In order to screen the antagonistic bacteria which inhibit the growth of the apple pathogen, Penicillum expansum, we isolated an effective bacterial strain and investigated into the antifungal activity of the antagonist and it's identification. The eleven strains of bacteria which strongly inhibited P. expansum were isolated from the nature, and the best antagonistic bacterial strain designated as CH142, was selected. The antagonistic strain CH142 was identified to be the genus Bacillus subtilis based on morphological and biochemical characterization. The CH142 showed 55.9% of antifungal activity against the growth of P. expansum. By the treatment of the culture broth and the heat treated culture filtrate of it, the B. subtilis CH142 showed 90% and 15% of antifungal activity, respectively.
Lopez-Gonzalez, Rocio Crystabel;Juarez-Campusano, Yara Suhan;Rodriguez-Chavez, Jose Luis;Delgado-Lamas, Guillermo;Medrano, Sofia Maria Arvizu;Martinez-Peniche, Ramon Alvar;Pacheco-Aguilar, Juan Ramiro
The Plant Pathology Journal
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제37권1호
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pp.24-35
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2021
Blue mold caused by Penicillium expansum is one of the most significant postharvest diseases of apples. Some microorganisms associated with the surface of ripening apples possess the ability to inhibit the growth of P. expansum. However, the existing literature about their colonization in the stages before ripening is not explored in depth. This study aims to characterize the antagonistic capacity of bacterial populations from five fruit development stages of 'Royal Gala' apples. The results have shown that the density of the bacterial populations decreases throughout the ripening stages of fruit (from 1.0 × 105 to 1.1 × 101 cfu/㎠). A total of 25 bacterial morphotypes (corresponding to five genera identified by 16S RNA) were differentiated in which Bacillus stood out as a predominant genus. In the in vitro antagonism tests, 10 Bacillus strains (40%) inhibited the mycelial growth of P. expansum from 30.1% to 60.1%, while in fruit bioassays, the same strains reduced the fruit rot ranging from 12% to 66%. Moreover, the bacterial strains with antagonistic activity increased in the ripening fruit stage. B. subtilis subsp. spiziennii M24 obtained the highest antagonistic activity (66.9% of rot reduction). The matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry analysis revealed that bacteria with antagonistic activity produce anti-fungal lipopeptides from iturin and fengycin families.
사과 저장중에 발생하는 푸른곰팡이병원균에 대한 길항미생물을 찾기 위하여 자연계로부터 유용미생물을 분리하여 Penicillum expansum에 대한 길항력 검정과 동정하였다. 자연계로부터 얻은 3,000여종의 미생물중에서 푸른곰팡이병원균에 대하여 길항력이 우수한 미생물을 1차적으로 11종 선발하였으며, 이중에서 가장 길항력이 뛰어난 미생물을 치종적으로 KB22를 선발하였다. 길항력이 우수한 KB22의 형태적 성질, 배양적 특성 및 생리 생화학적 성질 등을 조사하여 비교 검토한 결과 Bacillus subtilis와 유사한 균으로 동정되었다. 분리한 길항균 Baillus subtilis KB22는 푸른곰팡이병에 대한 55.9%의 높은 생장억제력을 보였으며, 한천배지에서 Penicillum expansum 접종 후 길항균처리와 열처리한 길항균배양액을 처리하였을 때 각각90%와 15%이상 길항력을 보여주었다.
Species of the genus Fusarium are worldwide in their distribution. They are saprophytes as soil inhabitants and parasites of cultivated plants. Some isolates of certain species car capable of producing mycotoxins. Mycotoxicoses, including moldy corn toxicosis, alimentary toxic aleukia, fusariotoxicosis, and rel mold disease are known to be associated with trichothecene-producing fungi. Historically severe epidemic of cereal scab occred in the southern part of Korea in 1963. The epidemic caused a social problem because of not only heavy economic losses but also mycotoxicoses to humans and farm animals. However the toxic principles were remained unknown until some publications in 1980's indicated that trichothecenes and zearalenone were major mycotoxins in Korea cereals contaminated with Fusarium moniliforme have been found to be associated with human and animal disease such as leukoencephalomalacia in horses, pulmonary edema in swine and esophageal cancer in humans. High concentrations of fumonisins have been detected in corn samples from high espohoageal cancer risk areas of South Africa and China. Thus fumonisins have been implicated in the etiolgy of human esophageal cancer in those high incidence countries. Recently increase of imported cereals from foreign countries demands to assess the safety of mycotoxins in Korea. The informations on the natural occurrence of mycotoxins are needed to solve the toxicological problems in humans and farm animals associated with the consumption of moldy cereals.
균상느타리버섯에서 발생하는 곰팡이 병해 중에서 가장 많은 문제를 발생하는 것은 Trichoderma disease 또는 green mould 등으로 불리우는 푸른곰팡이병이다. 이 병은 Trichoderma, Penicillium, Aspergillus 등의 속(genus)에 포함되는 종들에 의해 발병되는 병을 총칭하는 것으로 발생빈도와 피해가 가장 큰 것은 Trichoderma 속의 병원균에 의해 발생하였다. 느타리버섯 균상에 분리된 병원균은 T. longibrachiatum, T. koningii, Trichoderma virens, T atroviride, T. hazianum, T. pseudokoningii 6종이었으며, 발생빈도가 높은 것은 T. virens, T. hazianum, T. longibrachiatum 3종이었고, 각각의 균은 배양적 특성 및 병원성도 각기 다른 특성을 보이고 있었다. T. longibrachiatum 균사생장이 매우 빠르고, 포자형성이 빠르며, 특히 후막포자형성이 잘되는 특성을 있으며, 후기에는 진한 녹색으로 변색된다. Trichoderma koningii는 균사생장은 빠르고, 공중균사가 많은 편이며, 포자는 공중균사에 밀집되어 형성된다. 특히 Trichoderma virens 같은 경우에는 포자형성에 의한 색깔변화가 느리며, 감염후기에 발견되어 그 피해가 심한 편이었다. Trichoderma atroviride. 균사생장은 보통이며, 포자형성은 공중균사에 드물게 형성되며, 후기에는 진녹색을 띤다. 이균의 특징은 coconut 냄새와 유사한 향기가 나는 것이다. T. hazianum은 초기에는 균사가 백색으로 매우 빠르고, 공중균사에 포자가 형성하며, 후기에는 진한 녹색으로 변색된다. 공중 균사에 형성된 포자는 육안적으로 pustules or tufts의 형태를 나타내었다. Trichoderma pseudokoningii 균사생장은 빠르며, 포자형성은 접종부위를 중심으로 형성되며, 후기에는 환무니를 형성하며, 특히 배지 색이 변색되고 후막포자 잘 형성되는 특징이 있었다.
본 연구는 국내산 침엽수로부터 천연 항균화합물 개발을 목표로 미송 및 편백으로부터 추출물을 확보하여 푸른곰팡이병의 원인균인 Trichoderma spp. 5종을 대상으로 항균활성을 테스트하고 GC/MS를 이용하여 항균화합물을 탐색하였다. 미송 추출물은 Trichoderma spp.에 대해 1,000 ppm에서 저해 활성을 나타냈으며, 4,000 pp에서는 T. viride>T. harzianum>T. aggressivum 순으로 70.1, 67.3, 64.7%의 높은 항균활성을 나타냈다. 편백 추출물도 1,000 ppm에서 항균활성을 나타냈고 4,000 ppm에서 T. viride>T. harzianum>T. aggressivum 순으로 63.2, 59.3, 59.1%의 높은 항균활성을 나타냈다. 그러나 1,000 ppm의 미송추출물과 1,000 ppm의 편백추출물을 각각 9:1, 8:2, 6:4, 2:8 (w/w) 비율의 혼합제제로 만들어 Trichoderma spp.에 처리하였을 때 미송추출물 1,000 ppm 및 편백추출물 1,000 ppm 각각의 단일추출물보다 낮은 항균활성을 나타냈다. Trichoderma spp. 5종에 대해 높은 항균활성을 나타내는 미송추출물에서는 2-Isopropoxy-ethylamine 46.5%, epifluorohydrin 8.6%, trans-2,3-Di-methyloxirane 7.6%, (IR)-(-)-Myrtenal 6.0%, 2-Methoxy-4-Vinylphenol 3.9%, benzaldehyde 2.8%가 함유되어 있었고, 편백추출물에서는 ${\alpha}$-Terpinenyl acetate 14.9%, Sabinene 10.9%, dl-Limonene 9.6%, ${\alpha}$-Terpinolene 7.5%, ${\alpha}$-Pinene 7.1%가 함유된 것이 확인되었다.
148종의 시료로부터 301주의 섬유소 분해세균을 분리하였고 그 중 cellulase 활성이 가장 높은 균주를 선발하여 동정한 결과, Cellulomonas sp. KL-6로 확인하였다. KL-6 균주는 약 50시간만에 여과지(whatman No.1)를 붕괴하였고 congo red 반응으로 본 halo 환의 직경은 11 cm였으며 또한, CMCase의 활성은 67 unit/ml, FPase는 70 unit/ml, ${\beta}-glucosidase$는 0.68 unit/ml로 나타났다. 여과지를 기질로 하여 배양하였을 때 배양액 중에 유리된 glucose의 유무를 확인하였으나 추적할 만한 양이 없었다. KL-6 균주의 균체증식 최적 배양조건은 sucrose 0.5%, yeast extract 0.1%, $(NH_4)_2HPO_4\;0.1%$, $K_2HPO_4\;0.1%$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.01%$, $CaCl_2\; 0.01%$, NaCl 0.6%, $CaCO_3\;0.1%$, pH 7.0 및 온도 $30^{\circ}C$였다.
Kim, Jun Young;Kwon, Hyuk Woo;Lee, Dong Hyeung;Ko, Han Kyu;Kim, Seong Hwan
The Plant Pathology Journal
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제35권6호
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pp.674-683
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2019
Some species of the Trichoderma genus are reported as the major problem in oak wood mushroom production in Korea. In spite of economic loss by the fungi, scientific information on airborne Trichoderma species is not much available. To generate information for disease management development we analyzed airborne Trichoderma. A total of 1,063 fungal isolates were purely obtained from indoor air sampling of cultivation houses used for oak wood mushroom using sawdust media. Among the obtained isolates, 248 isolates were identified as Trichoderma fungi including T. harzianum, T. atroviride, T. citrinoviride, and T. pseudokoningii, by morphological and molecular analysis. T. harzianum was dominant among the four identified species. All the four Trichoderma species grew fast on solid nutrient media tested (potato dextrose agar [PDA], malt extract agar [MEA], Czapek's Dox + yeast extract agar [CYA] and cornmeal dextrose agar). Compact mycelia growth and mass spore production were better on PDA and CYA. In addition, T. harzianum and T. citrinoviride formed greenish and yellowish mycelium and spores on PDA and CYA. Greenish and yellowish pigment was saturated into PDA only by T. pseudokoningii. These four Trichoderma species could produce extracellular enzymes of sawdust substrate degradation such as β-glucosidase, avicelase, CM-cellulase, amylase, pectinase, xylanase, and protease. Their mycelia inhibited the growth of oak wood mushroom mycelia of two tested cultivars on dual culture assay. Among of eleven antifungal agents tested, benomyl was the best to inhibit the growth of the four Trichoderma species. Our results demonstrate that the airborne Trichoderma fungi need to be properly managed in the cultivation houses for safe mushroom production.
잿빛곰팡이병의 전형적인 병징을 나타내는 병든 사과, 고추, 딸기, 오이, 토마토에서 곰팡이를 분리하고, 그들의 배양학적 특성과, 형태적 특성 및 PCR-RFLP을 통해 이 병원성 곰팡이를 모두 Botrytis cinerea로 동정하였다. 또한, 배양학적 특징에 따라 사과, 고추, 오이에서 분리한 잿빛곰팡이병균의 표현형은 균핵형이며, 딸기와 토마토에서 분리한 잿빛곰팡이병균은 균사형이었다. 각각의 잿빛곰팡이병균의 ITS 영역 염기서열을 포함한 4종의 유전자(RPB2, HSP60, G3PDH)의 염기서열을 결정하고 분자계통학적 유연관계를 분석하였다. RPB2 유전자 염기서열을 제외한 ITS 영역, HSP60유전자 및 G3PDH 유전자의 염기서열은 Botrytis cinerea 종 내 뿐만 아니라 Botrytis 속 종간에도 매우 높은 상동성을 나타내어 계통학적 유연관계 분석이 어려웠다. 하지만, 3종의 유전자(RPB2, HSP60, G3PDH)를 결합한 유전자 염기서열을 이용한 분자계통수 작성 결과, 본 연구에서 분리한 잿빛곰팡이병균은 Botrytis 속의 다른 종들과 구별되며, 사과, 고추, 오이, 토마토의 분리주는 아주 높은 근연관계에 있고, 딸기잿빛곰팡이병균은 다른 분리주와 달리 종내 다른 lineage를 형성하였다.
임상 검체에서 분리된 65개의 사상형 진균을 대상으로 연구하였다. 이 균주들은 형태학적으로 동정이 불가능한 진균, 형태학적으로 유사하여 동정이 까다로운 균주, 종(species) 수준의 동정이 요구되는 균종들이다. PCR과 염기서열분석은 ITS. DiD2, 그리고 β-tubulin 유전자를 표적 부위로 하였고, 증폭된 염기서열은 상동성 분석을 위하여 GenBank 데이터베이스의 알고리즘을 이용하여 분석하였다. 형태학적으로 속 수준의 동정이 가능한 진균은 61.5%이었고, 65주의 염기서열분석으로 62 균주는 속과 종의 동정이 가능하였다. 형태학적 검사와 염기서열분석의 결과, 속과 종이 불일치한 경우 14주(21.5%)이었고, 형태학적으로 동정이 불가능하였던 사례는 11 균주이었다. B. dermatitidis, T. marneffei, 그리고 G. argillacea 등은 염기서열분석으로 국내에서 처음으로 확인하였다. Aspergillus와 같이 흔히 분리되고 성장이 빠른 진균들의 경우에는 형태학적인 검사가 보고시간과 비용 면에서는 매우 유용한 방법이다. 분자유전학적인 검사 방법은 비용과 임상적 중요성 등을 고려하여야 하지만 분자유전학적 검사를 병행하여 신속하고 정확한 결과를 제공할 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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