The inhibitory effect of Coprinus comatus on the mutagenicity in Salmonella assay system and SOS chromotest were studied. In Ames test, the ethanol and water extracts and the cultured mycelia fractions of Coprinus comatus did not show any mutagenicity, but the Coprinus comatus ethanol extracts showed inhibitory effects of 8 0∼90% on the mutagenicity induced by indirect mutagen of benzo(a)pyrene(B(a)P) and aflatoxin B1(AFB1) in Salmonella typhimurium TA98 and TA100. The antimutagenic effect increased with increasing concentration of the ethanol extract toward N methyl N' nitro N nitrosoguanidine(MNNG). However, the water extracts inhibited about 40∼50% against direct and indirect mutagen. The cultured mycelial filtrate of Coprinus comatus, the fractionⅡ, showed antimutagenic effect of 90% on MNNG and 25∼50% on B(a)P and AFB1. In SOS chromotest, the ethanol extracts of Coprinus comatus showed antimutagenic effect of 65∼81% on SOS function induced by 4 NQO, and the cultured mycelia fractionⅡ showed low inhibitory effect of 20∼50%.
Various lactic acid bacteria were isolated from Korean Kimchi in order to study their antimutagenic substances. Ames test using Salmonella typhimurium TA98 and TA100 showed the strain KLAB21 to have the highest antimutagenic activity among the 230 isolated strains against MNNG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine), NPD (4-nitro-O-phenylenediamine), NQO (4-nitrosoquinoline-1-oxide) and AFB1 (aflatoxin B1). The strain was identified as Lactobacillus plantarum based on its morphological, cultural and physiological characteristics. Antimutagenic activity of L. plantarum KLAB21 was found in culture supernatant suggesting the bacterium secrete antimutagenic substance in the media. No mutagenic activity was found in the culture supernatant. The isolated strain L. plantarum KLAB21 showed much higher antimutagenic activity than L. plantarum IAM1261 which is being used industrially for fermented milk production. The antimutagenic activity of L.plantarum KLAB21 was reconfirmed by the spore-rec assay using spores of Bacillus subtilis H17($Rec^+$) and M45($Rec^-$).
참취뿌리의 에탄올 추출물과 용매 분획물에 대한 생리활성 효과를 밝히기 위해 항돌연변이성 및 암세포 성장억제효과를 실시한 결과 에탄올 추출물 자체의 돌연변이성은 없었다. 직접변이원인 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG)에 대해서는 Salmonella typhimurium TA100의 경우 에탄올 추출물이 79%, 에틸아세테이트 분획물은 82%의 억제효과를 나타내었다. 4-Nitroquinoline-1-oxide(4NQO)에 대해서는 Salmonella typhimurium TA98에서 에탄올 추출물이 48%, 에틸 아세테이트 분획물은 60%의 억제효과를 보였다. 한편 간접 변이원인 benzo(${\alpha}$)pyrene[B(${\alpha}$)P]에 대해서는 에틸아세테이트 분획물의 경우 TA98에서는 78%, TA100에서는 85%의 높은 억제활성을 나타내었다. 그리고 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido(4,3-b)indole(Trp-P-1)에 대해서는 TA98에서 89%의 높은 억제효과를 보였다. 한편 참취 에탄올 추출물에 대한 암세포 성장억제 실험에서도 chronic myelogenous leukemia (K562), human gastric carcinoma (KATOIII), human hepatocellular carcinoma (Hep3B) 및 human breast adenocarcioma (MCF-7)에 대하여 높은 세포독성을 나타내었으며 용매 분획물의 경우 KATOIII 세포에서는 모든 분획물이 높은 세포독성을 나타내었으나 그외세포에 대해서는 물분획물을 제외한 에틸아세테이트, 부탄올 및 클로로포름 분획물이 높은 세포독성을 나타내었다.
Alginate의 광범위하고 효율적인 이용을 목적으로 평균분자량이 약 10,000 (HAG-10), 50,000 (HAG-50) 및 100,000 (HAG-100) 정도의 저분자 alginate를 제조하였으며, 이 저분자 alginate의 항돌연변이 효과와 cholesterol, glucose 및 카드뮴과의 결합능을 측정하여 그 물리${\cdot}$화학적 특성을 비교, 검토하였다. Ames test로 저분자 alginate의 항돌연변이 효과를 측정한 결과, $aflatoxin B_1 (AFB_1)$에 대한 간접돌연변이원성과 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG)에 대한 직접돌연변이원성의 항돌연변이 효과는 HAG-10이 가장 높았고, 다음으로 HAG-50, HAG-100 및 alginate의 순으로 나타나 저분자화가 진행될수록 그 효과는 증가하는 것으로 나타났다. 저분자 alginate의 cholesterol, glucose 및 카드뮴에 대한 결합능은 alginate가 가장 높았고, 다음으로 HAG-50과 HAG-100은 유사하였으며, HAG-10은 결합능을 거의 보이지 않았다.
MNNG 투여에 의한 백서 위십이지장암 발생에 있어서 우유의 영향을 조사하고 그 원인을 분석키 위해 조직학적 및 혈청학적 분석을 시도하였다. 실험군은 생후 8주 전후의 Sprague-Dawley 백서 136마리로서 일반사료만 준 대조군 20마리(제 1군)와 6% 우유사료만 준 군 20마리(제 2군), MNNG$(100\;{\mu}g/ml)$ 투여군 24마리(제 3군), MNNG 및 6% 우유사료군 24마리(제 4군), MNNG 및 13% 우유사료군 24마리(제 5군), MNNG 및 26% 우유사료군 24마리(제 6군)로 분류한 후 군별에 따라 28주간 발암제 및 우유사료를 투여하고 실험시작 40주째 생존한 109마리에 대해 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. MNNG 단독 투여로 실험시작 12주 이후의 성장에 영향을 주었으나(p<0.01) 가역적이었고 생존에 미치는 영향은 없었다. 2. 위암발생은 대조군, 우유사료군에서 없었고 제 3군 25%, 제 4군 36.8%, 제 5군 27.8%, 제 6군 14.3%로 우유사료군에서 우유농도 증가에 따라 위암발생의 감소가 관찰되었고 제 6군에서는 제 3군보다 암발생이 억제되었다. 그러나 제 4군에서는 제 3군보다 상회하는 발암율을 보였다. 3. 위의 양성병변은 재생성 과증식, 선종성 과증식, 섬유 증식증 등이었고 MNNG 투여 각 우유사료군간의 분포는 우유농도 증가에 따라 위 양성병변이 증가하였으며 특히 암 수반율이 작은 재생성 과증식 발생군에서 뚜렷하였다. 재생성 과증식군에서의 암 수반율은 22.2%, 선종성 과증식군에서는 57.9%로 유의한 차이를 보였다(p<0.05). 4. 소장암 발생은 위암에서와 같이 십이지장의 선암이 주이었고 종양 발생 빈도는 3군에서 5%, 4군에서 21.1%, 5군에서 22.2%, 6군에서 9.5%이었으나 발생예수가 작아 각 군간의 통계적 유의성은 없었다. 5. 혈중가스트린치는 암발생이 많았던 제 4군에서 증가되었고(p<0.01), 양성 위 병변과 관련된 혈중 가스트린치도 제 4군에서 증가하였으며, 특히 재생성 과증식 수반동물군에서의 가스트린 증가는 유의하였으며(p<0.05), 위암발생군에서도 가스트린이 유의한 증가를 보였다(p<0.05). 이상의 성적을 바탕으로 위암발생은 우유농도 증가에 따라 감소되며 고농도의 우유사료군에서 발생이 억제되고 있음은 전암성 병변으로부터의 암발생을 억제하려는 우유의 암 발생 지연효과인 것 같다. 저농도 우유사료군에서의 암발생율의 증가는 혈중 가스트린치의 증가가 그 한 요인으로 해석되며 암발생군에서의 가스트린치의 증가와 더불어(p<0.05) 전암성 병변인 재생성 과증식군에서의 가스트린 증가가(p<0.05) 이를 뒷받침하고 있다.
This study was performed to determine the effects of antimutagenicity of Porturaca oleracea L. in Korea. In Ames test, the ethanol extract of Poturaca oleracea L. inhibited mutagenic activity of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG), , 4-nitroquinoline-1-oxide(4NQO), benzo($\alpha$)pyrene (B($\alpha$)P) and 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido-(4,3-b)indole (Trp-P-1) in Salmonella typhimurium TA98 and TA100. But hot-water extract Poturaca oleracea L. only Inhibited mutagenic activity of MNNG in Salmonella typhimurium TA100, On 4NQO, the ethanol extract 100-1,600$\mu\textrm{g}$/plate of Porturaca oleracea L. showed a slight inhibitory effect of 13-48%, 4-47% in TA98 and TA100, respectively, but on MNNG, it showed higher inhibitory effect of 6-86% in TA100, And the treatment of 1,600$\mu\textrm{g}$/plate of ethanol extract of Porturacea L. had strong antimutagenicity with 74-87% inhibition against TA98 and TA100 induced by B(a)P and with 85-93% inhibition against TA98 and TA100 induced by Trp-P-1. The ethanol extract was fractionated with ether. chloroform, ethylacetate, butanol and water. Among them, most of the fraction except water fraction showed strong antimutagenicity effects against mutation induced by 4-NQO, MNNG, B(a)P and Trp-P-1. Chloroform fraction had strong antimutagenicity with 91% inhibition against TA100 induced by MNNG, diethyl etherfraction had strong antimutagenicity with 92%, 98% inhibition against TA98 and TA100 induced by 4NQO, Chloroform fraction had strong antimutagenicity with 97% inhibition against TA100 induced by B (a)P and diethyl etherfraction had strong antimutagenicity with 98% inhibition against both strain Induced by Trp-P-1, respectively.
Antimutagenic and anticarcinogenic effects of alginic acids extracted from sea mustard(SM) and sporophyII of sea mustard(SSM) were studied by Salmonella typhimurium assay system and cytotoxicity and transformation tests using C3H/10T1/2 cells, respectively. alginic acid-SM andalginic acid-SSM showed antimutagenic effects on aflatoxin B1(AFB1)and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) in Salmonella typhimurium TA100 strain. The antimutagenic effect showed concentration dependent manner. At the 2.5mg/plate concentration , alginic acid-SSM exhibited 92% antimutagenicity against AFB1 ,while alginic acid-SM revealed 54% antimutagenictity ,s howing effectiveness of the alginic acid-SSM for the antimutagenicity. Alginic acidSSm also significantly decreased the cytotoxicity induced by 3-methylcholanthrene(MCA) and MNNG in C3H/10T1/2 cells (p<0.05). The type II and type IIItransformation foci formation by MCA and MNNG were also decreased when the alginic acid-SSM was treated, indicating that the alginic acid -SSM reduces the carcinogenesis induced by these carcinogens. The MCA-treated culture produced 10.5foci of type II +III in C3H/10T1/2 cells, however, MCA + 0.2mg/ml alginic acid-SSM treated culture formed only 1.8 foci of the types II + III in C3H/10T1/2 cells, however , MCA+0.2mg/ml alginic acid -SSM treated culture formed only 1.8 foci of the types II+ III(p<0.05). While MNNG-treated culture formed 13.0 foci, MNNG + 0.2mg/ml alginic acid -SSM treated one produced 3.0 foci of type II+III(p<0.05). These results suggest that alginic acid-SSM can effectively prevent the mutagenicities and also decrease cytotoxicity and transformation induced by some carcinogens.
한국에 널리 분포하고 있는 곰솔, 리기다, 잣나무, 적송의 에탄올추출물과 각 용매 분획물을 이용하여, in vitro assay로서 spore rec-assay와 Salmonella typhimurium reversion assay법으로 시료자체 변이원성 유무와 4가지 양성변이원 물질(MNNG, 4NQO, Trp-P-1 및 B(a)p)에 대한 돌연변이 억제효과를 고찰하였다. 곰솔, 리기다, 잣나무, 적송의 에탄올 추출물은 spore rec-assay와 S. typhimurium를 이용한 mutagenicity assay에서 변이원성을 나타내지 않았다. 돌연변이 억제 시험에서는 4가지 시료 모두 농도 증가에 따른 억제율을 나타내었고 또 각각의 시료들의 분획물 중 잣나무와 소나무의 에테르 분획물들이 간접변이원인 Trp-P-1의 변이원성에 대하여 다른 분획물에 비하여 높은 억제율을 보여주었다.
까치버섯(Polyozellus multiplex) 메탄올 추출물과 물 추출물은 산화 유발물질인 $H_2O_2$에 대하여 메탄올 추출물과 물 추출물에서 각각 53.5%, 29.4%의 생존율을 보여 까치버섯 추출물의 항산화 효과를 확인하였다. 까치버섯 메탄올 추출물과 물 추출물을 이용하여 동물에 강력한 발암물질인 MHNG를 투여한 후 항산화 효소계를 측정한 결과, 물 추출물은 항산화효소인 glutathione S-transferase(GST)와 superoxide dismutase(SOD) 활성과 조직내의 해독물질인 glutathione(GSH)의 함량을 높여 주었다. 또한 0.5%의 까치버섯 물 추출물은 암억제 유전자인 p53회 발현을 매우 증가시켰다. 이상의 결과로 까치버섯(Polyozellus multiplex)은 항산화 능이 있으며 특히, 물 추출물은 체내의 항산화 효소를 활성화시키고 항산화 물질의 함량을 높여주었고 암 억제유전자인 p53의 발현을 증가시켜 항암효과가 있음을 보여주었다.
본 연구에서는 김치발효에 관여하는 우세 발효균들의 집락을 분리하고, 발암원인 MNNG에 대하여 이들 분리주들이 갖는 DNA 손상 억제효과를 조사하였다. 이를 위해서 세포의 DNA 손상 및 복구를 측정하는데 이용되는 매우 신속하고 감도가 높은 Single Cell Gel Electrophoresis(SCGE 법, 또는 comet assay)를 사용하였다. 배추김치에서 분리한 3개의 분리주중에서 B-3를 제외한 B-1과 B-2는 양성 대조구와 비교하였을 때 우수한 항유전 독성효과를 나타내었으며(p<0.01), 율무김치의 3 개의 분리주(Y-1, Y-2, Y-3)와 1개의 분리주(Y-4)도 각각 항유전 독성효과를 나타내었다(p<0.05, p<0.01). 총각김치의 5 개 분리주중에서 3개의 분리주와 깍두기의 9개의 분리주중에서 2 개의 분리주들도 각각 항유전 독성효과를 나타내었다(p<0.05, p<0.01).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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