본 실험에서는 토마토의 종자를 기내 배양하여 얻어진 1g 이하의 무균 잎 조직을 이용하여 미토콘드리아를 분리 정제하여 MitoTracker를 이용하여 세포생물학적으로 확인하였고, 이들의 mt를 이용하여 미토콘드리아 DNA와 RNA를 추출과 검정을 하였다. 또한 고농도의 이온성을 이용하여 미토콘드리아와 mtDNA 및 mtRNA을 추출할 수 있었으며, 식물의 여러 종류에도 사용되어질 수 있을 것이다. mtDNA는 PCR 분석에 의하여 plastid DNA와 혼재되어 있지 않음을 확인하였다. mtRNA는 RT-PCR 분석을 통하여 plastid RNA와 흔재되어 있지 않음을 확인할 수 있었다.
Kim, Kyoung Mi;Noh, Ji Heon;Abdelmohsen, Kotb;Gorospe, Myriam
BMB Reports
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제50권4호
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pp.164-174
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2017
Mitochondria are cytosolic organelles essential for generating energy and maintaining cell homeostasis. Despite their critical function, the handful of proteins expressed by the mitochondrial genome is insufficient to maintain mitochondrial structure or activity. Accordingly, mitochondrial metabolism is fully dependent on factors encoded by the nuclear DNA, including many proteins synthesized in the cytosol and imported into mitochondria via established mechanisms. However, there is growing evidence that mammalian mitochondria can also import cytosolic noncoding RNA via poorly understood processes. Here, we summarize our knowledge of mitochondrial RNA, discuss recent progress in understanding the molecular mechanisms and functional impact of RNA import into mitochondria, and identify rising challenges and opportunities in this rapidly evolving field.
Kim, Eun-Kyoung;Youn, Hye-Sook;Koo, Yong-Bom;Roe, Jung-Hye
Journal of Microbiology
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제35권4호
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pp.264-270
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1997
The structure of plasmid mlp1, a linear 10.2kb mitochondrial plasmid of Pleurotus ostreatus NFF A2 was determined by restriction enzyme mapping and partial sequencing. The plasmid encodes at least two proteins; a putative RNA polymerase showing homology to yeast mitochondrial RNA polymerase and to viral-encoded RNA polymerases, and a putative DNA polymerase showing significant homology to the family B thpe DNA polymerases. It also contains terminal inverted repeat sequences at both ends which are longer than 274 bp. A 1.6 kb EcoRI restriction fragment of m1p1 containing the putative RNA polymerase gene did not hybridize to the nuclear or motochondrial genomes from P. ostreatus, suggesting that it may encode plasmidspecific RNA polymerase. The gene fragment also did not hybridize with the RNA polymerase gene (RPO41) from Saccaromyces cerevisiae. The relationship between genes in m1p1 and those in another linear plasmid pC1K1 of Claviceps purpurea was examined by DNA hybridization. The result indicates that the genes for DNA and RNA polymerases are not closely related with those in C. purpurea.
비정상적인 미토콘드리아에 의해 산화 스트레스가 증가하면 세포내 신호전달 및 유전자 발현에 손상을 일으켜 인슐린 저항성이나 당뇨병 등의 여러 질환들을 유발한다. 그런데 자식작용은 산화 스트레스로 기능이 저하된 미토콘드리아를 제거하여 인슐린 저항성 등을 억제해준다. 한편 운동도 미토콘드리아 생합성을 강화시켜 조직의 기능저하나 퇴행을 회복시켜준다. 따라서 운동과 자식작용이 서로 연관되어 미토콘드리아 생합성을 유도하는 신호체계로 작용할 가능성이 있고, 이 연구를 통해 운동 혹은 AICAR (aminoimidazole-4-carboxamide-1-${\beta}$-D-ribofuranoside)처치로 활성 화된 AMPK(5'-AMP- activated protein kinase) 신호전달체계가 미토콘드리아 생합성을 증가시키는 경로에 자식작용이 관여하는지의 여부를 확인하고자 하였다. 연구결과에 따르면, 6시간의 급성운동으로 쥐의 골격근에서 PGC-1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1)과 mtTFA (mitochondrial transcription factor A)의 mRNA 발현이 유의하게 증가하였다. 하지만 자식작용 표지제인 LC3(microtubule-associated proteinl light chain 3)의 mRNA 발현은 증가경향을 나타냈지만 유의하지 않았다. 한편 C2C12 근세포에서도 AICAR 처치에 의해 PGC-1, mtTFA mRNA 발현이 모두 증가하였지만, 이러한 증가는 LC3 SiRNA에 의해서 억제되지 않는 것으로 나타났다. 이러한 결과들을 통해 자식작용은 AMPK에 의해 조절되는 신호전달 전달체계와는 다른 경로로 미토콘드리아 생합성에 영향을 미칠 것으로 사료된다.
In order to analyze the intracellu1ar localization of specific RNA components of ribonucleoproteins (RNP) in Xenopus oocytes, a modified protocol of whole-mount in situ Hybridization is presented in this paper, Mitochondria specific 12S rRNA probe was used to detect the amplification and distribution of mitochondria in various stages of the oocyte life cycle, and the results were found to be consistent with previously known distribution of mitochondria. The results with other specific probes (U1 and U3 small nuclear RNAs, and 5S RNA) also indicate that this procedure is generally effective in localizing RNAs in RNP complexes even inside organelles. In addition, the RNA component of RNase MRP, the RNP with endoribo-nuclease activity, localize to the nucleus in various stages of the oocyte life cycle. Some of MRP RNA, however, were found to be localized to the special population of mitochondria near the nucleus, especially in the active stage of mitochondrial amplification. It suggests dual localization of RNase MRP in the nucleus and mitochondria, which is consistent with the proposed roles of RNase MRP in mitochondrial DNA replication and in rRNA processing in the nucleolus.
Jung Eun Lee;Dong Eun Yang;Yu Ri Kim;Hyuk Lee;Hyun Ick Lee;Suh-Yung Yang;Hei Yung Lee
Animal cells and systems
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제3권3호
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pp.295-301
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1999
The nucleotide sequence of a 447 base pair fragment in the mitochondrial cytochrome b gene and the complete sequence of the mitochondrial 12S ribosomal RNA gene, 938 bp, were analyzed to infer inter- and intraspecific genetic relationships of Hyla japonica and H. suweonensis from Korea and H, japonica from Japan. In the mitochondrial cytochrome b gene, genetic differentiation among H. japonica populations were 9.62% and 15.66% between H. japonica and H. suweonensis. Based on the Tamura-Nei distance, the level of sequence divergence ranged from 0.45% to 2.75% within Korean H. japonica, while 8.31%-8.87% between Korean and Japanese H. japonica and 11.51%-12.46% between H. japonica and H. suweonensis. In the neigh-bor-joining tree, Korean populations of H. japonica were clustered first at 2.22% and followed by Japanese H. japonica and H. suweonensis at 8.51% and 12.29%, respectively. In mitochondrial 12S rRNA gene, genetic differentiation between H. japonica and H. suweonensis nras 7.17% (68 bp) including 7 gaps. Based on Tamura-Nei distance, the level of sequence divergence ranged 3.53% between Korean and Japanese H. japonica and from 4.93% to 5.41% between H. japonica and H. suweonensis. Phenogram pattern of the 12S rRNA gene sequence corresponded with that of the mitochondrial cytochrome b gene.
본 연구는 국내에서 생산되거나 해외에서 수입되어 국내에서 유통되는 수산물 중에서 두족류를 문어류, 낙지류, 오징어류, 주꾸미류, 꼴뚜기류의 5개 그룹으로 구분하여 분석하였다. 두족류 5개 그룹을 판별을 하기 위해 미토콘드리아에 존재하는 유전자를 분석하였고, 그 중에서 COI (mitochondrial cytochrome C oxidase subunit I), 16s rRNA (16s ribosomal RNA), 12s rRNA (12s ribosomal RNA) 내에서 상당히 유사한 DNA 서열 부분과 일부 서열 변화 부분이 확인되었다. 명확하게 두족류 5개 그룹 판별을 하기 위해 COI, 16s rRNA, 12s rRNA 유전자의 일부 서열 변화 부분에서 그룹 특이적 프라이머 세트를 디자인하였다. 국내 외에서 확보한 두족류 시료(참문어, 낙지, 살오징어, 아메리카 대왕오징어, 갑오징어, 주꾸미, 모래주꾸미, 하이야주꾸미, 참꼴뚜기, 창꼴뚜기, 한치꼴뚜기)의 genomic DNA을 추출하여 각 그룹의 특이적 프라이머를 이용하여 SYBR 기반의 real-time PCR 시스템에 의해 분석되었고, threshold cycle (Ct) value와 같은 real-time PCR 결과 분석에 의해 두족류 내 그룹 판별이 가능하였다(Table 3).
Phospholipase D (PLD), a superfamily of signaling enzymes that most commonly generate the lipid second messenger Phosphatidic Acid (PA), is found in diverse organisms from bacteria to man and functions in multiple cellular pathways. A fascinating member of the family, MitoPLD, is anchored to the mitochondrial surface and has two reported roles. In the first role, MitoPLD-generated PA regulates mitochondrial shape through facilitating mitochondrial fusion. In the second role, MitoPLD performs a critical function in a pathway that creates a specialized form of RNAi required by developing spermatocytes to suppress transposon mobilization during meiosis. This spermatocyte-specific RNAi, known as piRNA, is generated in the nuage, an electron-dense accumulation of RNA templates and processing proteins that localize adjacent to mitochondria in a structure also called intermitochondrial cement. In this review, we summarize recent findings on these roles for MitoPLD functions, highlighting directions that need to be pursued to define the underlying mechanisms.
Cancer cells undergo uncontrolled proliferation, and aberrant mitochondrial alterations. Tumor necrosis factor receptor-associated protein 1 (TRAP1) is a mitochondrial heat shock protein. TRAP1 mRNA is highly expressed in some cancer cell lines and tumor tissues. However, the effects of its overexpression on mitochondria are unclear. In this study, we assessed mitochondrial changes accompanying TRAP1 overexpression, in a mouse cell line, NIH/3T3. We found that overexpression of TRAP1 leads to a series of mitochondrial aberrations, including increase in basal ROS levels, and decrease in mitochondrial biogenesis, together with a decrease in peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-$1{\alpha}$ (PGC-$1{\alpha}$) mRNA levels. We also observed increased extracellular signal-regulated kinase (ERK) phosphorylation, and enhanced proliferation of TRAP1 overexpressing cells. This study suggests that overexpression of TRAP1 might be a critical link between mitochondrial disturbances and carcinogenesis.
Although shrimps belonging to family Crangonidae are known to be genetically divergent and ecologically important among the various benthos, any of their mitochondrial genome has not been reported yet. We here determined the complete mitochondrial genome sequence of Crangon hakodatei (Rathbun, 1902), which was collected from East China Sea ($124^{\circ}E$ and $34.5^{\circ}N$). Total mitochondrial genome length of C. hakodatei was 16,060 bp, in which 13 proteins, 2 ribosomal RNAs, 22 transfer RNAs and a putative control region were encoded. Secondary structure prediction analysis showed that twenty tRNA genes exhibit the conserved structure but two genes, $tRNA^{Cys}$ and $tRNA^{Ser}$ (AGN), lack T and D arm, respectively. Based on the sequence similarity of the COI region from the currently reported five species belonging to genus Crangonidae, C. hakodatei was most closely related to Crangon crangon. Phylogenetic analysis of full COXI genes belonging to infraorder Caridea showed that only crangonid shrimps were clustered together with those of Dendrobranchiata. Gene order were well conserved from Penaeoidea to Caridea but $tRNA^{Pro}$ and $tRNA^{Thr}$ in Palaemonid shrimp were flipped each other by the recombination. Further study about mitochondrial genome sequences of shrimps belonging to Crangonidae should be made to know better about their evolutional relationships with other those in infraorder Caridea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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