Trichnuris suis does not excrete eggs during larval stage as well as in particular adult stage, It is impossible to diagnose by use of fecal examination method in those periods. Therefore, serological diagnostic method can be very useful for those stages. In order to produce monoclonal antibody, specific somatic and secretory-excretory (SE) antigens of T. suis were identified and analyzed by SDS-PAGE and Western blot. Monoclonal antibody-producing hybridoma cells were cloned, which were made of popliteal lymph node of BALB/c mice immunized with a 45 kDa somatic antigen of T. suis. Five clones (1B9, 2C4, n2C5, 2D7 and 2D8) showing strong responses to T. suis antigens were selected and the isotype identified. All monoclonal antibodies were IgG1 isotype and the light chains were k chain. Established monoclonal antibodies reacted specifically to somatic and SE antigens of T. suis and did not cross-reacted to antigens of ascaris suum, trichuris vulpis, or Trichinella spiralis. The sensitivity of somatic and SE antigens against these monoclonal antibodies were significant (p<0.01) associated with those of positive and negative sera.
An immunoassay techniques using monoclonal antibodies have been developed of the quantitative analysis of endogenous hormones in plants. In order to be useful for immunoassay, both a high degree of specificity and a high affinity are required. A system is described for production of hybridomas which secrete antibodies against the plant hormone. Using the system we were able to produce hybridmas with the desired antibody specificity by cell fusion and culture method. For a number of obvious reasons, monoclonal antibodies(mAb) were superior to polyclonal antibodies.
Kim, Tae-Lim;Cho, Man-Ho;Sangsawang, Kanidta;Bhoo, Seong Hee
Molecules and Cells
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v.39
no.6
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pp.460-467
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2016
Bacteriophytochromes are phytochrome-like light-sensing photoreceptors that use biliverdin as a chromophore. To study the biochemical properties of the Deinococcus radiodurans bacteriophytochrome (DrBphP) protein, two anti-DrBphP mouse monoclonal antibodies (2B8 and 3H7) were generated. Their specific epitopes were identified in our previous report. We present here fine epitope mapping of these two antibodies by using truncation and substitution of original epitope sequences in order to identify minimized epitope peptides. The previously reported original epitope sequences for 2B8 and 3H7 were truncated from both sides. Our analysis showed that the minimal peptide sequence lengths for 2B8 and 3H7 antibodies were nine amino acids (RDPLPFFPP) and six amino acids (PGEIEE), respectively. We further characterized these peptides in order to investigate their reactivity after single deletion and single substitution of the original peptides. We found that single-substituted 2B8 epitope (RDPLPAFPP) and dual-substituted 3H7 epitope (PGEIAD) showed significantly increased reactivity. These two antibodies with high reactivity for the short modified peptide sequences are valueble for developing new peptide tags for protein research.
Yong Hwan Choi;Ha Seung Song;Su Keun Lee;Chi Hun Song;Ji Hoe Kim;Kyung Ho Han
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.51
no.3
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pp.223-242
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2023
In contrast to chemical medicines, biopharmaceuticals exhibit reduced side effects and enhanced therapeutic efficacy. Antibody therapies have significantly advanced since the first monoclonal antibody's approval in 1986, now dominating the pharmaceutical market with seven out of the top 10 biopharmaceuticals. The bispecific antibody has a distinct capability to bind to two antigens simultaneously, unlike conventional monoclonal antibodies that target just one antigen. The notion of bispecific antibodies was initially introduced in 1960, and by 1997, the first symmetrical form of bispecific antibody was successfully produced. Subsequently, extensive research has been conducted on bispecific antibodies, leading to a significant milestone in 2014 when blinatumomab became the first FDA-approved drug to treat acute lymphocytic leukemia. Despite having a relatively shorter history compared to monoclonal antibodies, bispecific antibodies have proven their potential by targeting two antigens simultaneously, thereby rendering them highly effective as anti-cancer drugs. As of 2023, there are a total of 11 globally approved bispecific antibodies, with six of them receiving approval from FDA. In light of the rapidly expanding market for bispecific antibodies, this review article comprehensively explores the attributes, historical background, applications, and market status of bispecific antibodies. Additionally, it sheds light on the present trends in bispecific antibody development, drawing insights from 96 research articles and 105 clinical studies. Excitingly, we anticipate further progress in the development of bispecific antibodies and clinical trials on a global scale, with the aspiration of utilizing them not only in cancer treatment but also for addressing diverse medical conditions.
Therapeutic antibodies represent one of the fastest growing areas of the pharmaceutical industry. There are currently 19 monoclonal antibodies in the market that have been approved by the FDA and over 150 in clinical developments. Driven by innovation and technological developments, therapeutic antibodies are the second largest biopharmaceutical product category after vaccines. Antibodies have been engineered by a variety of methods to suit a particular therapeutic use. This review describes the structural and functional characteristics of antibody and the antibody engineering for the generation and optimization of therapeutic antibodies.
Monoclonal antibodies against glutamate dehydrogenase (GDH) from Sulfolobus solfataricus were produced and characterized using epitope mapping and biosensor technology, Five monoclonal antibodies raised against S. solfataricus GDH were each identified as a single protein band that comigrated with purified S. solfataricus GDH on the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and immunoblot. Epitope mapping analysis showed that only one subgroup among the antibodies tested recognized the same peptide fragments of GDH. Using the anti-S. solfataricus GDH antibodies as probes, the cross-reactivities of GDHs from various sources were investigated and it was found that the mammalian GDH is not immunologically related to S. solfataricus GDH. The structural differences between the microbial and mammalian GDHs were further investigated using biosensor technology (Pharmacia BIAcore) and monoclonal antibodies against S. solfataricus and bovine brain. The binding affinity of S. solfataricus glutamate dehydrogenase anti-S. solfataricus for GDH ($K_D$=11 nM) was much tighter than that of anti-bovine for GDH ($K_D$=450 nM). These results, together with the epitope mapping analysis, suggest that there may be structural differences between the two GDH species, in addition to their different biochemical properties.
Heat shock protein (HSP) is one of cellular protein commonly present in major periodontopathogenic bacteria as well as mammalian cells. The protein may play a role in the immunopathogenesis by modulating autoimmune reaction due to its high level of sequence homology between bacteria and human counterpart. Hence, identifying immunodomiant epitope of bacteria HSP that is cross-reactive to periodontopathogenic bacteria with a specificity to human HSP may comprise a critical strategy for development of a periodontal vaccine. The present study was performed to establish clones producing monoclonal antibody reactive to Porphyromonas gingivalis (p. gingivalis) HSP with a specificity to human HSP. 4 different hybridomas were cloned producing monoclonal IgG antibodies to P, gingivalis HSP and evaluated for their reactivity and specificity to other periodontopathogenic bacteria as well as to human HSP. These four monoclonal antibodies reacted with p. gingivalis HSP only with specificities to other bacteria tested and human HSP as well. The antigenic epitopes producing the 4 monoclonal antibody may be potentially developed as vaccine candidates. Further investigations are under way to identify more clones producing monoclonal antibodies reactive to P, gingivalis HSP and to other periodontopathogenic bacteria as well, while maintaining specificities to human counterpart.
Monoclonal antibodies are widely used as diagnostic reagents and for therapeutic purposes, and their demand is increasing extensively. To produce these proteins in sufficient quantities for commercial use, it is necessary to raise the output by scaling up the production processes. This review describes recent trends in high-density cell culture systems established for monoclonal antibody production that are excellent methods to scale up from the lab-scale cell culture. Among the reactors, hollow fiber bioreactors contribute to a major part of high-density cell culture as they can provide a tremendous amount of surface area in a small volume for cell growth. As an alternative to hollow fiber reactors, a novel disposable bioreactor has been developed, which consists of a polymer-based supermacroporous material, cryogel, as a matrix for cell growth. Packed bed systems and disposable wave bioreactors have also been introduced for high cell density culture. These developments in high-density cell culture systems have led to the monoclonal antibody production in an economically favourable manner and made monoclonal antibodies one of the dominant therapeutic and diagnostic proteins in biopharmaceutical industry.
Enzyme-linked immunoassay system using monoclonal antibody (MAb) has become an important methodology for the quantitative and qualitative analysis of drugs and phytochemical compounds having small molecular weight. In this study, monoclonal antibodies against berberine, one of main constituent of Phellodendron amurense, Coptis japonica and Corydalis turtschaninovii, were produced. (omitted)
These experiments were undertaken as a basic study to develop immunocontraceptive vaccine and to understand the role of zona pellucidae in early fertilization process by identifying the monoclonal and polyclonal antibody to porcine zona pellucidae and polyclonal antibody to mouse zona pellucidae by indirect ELISA and indirect immunofluorescence test. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The titer of the antibodies to zona was determined by indirect ELISA using solubilized porcine zona coated plates. Both monoclonal and rabbit polyclonal antibodies showed very high titers ; O.D at 1 : 12,800 dilution of antibodies was still significantly higher than that of non-immunized control serum. Rabbit anti-mouse zona pellucidae sera also reacted with porcine zona pellucidae. 2. By indirect immunofluorescence test strong fluorescences were observed on the egg treated with homologous and heterologous rabbit polyclonal antibodies and FITC lablled 2nd antibodies and found to crossreact strongly with the eggs from the pig and mouse. While weaken fluorescences were observed on the eggs treated with monoclonal antibodies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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