• 한국환경성돌연변이발암원학회지
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• 제20권1호
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• pp.7-13
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• 2000

The mechanisms of benzene toxicity is not fully elucidated, although the metabolism of benzene is very well understood. In order to study the mechanism of benzene toxicity, we investigated DNA damage induced by benzene metabolite, 1,2,4-benzenetriol (BT) in HL-60 cells by alkaline comet assay. To investigate the mechanism of cellular DNA damage induced by BT, the cells were treated with antioxidant such as vitamin C, SOD, catalase, and chelating agent such as deferoxamine (DFO), bathocuproinedisulfonic acid (BCDS). BT induced DNA damage in dose-dependent manner at concentration between 10$\mu\textrm{m}$ and 100$\mu\textrm{m}$. The antioxidant vitamin C itself induced DNA damage at higher concentration. The DNA damage induced by BT in HL-60 cells was protected at low concentraiton of vitamin C whereas no protective effect was found at high concentration. In hibitory effect of SOD on DNA damage by BT was observed and this suggested that BT produce superoxide anion (O2-) causing DNA damage. Catalase protected BT-induced DNA damage suggesting that BT produce H2O2 during autooxidation of BT. Both Fe(II)-specific cheiating agent, deferoxamine (DFO) and Cu(I)-specific chelating agent, bathocuproinedisulfonic acid (BCDS) inhibited BT0induced DNA damage. This suggested that DNA damage was caused by active species which was produced DAN damage. This suggested that DNA damage was caused by active species which was produced by the autooxidation of BT in the presence of Cu(II) and Fe(III). These findings suggest that reactive oxygen species play an important role in the mechanism of toxicity induced by benzene metabolites.

• 핵의학기술
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• 제23권1호
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• pp.35-39
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• 2019

[목적] B형 간염바이러스(hepatitis B virus, HBV)감염은 전세계적으로 중요한 공중 보건 문제이며 만성간염, 간 경변, 간암의 주요 원인으로 알려져 있으며, 이러한 질환의 진단 및 치료에 B형 간염바이러스의 혈청학적 검사는 필수적이다. 항 바이러스 치료중인 B형 간염 환자를 대상으로 면역방사계수 측정법(IRMA; Immunoradiometric assay)과 화학발광 미세입자 면역분석법(CMIA; Chemiluminescent Micropartical Immunoassay)을 이용하여 HBe-Ag 검사를 시행하였고, 실시간 중합효소 연쇄반응(RT-PCR; Realtime-Polymerase Chain Reaction)법을 이용하여 혈청 내 HBV DNA 검출율 을 비교 분석 하였다. [대상 및 방법] 항 바이러스 치료가 시행중인 B형 간염 환자 270명을 대상으로 HBeAg 혈청 검사와 HBV DNA 정량 검사를 실시하였다. HBeAg 혈청 검사는 검출 원리가 다른 두 가지 혈청학적 검사법(IRMA, CMIA)을 적용 하였고, 혈청 내 HBV DNA는 Abbott m2000 System을 사용하여 실시간 중합효소 연쇄반응(RT-PCR; Realtime-Polymerase Chain Reaction)법으로 정량 측정 하였다. [결과] HBeAg 검출율은 면역방사계수법(IRMA)의 경우 24.1% (65/205), 화학발광 미세입자 면역 분석법(CMIA)에서는 82.2% (222/48)의 결과를 보였다. 혈청학적 검사방법(IRMA, CMIA)에 따른 HBeAg 검사결과의 일치율은 33% (89/270)이다. 실시간 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 이용한 혈청 내 HBV DNA의 검출율은 29.3% (79/191)를 보였고, 혈청 내 HBV-DNA 농도는 $16IU/mL{\times}1.0{\times}10^9IU/mL$ 이며 검출한계는 <15IU/mL 이다. 면역방사계수법(IRMA)으로 HBeAg 검출결과가 양성일때 55.4%, 그리고 음성일때 20.9%의 HBV DNA 검출율과 $1.1{\times}10^8IU/mL$, $5.7{\times}10^5IU/mL$의 혈청내 HBV DNA농도를 나타냈다. 이에 반해 화학발광 미세입자 면역 분석법(CMIA)의 경우 HBeAg 검출결과가 양성일때 HBV DNA 검출율은 28.4%, 음성일때 33.3%의 결과를 나타냈으며 혈청 내 HBV DNA농도는 $6.0{\times}10^7IU/mL$, $2.4{\times}10^5IU/mL$ 이었다. 면역방사계수법과 화학발광 미세입자 면역 분석법에서 동일하게 HBeAg 검출 결과가 양성인 경우 HBV DNA 검출율은 62.3%의 결과를 보였으며, 혈청 내 HBV DNA 농도는 $1.1{\times}10^8IU/mL$ 이다. [결론] 혈청학적 검사법에 따른 HeAg 검출율은 많은 차이를 보였다. 이러한 차이는 검사kit에 사용된 Ab의 특성과 epitope, HBV의 genotype등 여러 가지 원인으로 생각된다. 혈청학적 검사 결과로 분류 된 그룹별 HBV DNA의 검출율과 농도를 비교한 결과, Group II(IRMA 양성, CMIA 양성, N=53)에서 높은 검출율과 농도를 확인할 수 있었다.

• 한국동물학회지
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• 제35권3호
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• pp.287-294
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• 1992

배양 중의 골격근 세포는 증식을 거쳐 세포융합을 통해 다핵세포로 분화되므로 세포분화의 연구에 좋은 모델로서 이용되고 있다. 이전 실험에서 근원세포 융합을 억제하는 단일클론항체(MII-3J31)가 제작되었으며(Kim et al., 1992)이 항체에 대한 항원은 분자량이 약 35 kDa인 세포막 단백질로 추정되었다. 본 실험에서는 13일 계배와 성체의 근섬유 mRNA에서 CDNA라이브러리를 제작하여 근원세포 분화에 특이적으로 나타나는 유전자를 추적하였다. 근원세포 융합에 관여하는 단백질에 대한 CDNA는 계배 13일 째의 근원세포 CDNA라이브러리에서 단일클론항체를 사용한 immunoscreening 방법을 이용하여 확인하였다. 이 CDNA의 크기는 약 1.5 kb였다. 한편 13일 계배와성체 근섬유 CDNA 라이브러 리를 이용하여 13일 계배에만 특이하게 유전자 발현 이 일어 나고 성체에서는 나타나지 않는 약 0.8 kb의 CDNA플 찾았다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제12권4호
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• pp.520-524
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• 1999

The present experiments were designed to examine whether exogenous DNA injected into the germinal crescent region (GCR) of early stage of developing embryos, which is considered to be the main place from which PGCs originate, can be transferred to recipient chicken embryos. In this experiment, Miw Z (DNA) dissolved in the transfection reagent (TR: Boehringer, Germany) was introduced into the GCR of donor embryos at stage 3-5 or 9-11, followed by continued incubation until the stage 13-15 of embryonic development. The PGCs collected from the embryonic blood vessels were examined for the incorporation of the injected DNA into the PGCs by the methods of X-gal staining and PCR analysis. As the results, the foreign DNA was successfully incorporated into the PGCS, leading to their transfer to the gonadal tissues. The present results, therefore, suggest that the early stage (3-5 or 9-11) of chicken embryonic development would be more successful than stage 13-15 in transferring exogenous genes to the recipient embryos, leading to the possibility of producing transgenic chicken medianting the PGCS.

• 한국식품영양과학회지
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• 제43권4호
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• pp.618-623
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• 2014

본 연구에서는 서목태를 기본으로 하여 제조된 전통 발효물인 사리장의 항산화 활성 분석 및 comet assay를 이용한 DNA 손상 억제 효과를 분석하고자 하였다. 사리장의 총 폴리페놀 함량은 $1.04{\pm}0.01$ mg GAE/mL로 나타났다. 항산화 활성을 분석한 DPPH 라디칼 소거능 및 TRAP는 농도 의존적으로 활성이 증가하였으며, 각각의 $IC_{50}$은 11.2 mg/mL와 1.2 mM로 나타났다. ORAC 활성 역시 농도 의존적 증가 활성을 나타내었다. 세포의 ROS 소거능(CAC)은 사리장 처리구의 모든 농도(10~100 ${\mu}g/mL$)에서 NC와 동일한 수준의 ROS 억제 활성을 나타내었다. Comet assay를 이용한 DNA 손상 보호 효과는 $H_2O_2$, Fe-NTA 그리고 HNE에 의한 산화적 스트레스에 의한 DNA 손상을 농도 의존적으로 보호하는 것으로 나타났으며, $IC_{50}$은 $H_2O_2$ 처리군이 13.4 ${\mu}g/mL$, Fe-NTA 처리군이 32.2 ${\mu}g/mL$, HNE 처리군이 59.9 ${\mu}g/mL$로 나타났다. 이상의 결과들은 사리장이 항산화 관련 생리활성을 가지는 것으로 판단되며, 향후 사리장에 포함된 생리활성 성분의 탐색과 in vivo 모델을 통한 생리활성 연구가 이루어져야 할 것으로 보인다.

• 미생물학회지
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• 제28권2호
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• pp.91-97
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• 1990

생체내의 유해산소를 제거하는 superoxide dismutase (superoxide : superoxide oxidoreductase E.C.1.15.1.1) 중 세포질내에서 그 활성을 지니는 인체의 세포질 superoxide dismuta~ie (SODl) 유전자를 사람의 간 cDNA library로부터 동위원소로 표지된 oligonucleotide probe를 이용, in situ plaque hybridization 방법으로 선별 분리하여 내장균 벡터로 클로닝하였다. 이 클론은 SOD1 유전자의 5"L"TR과 3’UTR을 포함한 1.6 kb 정도의 cDNA였다 SOD1 구조유전자만을 선택적으로 분리하기 위해서 ATG를 포함하는 sense strand primer와 3’UTR 부위의 antisense strand primer를 이용하여 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction) 방법을 써서 SOD1 구조유전자 부위만을 선택적으로 증폭시켰다. Taq DNA polymerase에 의해 증폭된 DNA를 벡터 pUCl9의 multiple cloning site (MCS) 내의 Hinc II 위치에 넣였으며 이 insert DNA를 M13 mp19으로 옮겨 dideoxy chain termination 방법으로 sequenase를 사용하여 염기서열을 결정하였다. 클론닝된 cDNA는 153개의 아미노산을 포함하고 있는 하나의 open reading frame (ORF)을 가셨다. 중합효소연쇄반응에 의해 이때 증폭된 SOD1 구조유전자를 $\lambda P_{L}$ 프로모터를 포함하고 있는 발현 벡터 pUPL에 옮긴 후 대장균에서 대량으로 발현시켰다. 이때 발현된 단백질 SOD1은 고유의 효소활성을 가지고 있었다.

• 대한의생명과학회지
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• 제10권2호
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• pp.65-73
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• 2004

I report that single-stranded antisense as a part of large circular (LC-) genomic DNA of recombinant M13 phage exhibits enhanced stability, sequence specific antisense activity, and no need for target site search. A cDNA fragment (708 bp) of rat TNF-$\alpha$ was inserted into a phagemid vector, and TNF-$\alpha$ antisense molecules (TNF$\alpha$-LCAS) were produced as single-stranded circular DNA. When introduced into a rat monocyte/macrophage cell line, WRT7/P2, TNF$\alpha$-LCAS was able to ablate LPS-induced TNF-$\alpha$ mRNA to completion. The antisense effect of TNF$\alpha$-LCAS was shown to be sequence-specific because expressions of three control genes ($\beta$-actin, GAPDH and IL-1$\beta$) were not significantly altered by the antisense treatment. Further, TNF$\alpha$-LCAS was found to be highly efficacious as only 0.1 $\mu$g (0.24 nM) of TNF$\alpha$-LCAS was sufficient to block TNF-$\alpha$ expression in 1$\times10^5$ WRT7/P2 cells. I have also observed specific antisense activity in reduction of NF-$\kappa$B gene expression. The results suggest that an antisense sequence as a part of single-stranded circular genomic DNA has a specific antisense activity.

• Plant Resources
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• 제1권1호
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• pp.13-21
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• 1998

A cDNA Fragment encoding iron storage protrin generated by polymerase chain reaction(PCR) using highly conserved regions of ferritin related genes were used to sereen a red pepper cDNA library. cDNA clone was designated as Fp1. Fp1 clone contatines a 5' nontranslated region of 51dp containing stop conds. Down stream from 5' UTP. an open reading frame of 750bp was observed. followed by a 3' UTR of 272bp. The deduces amino acid sequence of red pepper protein(Fp1) showed 84%, 48% and 36% identity with soybean(SolC). human(HuL H) and horse spleen(HoS-L) ferritin mRNA accumulation in response to iron. Ferritin mRNA accumulation was transient and particularly abundant in leaves. reaching a maxmum at 12h. The level of ferritin mRNA in roots was affected to a lesser extent than in leaves.

• 약학회지
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• 제39권6호
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• pp.661-665
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• 1995

Ginsenoside-Rg$_{1}$(G-Rg$_{1}$) has been shown to stimulate DNA synthetic activity in SK-HEP-1 cells. This study was therefore designed to determine in SK-HEP-1 cells whether the stimulatory effect of G-Rg$_{1}$ may be mediated by protein kinase C (PKC) which is known to play a key role in the signal transduction pathway leading to the cell proliferation. Using the tn situ PKC assay method, the PKC enzyme activity was determined in SK-HEP-1 cell cultures in response to G-Rg$_{1}$ at 3*10$^{-5}$ M or phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA) at 10$^{-6}$ M which in the enzyme activity by 1.5- and 7-fold, respectively. Furthermore, G-Rg$_{1}$, was also able to synergistically increase the enzyme activity by 11-fold m the cell cultures in the presence of PMA. These stimulatory effects of G-Rg$_{1}$ or PMA on the DNA synthetic activity and the PKC activity were ablished by a specific PKC inhibitor, GF109203X. These results suggest that the stimulatory effect of G-Rg$_{1}$ on the DNA synthetic activity may be partly due to stimulation of PKC-mediated signal transduction pathway leading to the proliferation of SK-HEP-1 cells.

• 대한기관식도과학회:학술대회논문집
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• 대한기관식도과학회 1993년도 제27차 학술대회 초록집
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• pp.89-89
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• 1993

후두의 상피세포에서 발생하는 질환중 전암성병변은 이형성(dysplasia)과 상피내암(carcinoma in situ)등이 있으며, 이들은 진행하게되면 침윤성 악성병변으로 전환하게 된다. 따라서 전암성 병변의 정도를 정확히 구분 및 파악함으로써 침윤성 암종으로의 전환여부를 미리 예견한다는 것은 악성 후두질환의 병태파악 및 예방에 중요한 역할을 차지한다. 이에 저자들은 최근 후두경하에 절제생검을 시행한 26례(침윤성 편평상피세포암 14례, 상피증식증 5례, 성대결절 7례)를 대상으로, 22례에서는 생검조직을 touch imprint법으로 도말하여 Feulgen염색한 후 CAS 200 화상분석기로 DNA함량분석을 시행하였고, 전례에 대하여 파라핀 포매조직에서 Ki-67 단크론성 항체(M1B1)를 이용하여 면역효소염색을 시행한 후 화상분석기로 양성표현율을 측정분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) Ki-67 양성표현율은 침윤성 암종에서 31.65$\pm$11.59%, 상피증식증에서는 20.14$\pm$3.38%, 성대결절에서는 11.66$\pm$3.02%이었다. 2) 핵산지수(DNA index)는 침윤성 암종의 경우 비배수성이 10례 중 7례(70%), 상피증식증에서는 5례중 2례(40%), 성대결절에서는 7례 모두 이배수성을 보였다. 3) DNA함량분석에서 5기와 G2/M기를 합한 증식지수(PI)는 침윤성 암종에서 23.42$\pm$11.33%, 상피증식증에서는 13.09$\pm$10.90%, 성대결절에서는 4.50$\pm$1.19%로 침윤성 암종에서 가장 높았다. 이상의 성적에서 성대의 생검조직과 같은 미세조직으로부터도 DNA함량검사와 함께 Ki-67 양성표현율을 측정함으로써 전암성병변의 악성화 가능성 정도를 예견할 수 있었으며, 악성종양 환자의 예후판정에 도움을 얻을 수 있으리라 생각된다.