대해 30 s 내에 4.00 Log, 4.68 Log의 사멸력을 확인하였고, P. intermedia의 경우 30 s 2.40 Log, 60 s 2.70 Log 사멸력을 확인하였다. 또한 Dentocult SM Strip mutans (SM Strip) 염색방법을 적용하여 S. mutans 균의 감소여부를 시각적 자료로 쉽게 확인할 수 있었다. 이와 같은 결과를 통해 CPC, NaF, 녹차 추출액, 솔잎 추출액을 포함한 마우스워시 제품은 구강균 사멸을 통해 충치 및 구취와 같은 구강질환 예방에 효과가 있을 것으로 기대한다.
흡연은 음주와 더불어 치주질환을 유발하는 원인 인자로 알려져 있으나, 흡연여부에 따른 구취와 구강 내 분포하는 미생물을 조사한 연구는 현재 매우 미비한 상태이다. 본 연구에서는 대학생을 대상으로 흡연자 30명, 비흡연자 30명을 선정하였다. 구강질환과 관련한 Streptococcus mutans 와 Prevotella intermedia 균들은 흡연자에서 30%, 비흡연자에서 7%로 흡연자에서 더 많이 검출되었으며, 1일 칫솔질 3회 이하에서 20%로 검출되어 통계적으로 유의하였다. 수분섭취량과 구취, 구강 미생물에서 차이를 확인한 결과 구강 미생물 중 P. intermedia는 통계적으로 유의한 차이가 있는 것으로 분석되었다(p<0.05). P. intermedia는 비흡연자보다 흡연자에서 세균이 더 검출되어 유의하였다(p<0.05). 지속적인 흡연은 구강을 직접적으로 자극하여 비흡연자에 비해 구강질환을 유발할 수 있는 세균이 우세하게 나타날 수 있으므로 흡연은 균주와 함께 구강 내 환경을 악화시켜 구강질환을 유발하는 원인임을 상기시켜 경각심을 주고, 더 나아가 학생들의 금연에도 긍정적 효과를 끼칠 것으로 기대한다.
Objectives: This study attempted to provide basic data necessary for a prevention promotion program for oral health management in college students. Methods: This study investigated general characteristics and subjective periodontal health status using a structured questionnaire and examined the distribution of bacteria related to periodontal disease in oral cavity by real-time PCR in subjects composed of 57 male and female college students. Results: It was statistically significant that P. gingivalis was detected more frequently in smokers with 25% compared to non-smokers with 6.1%, not detected in subjects that engaged in tooth brushing more than three times a day, and was detected in subjects that engaged in tooth brushing fewer than three times a day with 21.1%. Pathogens in saliva had significant correlations with each other (p<0.05, p<0.01, p<0.001). P. gingivalis showed positive correlations with T. forsythia, T. denticola, P. intermedia, and A. actinomycetemocmitans, and T. forsythia with P. intermedia, and A. actinomycetemocmitans. P. intermedia had a positive correlation with A. actinomycetemocmitans, and F. nucleatum with P. intermedia. Conclusions: Bacteria related to periodontal disease in oral cavities in college students were distributed in various ways, and smoking and the frequency of daily toothbrushing were found to be risk factors for the detection of bacteria.
The purpose of the research is to compare the distribution of Black-pigmented Bacteroides between Chronic Periodontitis and Aggressive Periodontitis. P. gingivalis, P. intermedia and P. nigrescens were examined in order to evaluate their distribution in patients with Chronic Periodontitis(CP) and Aggressive Periodontitis(AP). PCR and dot-blots hybridization of 16s rRNA gene were used to compare bacterial distribution of two groups - CP group and AP group, which were divided into two subgroups. Subgingival plaque taken from the diseased sites(pocket $depth{\geq}6$ mm) and healthy sites(pocket $depth{\leq}3$ mm) were grouped into the experimental group and the control group. The result are as follows ; 1. The distribution of P. gingivalis was 98.33% for chronic Periodotitis(CP), 94.17% for Aggressive Periodontitis(AP), the distribution of P. intermedia was 77.50% for CP, 64.17% for AP, and the distribution of P. nigrescens was 35.00%, 29.17%. In all 3 types of bacteria, CP group showed higher distribution compared to AP group, but only P. intermedia showed statistically significant difference. 2. In the case of CP, every type of bacteria showed higher distribution in the experimental group with statistically significant difference. 3. In the case of AP, every type of bacteria also showed higher distribution in the experimental group, but P. gingivalis and p..intermedia showed the result with statistically significant difference, and the other did not 4. In 3 all bacteria type, N-AP showed higher distribution than N-CP without statistically significant difference These results suggest that the comparison of the distribution of Bacteroides between Chronic Periodontitis and Aggressive Periodontitis has no statistically significant difference, except P. intermedia.
Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of host-derived proteolytic enzymes and implicated in the remodeling and degradation of extracellular matrix under both physiological and pathological conditions. Connective tissue degradation in periodontal diseases is thought to be due to excessive MMP activities over their specific inhibitors. The effects of lipopolysaccharide (LPS) from Prevotella intermedia, one of the major putative pathogens of periodontitis, on the expression of mRNA for MMPs and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in human gingival and periodontal ligament fibroblasts were examined by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The expression of mRNAs encoding MMP-1, -2, -3, -10, and -14 was increased in human gingival fibroblasts treated with p. intermedia LPS, whereas MMP-11 and TIMP-2 mRNA expression was decreased in these cells stimulated with LPS. P. intermedia LPS increased the MMP-1, -2, -10, -11, and -14 mRNA expression and decreased TIMP-1 and -2 mRNA expression in human periodontal ligament fibroblasts. These findings imply that P. intermedia LPS may play an important role in the connective tissue degradation in periodontitis.
Park, Chan-Ho;Kim, Pan-Soon;Kim, Hwa-Sook;Min, Jeong-Bum;Hwang, Ho-Keel;Jang, Hyun-Sun;Cho, Ki-Woon;Baek, Dong-Heon;Kook, Joong-Ki
International Journal of Oral Biology
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제35권1호
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pp.13-19
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2010
The DNA probes Pn17 and Pn34 were evaluated for their ability to specifically detect clinical strains of P. intermedia and P. nigrescens from a Korean population by dot blot hybridization. These probes were sequenced by extension termination and their specificity was determined by Southern blot analysis. The results revealed that the Pn17 sequence (2,517 bp) partially encodes an RNA polymerase beta subunit (rpoB) and that Pn34 (1,918 bp) partially encodes both rpoB (1-169 nts) and the RNA polymerase beta subunit (rpoB'; 695-1918 nts). These probes hybridized with both HindIII- and PstI-digested genomic DNAs from the strains of P. intermedia and P. nigrescens used in this study. Interestingly, each of the hybrid bands generated from the HindIII-digested genomic DNAs of the two bacterial species could be used to distinguish between them via restriction fragment length polymorphism. These results thus indicate that Pn17 and Pn34 can simultaneously detect P. intermedia and P. nigrescens.
문제 진술: 임플랜트 시스템은 임플랜트와 지대주 사이에서 빈 공간이 발생하여 세균의 저장소로서 작용하게 되어 임플랜트 주위 연조직에 염증반응을 야기할 수 있다. 목 적: 이 연구의 목적은 임플랜트-지대주 간극의 미세 누출에 관여하는 치주질환원인균으로 추정되는 Porpyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans의 검출률을 조사하는 것이다. 연구재료 및 방법: 시료채취는 27명의 환자들에서 행하였고 소독된 페이퍼포인트를 이용하여 $1{\times}PBS$로 옮겼다. 치주질환원인균의 검출은 16 rDNA에 근거한 종특이적인 프라이머를 지닌 중합효소체인반응을 이용하였다. 결과: 임플랜트 고정체내에서의 Porphyromonas gingivalis와 Prevotella intermedia의 검출률은 59%와 82%였다. 환자의 임플랜트 연구에서는 Porphyromonas gingivalis와 Prevotella intermedia의 검출률은 44%와 82%였다. 환자혀에서의 Porphyromonas gingivalis와 Prevotella intermedia의 검출률은 82%와 82%였다. 결 론: 현재의 임플랜트 시스템은 임플랜트 내부의 세균 군집화와 미세누출을 안전하게 예방할 수 없다.
m-Toluate 최소배지에서 선택적 enrichment culture를 통하여 82개의 세균의 균주를 분리하였으며, ol들 중 두 균주는 Pseudomonas cepacia, 한 균주는 P. Putida, 한 균주는 Yersinia intermedia, 그리고 한 균주는 Flavobacterium odoratum으로 동정되었다. P. cepacia SUB37은 P. putida mt-2의 TOL 플라스미드와 비슷한 크기의 플라스미드를 가지고 있었으며, Flavobacterium odoratum과 Yersinia intermedia는 이보다 더 큰 플라스미드를 갖고 있었다. P. cepacia SUB37은 streptomycin에 감수성을 나타내었으나, rifampicin에는 내성을 나타내었다. 플라스미드를 갖는 P. cepacia SUB37은 탄화수소를 해당 알콜과 알데히드를 거쳐서 benzoate와 toluate 로 분해하였다. 플라스미드 제거실험으로, P. Cepacia SUB37의 플라스미드에는 탄화수소 분해과정 중 toluene과 xylene을 benzoate, toluate로 분해하는 효소와, 계속하여 meta pathway를 거치는 단계의 효소를 코딩하는 유전자들이 있음이 확인되었다. 또한 P. cepacia SUB37은 생장이 왕성하였을 때 m-toluate를 거의 분해하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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