Methanol extracts of fruits of 67 plants were screened for in vivo antifungal activity against Magnaporthe grisea, Corticium sasaki, Botrytis cinerea, Phytophthora infestans, Puccinia recondita, and Blumeria graminis f. sp. hordei. Among them, 13 plant extracts ($3,000\;{\mu}g/ml$) showed more than 90% disease-control efficacy against at least one of six plant diseases. Specifically, the extracts of Aleurites fordii, Angelica dahurica, Camellia japonica, Chamaecyparis pisifera, Pittosporum tobira, and Styrax japonica controlled more than 90% of the development of rice blast at $1,000{\mu}g/ml$. Extracts of both S. japonica and A. dahurica fruits at $333{\mu}g/ml$ concentration displayed strong antifungal activity against M. grisea on rice seedlings.
Rice blast (Magnaporthe oryza B.) is one of the most important diseases in rice that causing great yield losses every year around the world. It is important to screen valuable genetic resources for improving blast resistance. This study was conducted to identify the blast resistance in 279 Korean rice landraces using blast nursery tests and isolate inoculum screening. The results showed that 11 landrace accessions found to be resistant to rice blast in blast nursery and inoculation screening tests and the degree of lesions in most accessions showed that they were susceptible to reactions. In order to find the distribution of blast resistant genes, a molecular survey was conducted to identify the presence of major blast resistance (R) gene in 279 Korean landraces. The results revealed that their frequency distribution was Pik-m (36.2%), Piz (25.4%), Pit (13.6%), and Pik (10%). Besides, the frequency distribution of Piz-t, Pii, Pik-m/Pik-p, Pi-39(t), Pib, Pi-d(t)2, Pita/Pita-2 and Pi-ta genes were identified as less than 10%. The results did not consist with the reactions against blast diseases between genotypes and phenotypic part of the nursery tests and isolate inoculation. For concluding these results, we used genome-wide SSR markers that have closely been located with resistance genes. The PCoA analysis showed that the landrace accessions formed largely two distinct groups according to their degree of blast resistance. By comparing genetic diversities using polymorphic information contents (PIC) value among the resistant, total and susceptible landraces, we found that PIC values decreased in four SSR markers and increased in six markers in the resistant accessions, which showed contrary to total and susceptible groups. These regions might be linked to resistance alleles. In this study, we evaluated the degree of blast resistance and the information about the distribution of rice blast resistant genes in Korean rice landraces. This study might be the basis for association analysis of blast resistance in rice.
Proceedings of the Korean Society of Plant Pathology Conference
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2003.10a
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pp.84.2-85
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2003
Magnaporthee grisea causes the devastating blast disease of rice. Entensive research has been conducted on infection mechanisms, particularly on appressorium formation and penetration, of this fungus during the last decade. However, the role(s) of cell-wall-degrading enzymes (CWDEs) on pathogenesis is not clearly demonstrated at molecular level. Many CWDES in plant pathogenic fungi including M. grisea are redundant; that is, there are multiple genes encoding enzymes with a similar or overlapping spectrum of activities. It is laborious to isolate all of the genes encoding related enzymes and to construct mutants lacking all 9f them. Thus, we considered alternative strategies to address the role of CWDEs in pathogenesis. Since expression of CWDE genes Is repressed by a simple sugar, as the first step, we cloned a Snfl (sucrose non-fermenting) gene (MgSnf1) from M. grisea. The predicted amino acid sequence showed a high identity with other Snf1 genes from various fungi. To elucidate molecular function of MgSnf1, a transformant lacking MgSnf1 was created by targeted gene replacement. En glucose, sucrose, and xylan the MgSnf1 mutant grew normally but in pectin and complex media, it grew slower than wild type. Expression of various CWDEs in MgSnf1 mutant was investigated and found that expression of some CWDEs is repressed. However, no significant difference was observed in conidial germination, appressorium formation, and pathogenicity in MgSnf1 mutant. However, MgSnf1 functionally complemented a yeast MgSnf1 mutant. These results suggest that MgSnf1 is involved in regulation of CWDEs and MgSnf1 is dispensable in pathogenicity of M. grisea.
In order to search potent antifungal substances from domestic plants, 40 plants cultivated in Korea were collected. After extracting with methanol (MeOH) and concentrating to dryness, the MeOH extracts were screened for in vivo antifungal activity against six plant diseases at a concentration of $2000{\mu}g/mL$. Fourteen extracts showed disease-controlling activity more than 90% against at least one of the 6 plant diseases tested; eight, seven, and three extracts controlled more than 90% the development of rice blast, tomato late blight, and wheat leaf rust, respectively. However, none of the extracts exhibited in vivo antifungal activity more than 90% against rice sheath blight, tomato gray mold, and barley powdery mildew. From the MeOH extracts of Angelica gigas and A. dahurica showing potent controlling activity against rice blast, 1 and 2 antifungal substances, respectively, were isolated by solvent partitioning and column chromatography. The three compounds were identified to be coumarins, namely, decursin, imperatorin, and isoimperatorin, by mass spectrometry and NMR spectroscopy. They were examined for in vitro and in vivo antifungal activities together with umbelliferone (7-bydroxycournarin) and scopoletin (6-methoxy-7-hydroxycoumarin) containing a free hydroxyl group at position 7 to investigate the structure-activity relationship. In vitro, most of 50% growth inhibitory concentrations ($IC_{50}$) were over $200{\mu}g/mL$, indicating that they have relatively weak antifungal activity. The antifungal activity of decursin and scopoletin, containing cyclic alkoxy groups instead of free hydroxyl group at position 7, was stronger than umbelliferone and scopoletin. Especially, decursin and imperatorin showed potent antifungal activities against Pythium ultimum and Magnaporthe grisea, respectively, with $IC_{50}$ values less than $25{\mu}g/mL$. In vivo, decursin and imperatorin showed potent antifungal activity against rice blast, whereas other coumarins hardly controlled the development of 6 plant diseases tested. These results suggest that the antifungal activity of 7-hydroxycoumarin derivative is substantially increased when the hydroxyl group at position 7 is protected by a stable cyclic alkoxy grouping.
Recently organic farming practice of rice has been emerged in Korea, but one of the major limiting factor is the no effective environmental-friendly agro-materials to control major plant diseases. Bordeaux mixture has been used effectively as a preventive agro-chemical. The aim of this study was to investigate efficacy of Bordeanux mixture on control of rice blast caused by Magnaporthe grisea which is one of the disruptive rice diseases in world-wide. In greenhouse experiment, pre-treatment of 6-6 type of Bordeaux mixture before inoculation of spore suspension of M. grasea showed 71 % of control value. In field experiment, preventive applications of 4-8 and 6-6 types of Bordeaux mixture showed over 71 % of the control value. Chemical injury on rice leaves were not found in the application concentrations of all types of Bordeaux mixture, but observed in applications of Bordeaux mixtures between 30 and 100 diluted concentrations. This results indicate Bordeaux mixture can be used as an effective environmental-friendly agro-chemical to control rice blast disease in the field.
Xanthomonas oryzae pv. oryzae causing bacterial leaf blight disease in rice produces and secretes Hpa1 protein that belongs to harpin protein family. Previously it was reported that Hpa1 induced defense responses when it was produced in tobacco. In this study, we expressed hpa1 gene in rice and Arabidopsis to examine the effects of Hpa1 expression on disease resistance to both fungal and bacterial pathogens. Expression of hpa1 gene in rice enhanced disease resistance to both X. oryzae pv. oryzae and Magnaporthe grisea. Interestingly, individual transgenic rice plants could be divided into four groups, depending on responses to both pathogens. hpa1 expression in Arabidopsis also enhanced disease resistance to both Botrytis cineria and Xanthomonas campestris pv. campestris. To examine genes that are up-regulated in the transgenic rice plants after inoculation with X. oryzae pv. oryzae, known defense-related genes were assessed, and also microarray analysis with the Rice 5 K DNA chip was performed. Interestingly, expression of OsACS1 gene, which was found as the gene that showed the highest induction, was induced earlier and stronger than that in the wild type plant. These results indicate that hpa1 expression in the diverse plant species, including monocot and dicot, can enhance disease resistance to both fungal and bacterial plant pathogens.
The 13 major blast resistance(R) genes against Magnaporthe grisea were screened in a number of Korean rice varieties using molecular markers. Of the 98 rice varieties tested, 28 were found to contain the Pia gene originating from Japanese japonica rice genotypes. The Pib gene from BL1 and BL7 was incorporated into 39 Korean japonica varieties, whereas this same gene from the IRRI-bred indica varieties was detected in all Tongil-type varieties. We also found that 17 of the japonica varieties contained the Pii gene. The Pii gene in Korean rice varieties originates from the Korean japonica variety Nongbaeg, and Japanese japonica varieties Hitomebore, Inabawase, and Todorokiwase. The Pi5 gene, which clusters with Pii on chromosome 9, was identified only in Taebaeg. Thirty-four varieties were found to contain alleles of the resistance gene Pita or Pita-2. The Pita gene in japonica varieties was found to be inherited from the Japanese japonica genotype Shimokita, and the Pita-2 gene was from Fuji280 and Sadominori. Seventeen japonica and one Tongil-type varieties contained the Piz gene, which in the japonica varieties originates from Fukuhikari and 54BC-68. The Piz-t gene contained in three Tongil-type varieties was derived from IRRI-bred indica rice varieties. The Pi9(t) gene locus that is present in Korean japonica and Tongil-type varieties was not inherited from the original Pi9 gene from wild rice Oryza minuta. The Pik-multiple allele genes Pik, Pik-m, and Pik-p were identified in 24 of the varieties tested. In addition, the Pit gene inherited from the indica rice K59 strain was not found in any of the Korean japonica or Tongil-type varieties tested.
Park, Sook-Young;Chi, Myoung-Hwan;Milgroom, Michael G.;Kim, Hyo-Jung;Han, Seong-Sook;Kang, Seog-Chan;Lee, Yong-Hwan
The Plant Pathology Journal
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v.26
no.4
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pp.313-320
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2010
Genetic instability of the rice blast fungus Magnaporthe oryzae has been suggested as a major factor underlying the rapid breakdown of host resistance in the field. However, little information is available on the mechanism of genetic instability. In this study, we assessed the stability of repetitive DNA elements and several key phenotypic traits important for pathogenesis after serially transferring two isolates though rice plants and an artificial medium. Using isolate 70-15, we obtained a total of 176 single-spore isolates from 10 successive rounds of culturing on artificial medium. Another 20 isolates were obtained from germ tubes formed at the basal and apical cells of 10 three-celled conidia. Additionally, 60 isolates were obtained from isolate KJ201 after serial transfers through rice plants and an artificial medium. No apparent differences in phenotypes, including mycelial growth, conidial morphologies, conidiation, conidial germination, appressorium formation, and virulence, or in DNA fingerprints using MGR586, MAGGY, Pot2, LINE, MG-SINE and PWL2 as probes were observed among isolates from the same parent isolate. Southern hybridization and sequence analysis of two avirulence genes, AVR-Pita1 and AVR-Pikm, showed that both genes were also maintained stably during 10 successive generations on medium and plants. However, one reversible loss of restriction fragments was found in the telomere-linked helicase gene (TLH1) family, suggesting some telomere regions may be more unstable than the rest of the genome. Taken together, our results suggest that phenotype and genotype of M. oryzae isolates do not noticeably change, at least up to 10 successive generations on a cultural medium and in host plants.
A new 3-amino-1,3-thiazoline chemical library was synthesized through parallel synthetic technology and in vivo antifungal activity of the compounds were investigated against the typical 6 plant diseases (100 ppm). The characteristic feature of these derivatives was that both a benzyl moiety in C-2 imino and an amino group in C-3 of 2-imino-1,3-thiazoline scaffold were substituted in the molecule respectively. Some compounds showed antifungal activity with selectivity against tomato late blight and rice blast. The fungitoxicity would be attributed to 3,4-dichlorophenyl moiety of the benzyl group.
Kim, Hyo-Jin;Hwang, In-Sun;Kim, Beom-Seok;Hwang, Byung-Kook
The Plant Pathology Journal
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v.22
no.1
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pp.75-89
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2006
The actinomycete strain JK-1 that showed strong inhibitory activity against some plant pathogenic fungi and oomycetes was isolated from Jung-bal Mountain in Ko-yang, Korea. The strain JK-1 produced spores singly borne on sporophores and the spores were spherical and 0.9-1.2 11m in diameter. The cell wall of the strain JK-1 contained meso-diaminopimelic acid. The actinomycete strain JK-1 was identified as the genus Micromonospora based on the morphological, physiological, biochemical and chemotaxonomic characteristics. From the 168 rDNA analysis, the strain JK-1 was assigned to M aurantiaca. The antibiotic MA-1 was purified from the culture broth of M aurantiaca JK-1 using various purification procedures, such as Diaion HP20 chromatography, C18 flash column chromatography, silica gel flash column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography. $^{1}H-$, $^{13}C-NMR$ and EI mass spectral analysis of the antibiotic MA-1 revealed that the antibiotic MA-1 is identical to phenylacetic acid. Phenylacetic acid showed in vitro inhibitory effects against fungal and oomycete pathogens Alternaria mali, Botrytis cinerea, Magnaporthe grisea, Phytophthora capsici and yeast Saccharomyces cerevisiae at < 100 $\mug$$ml^{-1}$. In addition, phenylacetic, acid completely inhibited the growth of Sclerotinia sclerotiorum, Bacillus subtilis, Candida albicans, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria at < $\mug$$ml^{-1}$. Phenylacetic acid strongly inhibited conidial germination and hyphal growth of M grisea and C. orbiculare. Phenylacetic acid showed significantly high levels of inhibitory' effect against rice blast and cucumber anthracnose diseases at 250 $\mug$$ml^{-1}$. The control efficacies of phenylacetic acid against the two diseases were similar to those of commercial compounds tricyclazole, iprobenfos and chlorothalonil .n the greenhouse.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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