Suspension culture of recombinant Chinese hamster ovary (CHO) cells producing follicle-stimulating hormone was performed to investigate the effect of glycine betaine on cell growth and FSH production at low culture temperature. At 28$^{\circ}C$, cell growth was suppressed, but cell viability remained high for a longer culture period. When the culture temperature was lowered from 37$^{\circ}C$ to 28$^{\circ}C$, more than 14-fold increase in the maximum FSH titer was achieved. In batch culture at 28$^{\circ}C$, the use of 15 mM glycine betaine (GB) to culture medium resulted in the enhancement of maximum cell density and FSH titer by 11% and 17%, respectively, compared to the culture without GB. In pseudo-perfusion culture at 28$^{\circ}C$ with the exchange of fresh medium containing 15 mM GB, a final FSH of $2,058{\mu}g$ which is approximately 1.4-fold higher as compared to the culture without GB was obtained. This enhanced FSH production with 15 mM GB was not just because of enhanced specific FSH productivity (qFSH), but mainly because of the extended culture longevity. Taken together, this result demonstrates that the application of GB at low culture temperature is feasible to enhance the production of recombinant proteins in rCHO cells.
배경: 이식폐의 보존 및 재관류 동안 cyclic adenosine monophosphate(cAMP)와 nitric oxide(NO)는 폐혈관 내 순환조절을 유지하는데 있어 중심적인 역할을 한다. 그러나 내치세포내의 cAMP와 NO 모두 허혈-재관류 과정 동안에 현저하게 감소한다. 이에 저자는 low potassium dextran(LPD) 폐조본액에 cAMP의 유사체인 dibutyry1 cAMP(db-cAMP)와 NO의 공여물질인 nitroglycerin(NTG)을 첨가하여 이들의 폐보존 효과를 알아보고, 이들은 첨가한 폐보존액 들의 효과를 비교하였다. 대상 및 방법: 토끼 폐장 분리관류 모형에 실험군은 각각 6마리씩 4개군으로 단순 LPD 페보존액만 사용한 경우(I군), LPD 용액에 NTG 만 참가한 경우(II군), cAMP 만 첨가한 겨우(III군) 그리고 두가지 모두를 첨가한 경우는 IV군으로 분류하였으며, 폐보존액이 주입된 심폐블록은 영상 1$0^{\circ}C$에서 24시간 동안 보관한 다음 100% 산소농도에서 기계호흡을 하면서 신선 정맥혈로 30분 동안 재관류를 시행하였다. 재관류폐의 평가를 위해 폐기능 및 폐부종 정도를 정량 측정하였으며, 유출로 혈액으로부터 tumor necrosis factor $\alpha$(TNF-$\alpha$)와 간접적인 NO의 총량을 알기 위해 nitrite/nitrate의 양을 측정하였다. 또한 재관류가 끝난 후 광학 및 전자현미경학적 소견을 관찰하였다. 결과: 모든 실험군 중 제 IV군 의 폐보존 능력이 가장 우수하였으나, 제 II, III, IV군 사이는 통RP적으로 유의한 차이가 없었다. 제 I군은 제 II, III, IV군들에 비해 유의하게 폐기능이 가장 나쁘고 폐부종 정도가 가장 심했다(p<0.05). 제 II군은 제 III군에 비해 더 좋은 폐기능을 보였고, 폐부종 정도가 덜 하였으나 통계적은 유의성은 없었다. TNF-$\alpha$ 는 제 IV 군이 Irns에 비해 유의하게 분비량이 적었다. (p<0.05). 총 NO의 양은 제 II군과 IV 군이 제 I 군과 III군보다 유의하게 높았으나(p<0.001), 제 II군과 IV군, 제 I군과 III군 사이 비교에서 유의한 차이는 없었다. 또한 제 I 군과 III군에서는 시간이 지남에 따라 유의하게 NO의 양이 점차 감소하였다. (p<0.05). 광학 및 전자현민경 소견상 폐포 및 폐혈관 구조가 제 II, III, IV 군이 I 군에 비해 더 잘 보존되어있었다. 결론: LPD 폐보존액에 db-cAMP 및 NTG의 첨가는 폐보존 효과가 모두 우수함을 확인하였고 이들의 폐보존 효과 차이는 거의 없음을 알수 있었다. 그렇지만 이들의 병합사용이 폐혈관 항상성을 더 잘 유지시킬 수 있고 허혈-재관류 손상을 줄여 폐보존 효과를 높일 수 있을 것이라고 기대된다.
[Purpose] The present study investigated the effect of endurance exercise with blood flow restriction (BFR) performed at either 25% maximal oxygen uptake (${\dot{V}}O_2$ max) or 40% ${\dot{V}}O_2$ max) on muscle oxygenation, energy metabolism, and endocrine responses. [Methods] Ten males were recruited in the present study. The subjects performed three trials: (1) endurance exercise at 40% ${\dot{V}}O_2$ max without BFR (NBFR40), (2) endurance exercise at 25% ${\dot{V}}O_2$ max with BFR (BFR25), and (3) endurance exercise at 40% ${\dot{V}}O_2$ max with BFR (BFR40). The exercises were performed for 15 min during which the pedaling frequency was set at 70 rpm. In BFR25 and BFR40, 2 min of pressure phase (equivalent to 160 mmHg) followed by 1 min of release phase were repeated five times (5 × 3 min) throughout 15 minutes of exercise. During exercise, muscle oxygenation and concentration of respiratory gases were measured. The blood samples were collected before exercise, immediately after 15 min of exercise, and at 15, 30, and 60 minutes after completion of exercise. [Results] Deoxygenated hemoglobin (deoxy-Hb) level during exercise was significantly higher with BFR25 and BFR40 than that with NBFR40. BFR40 showed significantly higher total-hemoglobin (total-Hb) than NBFR40 during 2 min of pressure phase. Moreover, exercise-induced lactate elevation and pH reduction were significantly augmented in BFR40, with concomitant increase in serum cortisol concentration after exercise. Carbohydrate (CHO) oxidation was significantly higher with BFR40 than that with NBFR40 and BFR25, whereas fat oxidation was lower with BFR40. [Conclusion] Deoxy-Hb and total Hb levels were significantly increased during 15 min of pedaling exercise in BFR25 and BFR40, indicating augmented local hypoxia and blood volume (blood perfusion) in the muscle. Moreover, low-and moderate-intensity exercise with BFR facilitated CHO oxidation.
Pulse oximetry is a non-invasive method for monitoring how much oxygenated hemoglobin is present in the blood. The principle of pulse oximetry is based on the red infrared light adsorption characteristics of oxygenated and deoxygenated hemoglobin. Even through the convenience of a pulse oximeter, its weak signal-to-noise ratio against motion artifacts and low perfusion makes it difficult to be accepted by execs devices. Several researchers have suggested the use of an adaptive noise cancellation (ANC) algorithm. They have demonstrated that ANC is feasible for reducing the effects of motion artifacts. Masimo Corporation developed a discrete saturation transformation (DST) algorithm that uses a reference signal and ANC. In commercial devices, it is very hard to escape it because Masimo's patents are very powerful and a better method is yet to be developed. This study proposes a new method that can measure noise saturation as well as accurate oxygen saturation from signals with high motion artifacts without using ANC and DST. The proposed algorithm can extract a normal signal without noise from a signal with motion artifacts. The reference signal from a pulse oximeter simulator was used for the evaluation of our proposed algorithm and achieved good results.
Background: Numerous studies of safe, long term preservation for lung transplantation have been performed using ex vivo models or in vivo single lung transplantation models. However, a safe preservation time which is applicable for clinical use is difficult to determine. We prepared LPDG solution for lung preservation study. In this study we examined the efficacy of LPDG(low potassium dextran glucose) solution in 24-hour lung preservation by using a sequential bilateral canine lung allotransplant model. Material and Method: Seven bilateral lung transplant procedures were performed using weight-matched pairs(24 to 25kg) of adult mongrel dogs. The donor lungs were flushed with LPDG solution and maintained hyperinflated with 100% oxygen at 1$0^{\circ}C$ for a planned ischemic time of 24 hours for the lung implanted first. After sequential bilateral lung transplantation, dogs were maintained on ventilators for 3 hours: arterial resistance were determined if the recipients hourly after bilateral reperfusion and compared with pretransplant-recipient values, which were used as controls. After 2hours of reperfusion, the chest X-ray, computed tomogram and lung perfusion scan were performed for assessmint of early graft lung function. Pathological examinations for ultrastructural findings of alveolar structure and endothelial structure of pulmonary artery were performed. Result: Five of seven experiments successfully finished the whole assessments after bilateral reperfusion for three hours. Arterial oxygen tension in the recipients was markedly decrased in immediate reperfusion period but gradually recovered after reperfusion for three hours. The pulmonary artery and pulmonary vascular resistance showed singificant elevation(p<0.05 versus control values) but also recovered after reperfusion for three hours(p<0.05 versus immediate period value). The ultrastructural findings of alveolar structure and endothelial structure of pulmonary artery showed reversible mild injury in 24 hours of lung perservation and reperfusion. Conclusion : This study suggests that LPDG solution provides excellent preservation in a canine model in which the dog is completely dependent on the function of the transplanted lung.
Although the effects of adenosine on the heart, including the clinical suppression of cardiac arrhythmias, have been recognized for more than half a century, it is only in the last decade that the therapeutic potential of adenosine has been recognized. The objective of this study was to determine if augmentation of myocardial adenosine levels during global ischemia improves functional recovery after reperfusion. We used to modified Langendonf system to evaluate myocardial protective effect. Isolated rat hearts were subjected to 90 minutes of deep hypothermic arrest(15$^{\circ}C$) with modified St. Thomas'Hospital cardioplegic solution used to provide myocardial protection. Myocardial adenosine levels were augmented during ischemia by providing exogenous adenosine in the cardioplegic solution. Two groups of hearts w re studied: (1) control group(n=10) cardioplegia alone; (2) adenosine group(n=10) adenosine(0.75mg/kg/min) added to the cardioplegic solution. Significantly better percent recovery(p<0.01) in hemodynamics(except heart rate) at 60 minutes after reperfusion was evident compared to baseline values in the adenosine group. (systolic no란ic pressure : 78.5$\pm$3.6% vs 66.6$\pm$5.9%, airtic overflow volume : 61.7$\pm$ 11.6% vs 37.2$\pm$ 15.4%, coronary flow volume 77.1$\pm$7.5% vs 57.2$\pm$ 11.1%, and cardiac output : 65.6$\pm$ 11.5% vs 44.2$\pm$ 12.4%). Heart rate was similar in two groups(94.4$\pm$4.8% vs 95.3 $\pm$ 6.8%). Adenosine groups resulted in significantly rapid recovery time of heart beat after reperEusion(p<0.01) (24.5$\pm$7.6 sec. vs 179.0$\pm$ 131.1sec.). In biochemical study, CPK levels(0.1 $\pm$0.3U/L vs 1.4$\pm$0.8U/L) and lactic acid levels(0.08$\pm$0.Immol/L vs 0.34$\pm$0.2 mmol/L) were significantly low in adenosine groups(p<0.01). We concluded that adenosine included cardioplegia have better recovery effects after r perfusion in myocardial ischemia compared to adenosine free cardioplegia.
Naringinase from Atpergillus nidulans was immobillized on DEAE-Sephadex A-25 and its characteristics were studied. The optimal conditions for the preparation of the immobilized enzyme were as follow; optimal pH, incubation time and the suitable amount of enzyme were 6.0, 30 min. and 110 units per gram of the dried ion exchage resin, respectively. The optimal pH of the immobilized enzyme was higher than that of the native enzyme. The optimal temperature increased from 4$0^{\circ}C$ to 5$0^{\circ}C$. The heat and pH stability of the immobillized enzyme were better than those of the native enzyme. No significant difference in the Michaelis constant was detected. Activation energy of the immobilized enzyme was 7.96 Kcal/mole, and the apparent Michaelis rate equation was used to describe the action of this material. The degree of hydrolysis was dependant on the flow rate at low rate of perfusion through the column. As the flow rate increased, the value of the apparent Km decreased.
Myocardial imaging in SPECT (Single Photon Emission Computed tomography) scan of the gamma-ray emitting radiopharmaceuticals to patients after intravenous radiopharmaceuticals evenly spread in the heart region of interest by recording changes in the disease caused by a computer using the PSA test is to diagnose. Containing information on the functional myocardial perfusion imaging is a useful way to examine non-invasive heart disease, but the argument by noise and low resolution of the physical landscape that is difficult to give. For this paper, the level of myocardial imaging by using the three algorithms to split the video into 3-D implementation of the partitioned area to help you read the proposed plan. To solve the difficulty of reading level, interest in using the sheet set, partitioned area of the left ventricle was ranked the partitioned area was modeled as a 3-D images.
Park Se-Cheol;Lee Jae-Sun;Lee Byung-Kyu;Kang Heui-Il
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.34
no.1
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pp.47-51
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2006
Sodium butyrate (NaBu) is used as an enhancer for the production of recombinant proteins in Chinese hamster ovary (CHO) cells. However, NaBu is well-known for its cytotoxic effect, thereby inducing apoptosis. CHO cells which had been engineered to express a humanised anti-HBV antibody were cultured using serum-free medium, Ex-cell 301. From a seeding density of $2{\times}10^5$ cells/ml, CHO cells grown with serum-free medium reached a maximum cell density of $1.3{\times}10^6$ cells/ml after 9 days in culture and produced a maximal antibody concentration of 130 mg/l after 13 days in culture. In the perfusion culture system, CHO cells producing anti-HBV antibody grown in an 7.5 1 bioreactor seeded with $2{\times}10^5$ cells/ml reached a maximal antibody concentration of 85 mg/1 after 720 h in culture. The addition of 0.3 mM NaBu and lowering culture temperature to $33^{\circ}C$ elongated the culture period to 60 days and increased the production yield by 2-fold, compared to control culture.
Moon, Su Jung;Lee, Su Ya;Na, Kyong Hee;Park, Sun Young;Kim, Eun Young;Kim, Kyoung Sim;Kim, Yong Wook
Clinical and Experimental Pediatrics
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v.46
no.3
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pp.302-307
/
2003
The long-term clinical issues in Kawasaki disease are concerned with the coronary artery lesions that result in aneurysmal formation, thrombotic occlusion, progression to ischemic heart disease, and premature atherosclerosis. We here report a 3 month old infant with Kawasaki disease complicated by giant coronary aneurysm with thrombosis. After urokinase(10,000 IU/kg) and heparin(400 IU/kg) were injected for two days as thrombolytic agents, thrombi were successfully dissolved. Even though long-term oral anticoagulation with low-dose aspirin, dipyridamole and coumadin were administered, thrombosis of the left main coronary artery was slowly increased. five years later, coronary angiography showed nearly total occlusion of the left anterior descending artery and collaterals from the right posterior branch and radionuclide scan demonstrated complete reversible perfusion defect of several portions of the left ventricle.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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