• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권4호
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• pp.594-599
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• 2007

It is well known that the Escherichia coli inner membrane-bound protease DegS is a periplasmic stress sensor for unfolded outer membrane proteins (OMPs). Previous studies have also shown that the outer membrane protease OmpT activates plasminogen in vitro and this may be exploited by bacteria in the course of pathogenesis. However, there has been no research on the plasminogen activation ability of the important periplasmic protein DegS. Accordingly, in this study, the whole-length and truncated degS genes were separately overexpressed in Escherichia coli, the recombinant proteins purified by affinity chromatography, and their plasminogen activator role tested in vitro. The results suggested that the whole-length DegS was able to activate plasminogen on a plasma plate. The truncated form of DegS (residues 80-345), designated ${\Delta}DegS$, also acted as a plasminogen activator, as confirmed by different assays. The serine protease property of ${\Delta}DegS$ was verified based on the complete inhibition of its enzyme activity by PMSF (phenylmethanesulfonyl fluoride). Therefore, the present results indicate that DegS is a plasminogen activator in vitro.

• 한국미생물학회:학술대회논문집
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• 한국미생물학회 2008년도 International Meeting of the Microbiological Society of Korea
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• pp.135-135
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• 2008

Various biosensors were evaluated for identifying and detecting foodborne pathogens in a rapid and effective manner. First, five strains of Escherichia coli and six strains of Salmonella were identified using Fourier transform infrared spectroscopy and a statistical program. For doing this, lipopolysaccharides (LPSs) and outer membrane proteins (OMPs) were extracted from a cell wall of each bacterial strain. As a result, each strain was identifed at the level of 97% for E. coli and 100% for Salmonella. Second, E. coli O157:H7, S. Enteritidis, and Listeria monocytogenes were identified by multiplex PCR products from four specific genes of each bacteria using a capillary electrophoresis (CE). Also, ground beef for E. coli O157:H7, lettuce for S. Enteritidis, and hot dog for L. monocytogenes were used to determine the possibility of detecting pathogens in foods. Foods inoculated with respective pathogen were cultivated for six hours and multiplex PCR products were obtained and assessed. The minimum detection levels of tested bacteria were <10 cells/g, <10 cells/g, and $10^4$ cells/g for E. coli O157:H7, S. Enteritidis, and L. monocytogenes, respectively. Third, it was possible to detect S. Typhimurium in a pure culture and lettuce by a bioluminescence-based detection assay using both recombinant bacteriophage P22::luxI and a bioluminescent bioreporter. In addition, bacteriophage T4 was quantitatively monitored using E. coli including luxCDABE genes.

• 대한수의학회지
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• 제45권2호
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• pp.185-189
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• 2005

Actinobacillus pleuropneumoniae is the causative agent of a porcine contagious pleuropneumonia. Among several virulence factors including exotoxin (Apx toxins), LPS, transferrin-binding proteins, OMPs, and some proteases, Apx toxins have been major targets for the protection study. In this study, cloning and expression of A. pleuropneumoniae Apx I and Apx II toxin, which are produced by all highly virulent strains, were performed by Escherichia coli expression system. Genes coding Apx I and II toxin were amplified from the A. pleuropneumoniae serotype 5 genomic DNA using polymerase chain reaction and cloned to a prokaryotic expression vector, pRSET. Expression of the Apx I and Apx II coding sequences in E. coli resulted in the formation of insoluble inclusion bodies purified according to a denaturing purification protocol, which employs the use of guanidium. Recombinant proteins were purified using $Ni^{2+}$-charged resin affinity purification. This expression and purification system made it possible to produce Apx I and Apx II in large amounts for further immunologic studies.

• 한국정보과학회논문지:정보통신
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• 제31권4호
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• pp.384-392
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• 2004

이동 단말의 짧은 개발 주기에 따라 장치 및 적용 표준이 다양화됨으로써, 무선 컨텐츠 제공자가 효과적인 컨텐츠 서비스를 체공하는데 많은 장애 요소가 되고 있다. 이러한 문제점들을 효과적으로 개선하기 위하여 공용의 원본 컨텐츠를 이동 단말에 전달되는 과정에서 동적으로 단말에 최적화시킬 수 있는 서비스 플랫폼이 이상적인 대안이 될 수 있다. 그러므로, 본 논문에서는 동적으로 네트워크 프로토콜을 설치하기 위한 기술인 액티브 네트워크 메커니즘을 이용하여, 컨텐츠 서비스를 효과적으로 지원하기 위한 무선 컨텐츠 적응형 네트워크(Mobile Contents Adaptation Network ： MobiCAN)를 제안한다. MobiCAN은 액티브 네트워크 메커니즘을 적용한 오버레이 네트워크 기술이며, MobiCAN 노드와 이를 관리하기 위한 오버레이 관리 프로토콜로 구성된다. MobiCAN 노드는 효과적인 서비스 설치, 실행 및 유지 보수 기능을 제공하고, 서비스 개발이 용이하도록 서비스 계층화 및 커스트마이즈 기능을 제공한다. 특히, 마이크로 서비스는 노드의 기본적인 동작 단위이며 서비스 계층화 기능과 규격화된 인터페이스 함수를 제공한다. 그리고, 이러한 오버레이 네트워크를 제어 및 관리하기 위하여 OMPs를 제안한다. 이 프로토콜은 노드 정보 동기화를 위한 NISP, 오버레이 정보 질의를 위한 NIQP 및 노드 설정 및 오버레이 관리를 위한 NCMP로 구성된다. 그리고 마지막으로, MobiCAN의 실용성을 검증하기 위하여 구현된 동적 컨텐츠 최적화 프록시(Dynamic Contents Customization proxy ： DCCP) 서비스에 대하여 소개한다.

• 한국어병학회지
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• 제12권2호
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• pp.89-99
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• 1999

V. vulnificus ATCC 27562균주의 배양 온도를 $2^{\circ}C $, 20분간 및 6% 에탄올, 10분간으로 반응시켰을 때 SDS-PAGE상에서 새로운 16가지의 heat shock protein(hsps)과 10가지의 ethanol shock protein이 나타났다. Lethal temperature에 노출하기전에 미리 열 충격을 가한 경우 thermo tolerance가 유도되었다. 균체면역에 의해 생성된 항혈청과 열 충격 세포에서 분리된 막단백질과의 ELISA에서는 Outer Membrane Protein(OMP)에서 높은 면역반응을 나타냈으며 western blotting으로는 Inner Membrane Protein(IMP)에서는 62kDa, OMP에서는 69 kDa단백이 높은 면역원성을 나타냈다. ethanol 충격 반응에서는 IMP에서는 48 kDa, OMP에서는 오직 major밴드에서만 면역반응성이 확인되었다. anti-V, vulnificus혈청에 대한 균체 응집시험에서는 열 충격 반응 후의 균체가 정상 균체에 비해 응집반응성이 높았다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제30권4호
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• pp.497-504
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• 2020

For control of brucellosis in small ruminants, attenuated B. melitensis Rev1 is used but it can be virulent for animals and human. Based on these aspects, it is essential to identify potential immunogens to avoid these problems in prevention of brucellosis. The majority of OMPs in the Omp25/31 family have been studied because these proteins are relevant in maintaining the integrity of the outer membrane but their implication in the virulence of the different species of this genus is not clearly described. Therefore, in this work we studied the role of Omp31 on virulence by determining the residual virulence and detecting lesions in spleen and testis of mice inoculated with the B. melitensis LVM31 mutant strain. In addition, we evaluated the conferred protection in mice immunized with the mutant strain against the challenge with the B. melitensis Bm133 virulent strain. Our results showed that the mutation of omp31 caused a decrease in splenic colonization without generating apparent lesions or histopathological changes apparent in both organs in comparison with the control strains and that the mutant strain conferred similar protection as the B. melitensis Rev1 vaccine strain against the challenge with B. melitensis Bm133 virulent strain. These results allow us to conclude that Omp31 plays an important role on the virulence of B. melitensis in the murine model, and due to the attenuation shown by the strain, it could be considered a vaccine candidate for the prevention of goat brucellosis.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제58권3호
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• pp.227-232
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• 2015

A microarray study has been employed to understand changes of gene expression in E. coli KD43162 resistant to ampicillin, ampicillin-sulbactam, piperacillin, piperacillin-tazobactam, cefazolin, cefepime, aztreonam, imipenem, meropenem, gentamicin, tobramycin, ciprofloxacin, levofloxacin, moxifloxacin, fosfomycin, and trimethoprim-sulfamethoxazole except for amikacin using disk diffusion assay. Using Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis and MALDI-TOF MS analyses, 36 kDa of outer membrane proteins (OMPs) was found to be deleted in the multidrug resistant E. coli KD 43162. Microarray analysis was used to determine up- and down-regulated genes in relation to multidrug resistant E. coli KD43162. Among the up-regulated genes, these genes were corresponded to express the proteins as penicillin-binding proteins (PBPs), tartronate semialdehyde reductase, ethanolamine utilization protein, shikimate kinase I, allantoinase, predicted SAM-dependent methyltransferase, L-glutamine: D-fructose-6-phosphate aminotransferase (GFAT), phospho-glucosamine mutase, predicted N-acetylmannosamine kinase, and predicted N-acetylmannosamine-6-P epimerase. Up-regulation of PBPs, one of primary target sites of antibiotics, might be responsible for the multidrug resistance in E. coli with increasing amount of target sites. Up-regulation of GFAT enzyme may be related to the up-regulation of PBPs because GFAT produces N-acetylglucosamine, a precursor of peptidoglycans. One of GFAT inhibitors, azaserine, showed a potent inhibition on the growth of E. coli KD43162. In conclusion, up-regulation of PBPs and GFATs with the loss of 36 kDa OMP refers the multidrug resistance in E. coli KD 43162.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제32권1호
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• pp.6-14
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• 2022

Brucella spp. are facultative intracellular pathogens that invade, survive and proliferate in numerous phagocytic and non-phagocytic cell types, thereby leading to human and animal brucellosis. Outer membrane proteins (Omps) are major immunogenic and protective antigens that are implicated in Brucella virulence. A strain deleted of the omp16 gene has not been obtained which suggests that the Omp16 protein is vital for Brucella survival. Nevertheless, we previously constructed an omp16 conditional deletion strain of Brucella, ∆Omp16. Here, the virulence and immune response elicted by this strain were assessed in a mouse model of infection. Splenomegaly was significantly reduced at two weeks post-infection in ∆Omp16-infected mice compared to infection with the parental strain. The bacterial load in the spleen also was significantly decreased at this post-infection time point in ∆Omp16-infected mice. Histopathological changes in the spleen were observed via hematoxylin-eosin staining and microscopic examination which showed that infection with the ∆Omp16 strain alleviated spleen histopathological alterations compared to mice infected with the parental strain. Moreover, the levels of humoral and cellular immunity were similar in both ∆Omp16-infected mice and parental strain-infected mice. The results overall show that the virulence of ∆Omp16 is attenuated markedly, but that the immune responses mediated by the deletion and parental strains in mice are indistinguishable. The data provide important insights that illuminate the pathogenic strategies adopted by Brucella.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제46권3호
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• pp.495-502
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• 2004

장출혈성대장균 O157:H7의 eae유전자 산물인 intimin은 장 상피세포의 부착성을 조절하는 단백질로 알려져 있다. Intimin의 C-말단 아미노산 잔기와(His)$_6$이 혼합되어 이루어진 plasmid를 작성하여 재조합 단백질(34kDa)을 발현시켰다. 발현된 재조합 intimin 단백질의 면역원성을 확인하기 위해 토끼와 산란계에서 항혈청 및 난황항체(IgY)를 제조하였다. O157:H7에서 분리한 세포외막단백질(OMPs)과 제조된 항혈청과의 western blot상의 반응에서 약 94kDa의 위치에서 양성반응을 보여 발현된 재조합 단백질의 면역원성 효과가 확인되었다. 면역원성이 확인된 단백질을 산란계에 면역한 결과, 면역 후 4${\sim}$6주 경부터 높은 수준의 항체가 형성되었다. 재조합 intimin 단백질에 대한 난황 항체의 항원결합능력 조사를 위하여 중화반응시험을 수행한 결과, 재조합 intimin 단백질에 대한 난황 항체가 O157:H7과 강하게 결합하는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구에서 발현된 재조합 intimin 단백질은 토끼와 산란계의 면역반응을 유도할 수 있는 효율적인 면역원임과 동시에 난황 항체 생산을 위한 항원으로의 이용가능성이 확인되었다.

• 생명과학회지
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• 제18권11호
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• pp.1606-1611
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• 2008

Salmoenella를 포함한 그람 음성 세균의 외막 단백질들은 외부 환경 조건에 따라 그 발현에 변화가 생기는 경우가 많으며, 이렇게 발현된 외막 단백질들은 수송에 관여하는 통로, 외부 물질의 인지, 병원체의 부착인자 등 다양한 기능을 가진다. 본 연구에서는 이러한 외막 단백질 중 소수성 porin으로 알려진 OmpW 단백질에 주목하였다. ompW 유전자가 결손된 돌연변이주를 구축하여 CK10으로 명명하였으며, 야생주와 그 표현형적 특징을 비교한 결과 SDS에 대한 내성이 다소 증가함을 확인할 수 있었다. OmpW 특이적인 다클론성 항체를 조제하여 OmpW 단백질의 발현연구에 사용하였다. NaCl의 농도가 높아질수록 OmpW 단백질의 발현이 감소하였으며, OmpW의 발현이 최대인 조건은 NaCl이 배지에 첨가되지 않았을 경우이다. 따라서 OmpW는 Salmonella 균이 삼투환경에 대응하는데 관여할 것으로 예상되어 일차적으로 균의 생육을 조사한 결과, 다양한 삼투환경 하에서 Salmonella의 생육에는 OmpW 단백질의 결손이 큰 영향을 미치지는 않는 것을 확인하였다. 삼투환경 변화에 따른 OmpW 발현의 변화가 지니는 생물학적 의미는 앞으로 연구해야 할 숙제로 남는다.