Yoo, Young Bin;Kim, Sung-Soon;Kim, Young Kwon;Kim, Sunghyun
대한의생명과학회지
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제22권4호
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pp.174-183
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2016
In the present study, a serum-based minimum inhibitory concentration (MIC) testing to caspofungin was optimized and evaluated to solve the limitations of the conventional Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) guideline-based antifungal agent MIC test and the usefulness of this testing for clinical application was determined. A total of 105 Candida albicans clinical isolates were used for measuring MIC to caspofungin. Results showed that growth characteristics were different according to types of serum and the mouse serum was the most suitable for this assay. In order to measure the optimal concentration of mouse serum, 0 to 100% mouse serum were added to the media during fungal culture. The optimal concentration of serum was 50% when consideration of antifungal agent administration and inoculum size, serum components and ease of hyphae separated, and the consideration of the degree of growth. In comparison of the usefulness between the conventional Alamar-modified broth microdilution MIC assay and 50% mouse serum-based MIC testing, the range of $MIC_{80}$ of the Alamar-modified broth microdilution MIC assay was $0.13{\sim}2.0{\mu}g/mL$ (SD ${\pm}0.42{\mu}g/mL$) and that of the 50% mouse serum-based MIC assay was $2.0{\sim}32.0{\mu}g/mL$ (SD ${\pm}9.01{\mu}g/mL$). The range of $MIC_{50}$ of the Alamar-modified broth microdilution MIC assay was $0.13{\sim}2.0{\mu}g/mL$ (SD ${\pm}0.40{\mu}g/mL$) and that of the 50% mouse serum-based MIC assay was $1.0{\sim}16.0{\mu}g/mL$ (SD ${\pm}2.36{\mu}g/mL$). The MICs of 50% mouse serum-based MIC testing was increased by up to 4 to 64 times than Alamar-modified broth microdilution MIC assay. In conclusion, a 50% mouse serum-based MIC assay was more useful for measuring MIC in Candida albicans clinical isolates than conventional colorimetric broth microdilution MIC testing.
국내에 등록된 살균제를 대상으로 Pestalotiopsis theae (SP-3)에 의해 발생되는 단감나무 둥근갈색무늬병 방제약제 선발을 위하여 in vitro에서 병원균의 생장에 미치는 영향을 조사하였다. 대상 약제 중 prochloraz, tebuconazole, fluazinam, fludioxonil, iminoctadine-triacetate 등은 $10{\mu}g/m{\ell}$에서 85% 이상, dichlofluanid과 chlorothalonil은 각각 10%, 33%의 균사생장 억제율을 나타내었으나, benomyl은 전혀 억제시키지 못하였다. 이들의 균사생장 최소억제농도 (MIC)는 iminictadine-triacetate가 P. theae SP-3 균수에 대해서는 $10{\mu}g/m{\ell}$인 반면, 대조균인 P. theae $\underline{MAFF}$ 752002와 P. longiseta $\underline{MAFF}$ 752001에 대해서는 $1{\mu}g/m{\ell}$ 미만으로 나타났다. fludioxonil, fluazinam, tebuconazole의 MIC는 $10{\mu}g/m{\ell}$이었고, Benomyl, chlorothalonil 및 dichlorofluanid의 MIC는 $1,000{\mu}g/m{\ell}$ 로 나타났다. 분생포자의 발아는 $1{\mu}g/m{\ell}$의 prochloraz, tebuconazole, fluarinam, fludoxonil, iminoctadine-triacetate가 함유된 배지에서 80% 이상 억제되었고, benomyl, chlorothalonil, dichlofluanid이 함유된 배지에서는 각각 40%, 60%, 30% 억제되었다. 단감나무 잎 절편과 공시균의 포자현탁액을 이용한 약효 검정에서 $10{\mu}g/m{\ell}$ iminoctadine-triacetate는 93% 이상 발병 억제력을 보였으나 동일 농도의 benomyl과 dichlofluanid는 발병을 억제하지 못하였다. 예방 및 치료 효과는 Fludoxonil, tebuconazole, fluazinam 및 iminoctadine-triacetate이 94% 이상을 보인 반면, benomyl과 dichlofluanid은 예방과 치료효과가 나타나지 않았다.
Objective: The purpose of this study was to evaluate on the antimicrobial effect on the periodontal pathogens and anti-inflammatory effect of Eriobotryae folium. Eriobotryae folium are constituent herbs of Gagamgamroum, which has been used for a long time in oriental medicine as a herbal medicine for treating halitosis and toothache. Method: Eriobotryae folium was prepared by extracting medicinal herb with water. We investigated antimicrobial activity by the minimum inhibitory concentration (MIC) test. We also investigated inhibition of $IL-1{\beta}-induced$ collagenase (mmp-1), stromelysin-1 (mmp-3), interleukin-6 gene expression in human gingival fibroblasts using RTPCR analysis. Result: The antimicrobial effects of Eriobotryae folium was evaluated with MIC against periodontopathogens; Porphyromonas gingivalis 2561, W50, A7A1-28, 9-14K-1, Prevotella intermedia 28, and Actinobacillus actinomycetemcomitans Y4. MICs of Eriobotryae folium were 1.25 mg/ml, 2.5 mg/ml, 0.625 mg/ml, 1.25 mg/ml, 10 mg/ml and 10 mg/ml. The anti-inflammatory effect of Eriobotryae folium was evaluated with influence of herbs on the $IL-1{\beta}-induced$ expression of mmp-1, mmp-3, and interleukin-6. $IL-1{\beta}$ increased mmp-1, mmp-3, and interleukin-6 mRNA levels. Eriobotryae folium significantly inhibited $IL-1{\beta}-induced$ mmp-1, mmp-3, and interleukin-6 gene expressions in a dose-dependent manner. Conclusion: These results suggested that Eriobotryae folium might reduce the excessive proteolytic capacity of the gingival fibroblast during inflammation and could be developed as a new drug for periodontitis.
The combination of trimethoprim (TMP) and sulfamethoxazole (SMX) has been shown to be active against Mycobacterium tuberculosis (Mtb) in clinical tuberculosis (TB) treatment. However, the mechanism of action of TMP-SMX against Mtb is still unknown. To unravel this, we have studied the effect of TMP and SMX by deleting the folP2 gene in Mycobacterium smegmatis (Msm), and overexpressing the Mtb and Msm folP1/2 genes in Msm. Knocking out of the folP2 gene in Msm reduced the minimum inhibitory concentration of SMX 8-fold compared with wild type. Overexpression of the folP1 genes from Mtb and Msm increased the MICs by 4- and 2-fold in Msm for SMX and TMP, respectively. We show a strong correlation between the expression of folP1 and folP2 genes and TMP-SMX resistance in mycobacteria. This suggests that a combination of FolP2 inhibitor and SMX could be used for TB treatment with a better outcome.
The in vitro and in vivo antibacterial activities of a new fluoroquinolone, DWP20364(1-cyclopropyl-5-amino-6,8-difluoro-7-(2,7-diazabicyclo[3.3.0]oto-4-ene-7-yl)-1 ,4-di-hydro-4-oxoquinoline-3-carboxylic acid) were evaluated in comparison with those of ciprofloxacin(CPFX), sparfloxacin(SPFX) and ofloxacin(OFLX). DWP20364 was more potent than CPFX and OFLX against Staphylococcus spp., Streptococcus spp. and Enterococcus faecium MD8b and it was similarly or slightly less active than CPFX against Escherichia spp. and Pseudomonas spp.. For MRSA and OFLX resistant strains (Staphylococcus spp.(14),Enterococcus spp.(4), Acinetobacter spp.(2), Pseudomonas spp.(9), Klebsiella spp.(2) and Serratia spp.(6)),DWP20364(MICs for 90% of strains,0.025 and 12.5${\mu}$g/ml, respectively) was 4 to 32 folds more potent than SPFX and CPFX. The activity of DWP20364 decreased moderately in the presence of 5mM $Mg^{2+}$. However, various pHs and the concentrations of various serum had no effect on the activity of DWP20364. DWP20364 possessed a bacteriocidal effect at the 1MIC against gram positive and gram negative strains. The protective effect of DWP20364 against systemic infections in mice caused by S. aureus Smith or S. aureus L2379 was superior to that of CPFX and SPFX but it was less active than that of CPFX against infection by P. aeruginosa E-2.
보통 지루성 피부염은 과다 생성된 피지와 함께 피지를 영양분으로 상재하는 M. globosa 이스트에 의해서 얼굴, 몸 및 두피에 자주 발생하는 피부질환이다. 본 연구는 천연정유성분(Natural essential oils)으로부터 지루성 피부염과 관련된 항염증 활성과 M. globosa 이스트에 대한 증식 억제 활성을 평가하고자 하였다. 지루성 피부염 진정 효능을 평가하기 위해서 지루성 피부염 환경을 모사한 공배양 세포 평가 모델을 구축하였다. 본 평가모델을 통해서 육계(Cinnamomum zeylanicum, Cinnamon bark)의 껍질 및 박하(Mentha arvensis, Cornmint)의 잎에서 추출한 천연정유 성분이 다양한 지루성 피부염 자극원에 따른 Interleukin-$1{\alpha}$ (IL-$1{\alpha}$), Interleukin-6 (IL-6), Interleukin-8 (IL-8) 사이토카인의 발현량 증가와 피지생성 증가를 감소시킴을 확인하였다. 또한, 지루성 피부염 유발균으로 알려진 M. globosa 이스트에 대한 증식 저해 평가를 통해 두 정유성분에서 유의한 M. globosa 증식 억제 능(MIC ${\leq}0.0625%$)을 확인하였다. 본 연구 결과로부터 육계껍질 및 박하 잎 정유성분이 지루성 피부염에 따른 염증성 사이토카인의 발현량을 감소시켰다. 특히 육계 껍질 오일은 지루성 피부염 주요 원인인 Malassezia furfur 및 M. globosa 증식을 억제함으로써, 지루성 두피 염증의 예방과 효과적인 관리 제품의 소재로서 활용가치가 높음을 알 수 있다.
본 연구에서는 QRDRs의 유전자 돌연변이와 목시플로사신의 농도와의 관계를 알아보기 위하여 목시플로사신의 농도를 단계적으로 높여가며 Mycoplasma hominis (M. hominis)에 작용시켜 목시플로사신에 내성을 갖는 균주 6주(M1, M4, M8, M16, M32, M64)를 만들었고, 이 돌연변이주들의 MIC는 각각 0.5, 4, 8, 16, 32, 64 ${\mu}g$/ml이었다. 이 균들의 염기서열을 분석하였더니 모든 돌연변이주들에서 Arg163Thr (GyrA), Pro445Gln (ParE) 아미노산 치환이 관찰 되었고, 목시플로사신의 농도가 높아질수록 Ser153Lys (GyrA, ${\geq}4{\mu}g$/ml), Ser91Ile (ParC, ${\geq}16{\mu}g/ml$), Val450Phe (GyrB, ${\geq}64{\mu}g/ml$) 등과 같은 아미노산의 치환이 추가로 관찰되었다. 이러한 아미노산의 치환이 목시플로사신의 내성과 연관이 있는 것으로 생각되며, 특히 GyrB 단백질의 아미노산 치환은 목시플로사신의 고도 내성과 연관이 있는 것으로 생각된다.
천연 항균 소재를 탐색하기 위한 목적으로 은행잎, 은행종실 그리고 은행 외종피를 methanol, ethanol, water 추출물을 얻은 후 8종의 세균에 대하여 항균효과를 검색하였다. 은행잎, 은행 외종피의 methanol 추출물과 ethanol 추출물에서는 항균활성이 검색된 반면, 은행잎과 은행 외종피의 물추출물, 은행 종실의 모든 추출물에서는 항균활성이 검색되지 않았다. 은행잎의 경우 모든 균에 있어 methanol 추출물이 ethanol 추출물보다 강한 항균활성을 나타냈으며, methanol 추출물은 K. pneumoniae와 B. cereus에서 강한 항균 효과를 보였다. 은행 외종피의 경우 methanol 추출물은 B. cereus, S. aureus, B. subtilis, L. monocytogenes 균에, ethanol 추출물은 B. cereus, S. aureus, B. subtilis, K. pneumoniae균에서 강한 항균활성을 보였다. 항균성이 우수했던 은행잎과 은행 외종피의 methanol 추출물을 용매별로 순차 분획하여 항균효과를 검색한 결과 각각의 균주에 대해 hexane, chloroform, ethyl acetate 분획추출물에서 항균효과가 검색되었으며, 특히 은행 외종피의 chloroform 분획추출물에서 우수한 항균효과를 보였다. 또한 은행잎과 은행 외종피의 methanol 추출물 용매분획물의 최소저해농도(MIC)를 측정한 결과, 각각의 chloroform 분획에서 가장 낮은 MIC 값을 보였으며, 특히 은행 외종피의 chloroform 분획물은 B. cereus에 대해 $62.5{\mu}g$/mL로 본 실험 내에서 가장 낮은 MIC를 보였다. 은행잎과 은행 외종피 methanol 추출물의 chloroform 분획물($2,000{\mu}g$/mL)을 각 균주의 생육배지에 첨가하여 배양한 결과 세포가 팽윤되거나 일부 세포벽이 완전히 파괴된 형태를 관찰할 수 있었다.
Changes of control efficacy of chemical to potato late blight caused by Phytophthora infestans in potato fields from 2001 to 2004 were examined. Control efficacy of metalaxyl was suddenly decreased from 100% in 2002 to 50% in 2004 and that of dimethomorph also was similar to those of metalaxyl. However, the control efficacy of ethaboxam no great change. Both A1 and A2 mating type isolates were isolated from 2001 to 2004 in several areas in Korea. The majority of the P. infestans isolates were A1 mating type. Total 939 isolates of P. infestans obtained from several areas in Korea from 2001 to 2004 were examined for changes of sensitivity to metalaxyl. Frequencies of metalaxyl resistance isolates were gradually increased from 17% in 2001 to 84.2% in 2004, but isolation frequencies of metalaxyl sensitive and intermediate resistant isolate were decreased. Cause of decreasing control efficacy of metalaxyl was thought by increase of resistance isolates in A1 mating type population according to increasing metalaxyl use. Most isolates were grown at 0.5 ${\mu}g/ml of dimethomorph and isolates grown at 1 ${\mu}g/ml of dimethomorph were approximately 10.2-22.9%. However, no isolate was able to grow at 5.0 ${\mu}g/ml. Based on these results, minimum inhibitory concentrations (MIC) of dimethomorph to P. infestans were determined to be 0.5-1.0 ${\mu}g/ml. Our results indicated that the reason decreasing control efficacy of dimethomorph was not caused by occurrence of resistant isolates. About 5% and 12.1% isolates among the total isolates collected in 2003 and 2004 were grown on V-8 juice rye agar containing 1.0 ${\mu}g/ml ethaboxam. The 2.1 and 25.4% isolates had MICs of 0.2-0.4 ${\mu}g/ml, and MIC values of 87.9% and 74.3% isolates were less than 0.2 ${\mu}g/ml concentrations of ethaboxam. Therefore, resistance development by P. infestans to ethaboxam is not likely to occur in the natural condition.
Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus(MRSA) is a multidrug-resistant(MDR) strain. (+)-Usnic acid(UA) is uniquely found in lichens, and is especially abundant in genera such as Usnea and Cladonia. UA has antimicrobial activity against human and plant pathogens. Therefore, UA may be a good antibacterial drug candidate for clinical development. In search of a natural products capable of inhibiting this multidrug-resistant bacteria, we have investigated the antimicrobial activity of UA against 17 different strains of the bacterium. In this study, the effects of a combination of UA and permeable agents against MRSA were investigated. For the measurement of cell wall permeability, UA with concentration of Ethylenediaminetetraacetic acid(EDTA) was used. In the other hand, Sodium azide($NaN_3$) was used as inhibitors of ATPase. Against the 17 strains, the minimum inhibitory concentrations(MICs) of UA were in the range of $7.81-31.25{\mu}g/ml$. EDTA or $NaN_3$ cooperation against MRSA showed synergistic activity on cell wall. UA and in combination with EDTA and $NaN_3$ could lead to the development of new combination antibiotics against MRSA infection.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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