• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권4호
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• pp.585-591
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• 2001

To compare the p10 promoter activity of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV)K1 and K4, recombinant viruses Bm101-LacZ and Bm104-LacZ with a lacZ gene under the control of each p10 promoter were constructed. The $\beta$-galactosidase activity due to Bm101-LacZ was about 5.5- and 1.1-fold higher than that due to Bm104-LacZ and BmK1-LacZ, respectively. expressing ${\beta}$-galactosidase under the control of a polyhedrin promoter. The recombinant virus BmK1-104LacZ with the same genome structure as Bm101-LacZ, except for a p10 promoter region, produced a similar ${\beta}$-galactosidase activity to that due to Bm104-LacZ and 5.5-fold lower than that due to Bm101-LacZ. The virus yield, expression level of polyhedrin, and polyhedra productivity for each recombinant virus was almost similar. These results suggested that the difference in the expression level of ${\beta}$-galactosidase resulted from a difference in the p10 promoter regions, and that an expression vector using the p10 promoter of BmNPV-K1 could be usefully exploited in the mass production of foreign proteins with silkworm larvae by means of oral ingestion.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제15권1호
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• pp.35-38
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• 2007

In this study, ORF 46 of Bombyx mod nucleopolyhedrovirus(Bm46) fused with EGFP was expressed in Bombyx mod cell lines, larvae and pupae by BmNPV Bacmid system. Bm46 and EGFP were cloned into donor plasmid pFastBacHTb, which was transformed to competent DH10B cells containing helper and BmNPV bacmid by site-specific transposition. Recombinant bacmid was used to transfected BmN-4 cells to produce the recombinant baculovirus vBm-Bm46-EGFP. Recombination virus was injected into silkworm larvae and pupae. The expression of the fusion protein was monitored by examining green fluorescence using a fluorescent microscope. Intense fluorescence in cells and silkworm was observed at 4 days post-infection, indicating the Bm46-EGFP fusion gene was expressed successfully.

• 농약과학회지
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• 제12권3호
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• pp.283-290
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• 2008

베큘로바이러스는 일부 나비목 해충을 대상으로 방제하는 데 사용되고 있다. 그러나 화학농약에 비해 느린 살충효과 및 좁은 적용 해충으로 응용 범위에 한계를 갖고 있다. 본 연구는 이러한 한계를 극복하고자 곤충의 면역억제을 통해 바이러스 병원력을 제고시킬 수 있는 기술을 소개한다. 폴리드나바이러스는 일부 맵시벌 및 고치벌에 공생하는 곤충 DNA 바이러스 분류군이다. 프루텔고치벌(Cotesia plutellae) 유래 CpBV(Cotesia plutellae bracovirus)는 브라코바이러스에 속한 폴리드나바이러스로서 면역어제를 발휘하는 여러 유전자를 함유하고 있다. 이 가운데 7개의 CpBV유전자를 선발하고 이를 야생형Autographa California multiple nucleopolyhedrovirus(AcNPV)에 재조합하였다. 이들 재조합 베큘로바이러스를 이용하여 파밤나방(Spodoptera exigua)과 배추좀나방(Plutella xylostella)을 대상으로 생물 검정한 결과, 이들 대부분은 야생형의 바이러스와 유사하거나 우수한 살충력을 나타냈다. 특히 CpBV-ELP를 포함한 재조합 베큘로바이러스가 대조바이러스에 비해 살충시간을 약 2 일 이상단축시킴으로 가장 우수하였다. 이 재조합 베큘로바이러스는 농도에 따른 살충력증가와 배추를 가해하는 파밤나방을 대상으로 한 바이러스 살포 처리가 뚜렷한 방제효과를 나타내어 현장 적용 가능성을 제시하였다. 또한 본 연구는 이 재조합 바이러스의 살충력 제고 현상을 CpBV-ELP의 항바이러스 기작 억제라는 측면에서 고찰했다.

• BMB Reports
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• 제39권3호
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• pp.263-269
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• 2006

In the genome of Helicoverpa armigera single-nucleocapsid nucleopolyhedrovirus, open reading frame 39 (Ha39) is the only gene predicted to encode an RNA recognition protein. Computer analysis revealed that Ha39 homologues were found in 15 NPVs, but not in GVs. Its transcripts were detected from 3 through 72 hours post infection (h p.i.) using RT-PCR and Northern blot analysis. The protein was detected in infected-cell lysates from 6 h p.i. Western blot assay of ODV and BV preparations revealed that Ha39 encodes a structural protein associated with BVs. Additionally, immunofluorescence microscopy demonstrated that the protein was present within cytoplasm in virus-infected cells, but not in the nuclear region.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권1호
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• pp.18-24
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• 2001

누에 핵다각체병 바이러스의 gp64 프로모터를 이용한 transient 발현 벡터를 제작하기 위해서 gp64 유전자의 구조를 분석하였다. Southern blotting 분석을 통해 genome DNA에서 gp64 유전자를 탐색하기 gp64 구조유전자를 포함하는 2,277 nucleotide의 염기를 분석하였으며 gp64의 early, late 프로모터 발현을 조절하는 인자들을 확인하였다. gp64프로모터를 이용한 transient 발현 벡터를 제작하고 외래유전자로써 lacZ 유전자를 Bm5 세포주에서 transient 발현시켰다. 세포주 내에 도입된 플라스미드 DNA의 안정성을 확인하였으며, gp64 프로모터의 외래유전자 발현성 여부를 조사하기 위하여 gp64 프로모터 하에 laxZ 유전자를 가지는 재조합 바이러스를 제작하고 $\beta$-galactosidase in 냐셔 staining을 수행한 결과 전체적인 발현량은 매우 약한 것으로 판단되었다. BmNPV-K1의 gp64 프로모터를 이용한 벡터는 더욱 민감한 표지 유전자를 발현시켜 재조합 바이러스의 분리에 이용하거나 숙주세포에 독성을 보이는 유전자 산물의 소량 발현에 더욱 유용할 것으로 판단된다.

• Journal of Microbiology
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• 제41권4호
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• pp.306-311
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• 2003

In Korea, a Lymantria dispar multinucleocapsid nucleopolyhedrovirus, LdMNPV-NM, was isolated and characterized from dead L. dispar larvae. The polyhedra of LdMNPV-NM were irregularly shaped with a diameter of $1.62{\pm}0.33{\mu}m$. Numerous virions comprised of the multinucleocapsid were evident in the electron microscopic examination of the polyhedra cross sections. These polyhedra were composed of a major protein of 30 kDa. The restriction enzyme digestion patterns of LdMNPV-NM showed that this isolate had some different fragments from those of the Gypchek LdMNPV isolate, although their overall profiles were similar. The deduced amino acid sequence of the enhancin gene of LdMNPV-NM showed differences when compared to previously reported enhancin genes of other LdMNPV strains. These results suggested that the LdMNPV-NM isolate from Korea was a new NPV strain and had a new enhancin gene.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권4호
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• pp.710-715
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• 2005

A novel recombinant baculovirus, Bactrus, was constructed by the insertion of the Bacillus thuringiensis cry1Ac gene between two polyhedrin genes of Autographa californica nucleopolyhedrovirus (AcNPV) under the control of the polyhedrin gene promoter. Polyhedra produced by Bactrus in insect cells were incorporated with 130 kDa of polyhedrin-Cry1Ac-polyhedrin fusion protein, and 30 kDa of intact polyhedrin, resulting from a homologous recombination between two polyhedrin genes, was also expressed. The insecticidal activity of Bactrus against Spodoptera exigua larvae was similar to that of AcNPV, but it showed significantly higher toxicity towards Plutella xylostella larvae in comparison with that of AcNPV. The expression level of fusion protein and the insecticidal activity of recombinant polyhedra produced by the Bactrus against P. xylostella larvae were decreased after serial passages. In conclusion, the Bactrus had improved insecticidal activity and returned to wild-type AcNPV after several passages.

• 한국유기농업학회지
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• 제23권4호
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• pp.797-811
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• 2015

곤충병원성 미생물을 이용한 배추 파밤나방을 방제하기 위한 시험을 실시한 결과, 실내 실험의 경우 시중에 판매되는 4종의 비티제는 그 파밤나방 유충에 대해 10% 이하의 살충 효과를 보여주었다. 곤충병원성 선충의 경우 파밤나방에 대해 $1{\times}10^2$, $3{\times}10^2$, $1{\times}10^3$ 마리/ml에서 살충효과가 각각 33.3, 83.3, 100%로 나타났다. 비티와 곤충병원성 선충의 혼합처리에 의한 파밤나방 유충의 발육억제 효과가 크게 나타났다. 파밤나방핵다각체 바이러스(SeNPV)는 $10^5$ 다각체/ml의 농도에서 70% 이상의 높은 살충효과를 보여주었다. SeNPV 생산량은 초기접종농도, 사료 공급량 및 사육온도가 높을수록 증가하였다. 온실시험에서는 비티와 선충 혼합처리가 단독처리보다 파밤나방에 방제효과가 높았으며 SeNPV는 $10^7$ 다각체/ml에서 100% 방제효과를 보여주었다. 유기배추재배 포장에서는 미생물제와 유기농업자재 혼합처리에서 파밤나방을 비롯한 나방류해충 발생이 무처리구나 비티단독처리구 보다 낮게 나타났다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제43권1호
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• pp.55-60
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• 2004

담배거세미나방 핵다각체병바이러스(SINPV)의 살충력 증가를 위하여 유기산 및 기능성 물질을 첨가하여 활성을 검정한 결과는 다음과 같다. 핵다각체병바이러스(NPV) 1${\times}$$10^{5}$ PIBs/$m\ell$에 ascorbic acid, succinic acid, sulfanilic acid 2,000ppm을 바이러스 1${\times}$$10^{5}$ PIBs/$m\ell$에 첨가하였을 때 각각 7.0일, 7.일, 10.7일로 바이러스 단독으로 처리한 6.0일보다 더 높게 나타났으나 boric acid 2,000ppm을 첨가한 경우 L $T_{50}$은 4.5일로서 단독처리보다 1.5일 짧았다. 유충 체중변화에서도 boric acid는 2,000ppm에서 7일째 이후 생존하는 개체가 없어 가장 효과가 좋은 것으로 나타났으며 1,000ppm과 500ppm에서도 체중이 증가하지 않아 바이러스 활성 증진을 지속시키는 물질로 판단되었다. 기능성 물질과 혼합 처리에서는 바이러스 1${\times}$$10^4$ PIBs/$m\ell$ 단독 처리는 L $T_{50}$이 7.4일이 걸리는 반면 담배거세미나방 핵다각체병바이러스와 전해산화수, 키토산, 목초액 혼합처리는 모두 살충기간이 길어져 혼합효과가 없었다. 담배거세미나방 핵다각체병바이러스 농도 1.0${\times}$10$_{6}$, $10^{8}$ PIBs/$m\ell$와 기능성 물질을 혼합하였을 때도 같은 경향으로 오히려 바이러스 병원성 억제효과가 나타났다.

• BMB Reports
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• 제40권2호
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• pp.232-238
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• 2007

The p13 gene is uniquely present in Group II nucleopolyhedroviruses (NPVs) and some granuloviruses, but not in Group I NPVs. p13 gene was first described by our laboratory in Leucania separatamultiple nuclear polyhedrosis virus (Ls-p13) in 1995. However, the functions of Ls-P13 and of its homologues are unknown. When Ls-p13 was inserted into Autographa californica nucleopolyhedrovirus, a Group I NPV, polyhedra yield was inhibited. However, this inhibition was prevented when the leucine zipper-like domain of Ls-p13 was mutated. To determine the cause of this marked difference between Ls-P13 and leucine zipper mutated Ls-P13 (Ls-P13mL), oligomerization and secondary structure analyses were performed. High performance liquid chromatography and yeast two-hybrid assays indicated that neither Ls-P13 nor Ls-P13mL could form oligomers. Informatics and circular dichroism spectropolarimetry results further indicated marked secondary structural differences between Ls-P13 and Ls-P13mL. The LZLD of Ls-P13 has two extended heptad repeat units which form a hydrophobic surface, but it is short of a third hydrophobic heptad repeat unit for oligomerization. However, the mutated LZLD of Ls-P13mL lacks the above hydrophobic surface, and its secondary structure is markedly different. This difference in its secondary structure may explain why Ls-P13mL is unable to inhibit polyhedra yield.