• 한국식품영양과학회지
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• 제46권3호
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• pp.306-313
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• 2017

본 연구에서는 전통적인 기능성 식품이자 의약품으로 사용되었던 자죽염(PubS)과 복분자를 조합한 복분자 자죽염(PuBS-R)을 사용해 비특이적, 선천성 면역에 중요한 역할을 하는 대식세포에서의 영향을 확인하였다. PuBS-R은 마우스 대식세포인 Raw264.7 세포에서 $1,000{\mu}g/mL$ 농도처리 시 세포의 증식을 유발하였으며, 그에 반해 PuBS를 $1,000{\mu}g/mL$ 처리 시 유의하게 세포 증식률이 억제되었다. 이어서 면역 관련 사이토카인 $TNF-{\alpha}$, $IFN-{\gamma}$, IL-12, IL-10 등을 유전자 단계와 단백질 단계에서 평가하였다. 그 결과 PuBS-R은 50, 100, $500{\mu}g/mL$에서 유의한 증가율을 보였고, 무엇보다 이것은 PuBS 군에 비해서도 월등한 증가율을 확인할 수 있었다. 마지막으로 마우스의 복강에서 분리한 peritoneal macrophage에 PuBS-R을 처리 후 $TNF-{\alpha}$, $IFN-{\gamma}$, IL-12, IL-10, iNOs를 단백질 단계에서 평가한 결과, Raw264.7 세포에서 얻은 결과와 동일한 결과를 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 미루어 보아 PuBS-R은 인체의 대식세포 활성의 증가를 통해 비특이적, 선천성 면역력을 증가시킬 것으로 판단되며, 이러한 결과를 바탕으로 추후 실험동물을 이용한 in vivo 후속 연구를 통해 PuBS-R의 면역증강 기능성 식품 개발이 가능할 것으로 생각된다.

• 한국식품과학회지
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• 제43권1호
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• pp.65-71
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• 2011

등골나물(Eupatorium japonicum)은 식용으로 이용되어온 식물이지만 생리활성에 대한 연구가 없었다. 따라서 본 연구진은 등골나물 에탄올추출물이 쥐 대식세포인 Raw264.7 세포에 LPS로 유도된 염증 반응에 미치는 영향에 대하여 연구를 수행하였다. 등골나물 꽃 부분에 70% 에탄올을 가하여 얻은 등골나물 에탄올추출물(EJE)을 Raw264.7 세포에 LPS와 함께 0, 1, 2.5, 5, 10 mg/L로 처리하여 세포를 배양하였다. LPS에 의해 생성된 NO 및 $PGE_2$ 분비는 EJE를 처리함에 따라 감소하였고 이 결과는 EJE의 독성에 의한 것이 아님이 증명되었다. Raw264.7 세포에 LPS에 의해 생성된 iNOS, COX-2의 단백질과 mRNA의 발현이 EJE의 농도 의존적으로 억제되었으며, 염증 반응시 생성되는 IL-6, IL-${\beta}$, TNF-${\alpha}$의 mRNA 발현도 등골나물 추출물에 의해 현저히 억제되었다. 더욱이 EJE의 분획물 중 EA와 MC 분획물이 독성이 적으면서 효과적으로 NO의 생성을 억제하는 것으로 나타났다. NO 생성 억제효과가 뛰어난 이들 분획물 내의 생리활성 물질에 대한 연구가 추가적으로 수행되어야 한다고 사료된다. 등골나물 꽃을 추출물로 항염증효과를 연구한 논문이 없고 다른 식용 가능한 천연재료들의 항염증효과와 비교하여(data not shown) EJE 분획물의 항염증효과가 낮은 농도에서 탁월한 점을 미루어 볼 때, 등골나물 추출물은 상당히 낮은 농도에서 뛰어난 항염증 물질을 가진 단일물질을 포함할 가능성이 높다고 사료된다. 따라서 위의 결과는 등골나물 추출물이 독성과 부작용이 적은 염증 치료제로 활용될 수 있는 가능성이 높음을 제시한다.

• 생명과학회지
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• 제26권3호
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• pp.338-345
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• 2016

본 연구에서는 병꽃나무 꽃 추출물의 항산화 효과 및 LPS로 자극된 RAW 264.7 대식세포에서 항염증 효과를 조사하였다. 병꽃나무 꽃 추출물의 총 폴리페놀과 플라보노이드 함량을 측정한 결과 총 폴리페놀 함량과 플라보노이 함량은 각각 719.19±0.04 μg/ml, 644.87±0.02 μg/ml로 나타났다. 항산화 활성을 확인하기 위하여 DPPH 라디칼과 superoxide 음이온 라디칼 소거 활성을 측정한 결과 투여 농도 의존적으로 항산화 활성이 증가하는 것으로 나타났다. 또한 항염증 활성을 확인하기 위하여 염증 매개물질인 NO와 inflammatory cytokine인 IL-6와 TNF-α의 생성량을 측정하였다. 그 결과 NO와 IL-6의 생성을 투여농도 의존적으로 저해하였지만, TNF-α의 경우 병꽃나무 꽃 추출물의 농도가 20 μg/ml 이하에서는 TNF-α의 생성을 억제하지 않았고 100 μg/ml 이상에서는 오히려 분비를 유도하는 것으로 나타났다. 또한, 병꽃나무 꽃 추출물의 염증반응과 관련된 iNOS 발현과 MAPK 및 NF-κB의 활성에 미치는 영향을 측정한 결과 iNOS는 농도 유의적으로 그 발현이 감소되었으며, MAPK의 발현 및 인산화에는 별다른 영향을 미치지 못하는 것으로 나타났다. 반면에 IκB의 인산화를 효과적으로 감소시켜 NF-κB의 활성을 억제하여 항염증 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로부터 병꽃나무 꽃 추출물은 항산화 및 항염증 활성이 우수한 기능성 소재로 활용이 가능할 것으로 사료된다.

• Toxicological Research
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• 제34권1호
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• pp.65-73
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• 2018

Pretreatment of low-dose lipopolysaccharide (LPS) induces a hyporesponsive state to subsequent secondary challenge with high-dose LPS in innate immune cells, whereas super-low-dose LPS results in augmented expression of pro-inflammatory cytokines. However, little is known about the difference between super-low-dose and low-dose LPS pretreatments on immune cell-mediated inflammatory and hepatic acute-phase responses to secondary LPS. In the present study, RAW 264.7 cells, EL4 cells, and Hepa-1c1c7 cells were pretreated with super-low-dose LPS (SL-LPS: 50 pg/mL) or low-dose LPS (L-LPS: 50 ng/mL) in fresh complete medium once a day for 2~3 days and then cultured in fresh complete medium for 24 hr or 48 hr in the presence or absence of LPS ($1{\sim}10{\mu}g/mL$) or concanavalin A (Con A). SL-LPS pretreatment strongly enhanced the LPS-induced production of tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$, interleukin (IL)-6, TNF-${\alpha}$/IL-10, prostaglandin E2 ($PGE_2$), and nitric oxide (NO) by RAW 264.7 cells compared to the control, whereas L-LPS increased IL-6 and NO production only. SL-LPS strongly augmented the Con A-induced ratios of interferon (IFN)-${\gamma}$/IL-10 in EL4 cells but decreased the LPS-induced ratios of IFN-${\gamma}$/IL-10 compared to the control, while L-LPS decreased the Con A- and LPS-induced ratios of IFN-${\gamma}$/IL-10. SL-LPS enhanced the LPS-induced production of IL-6 by Hepa1c1c-7 cells compared to the control, while L-LPS increased IL-6 but decreased IL-$1{\beta}$ and C reactive protein (CRP) levels. SL-LPS pretreatment strongly enhanced the LPS-induced production of TNF-${\alpha}$, IL-6, IL-10, $PGE_2$, and NO in RAW 264.7 cells, and the IL-6, IL-$1{\beta}$, and CRP levels in Hepa1c1c-7 cells, as well as the ratios of IFN-${\gamma}$/IL-10 in LPS- and Con A-stimulated EL4 cells compared to L-LPS. These findings suggest that pre-conditioning of SL-LPS may contribute to the mortality to secondary infection in sepsis rather than pre-conditioning of L-LPS.

• 대한한의학방제학회지
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• 제18권1호
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• pp.87-94
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• 2010

Objectives : To provide the information of efficacy for Sagunja-tang (Sijunzi-tang; SG), it was evaluated the anti-inflammatory effect. SG, a widely used herbal formula in tranditional Korean medicine, has been used to treat for the Boki-invigorating. In many studies, plant-derived anti-inflammatory efficacies have been investigated for their potential inhibitory effects on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated macrophages. This study was performed to examine the anti-inflammatory effects of SG extract on LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Methods : The productions of nitric oxide (NO), prostaglandin (PG)$E_2$, interleukin (IL)-6 and tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$ were examined in a macrophage cell line, RAW 264.7 cells, in the presence of the SG extract. RAW 264.7 cells were incubated with LPS $1\;{\mu}g/mL$ and SG extract for 18 hours. The anti-inflammatory activity of SG was investigated by carrageenin-induced paw edema in rats. The paw volume was measured at 0, 2 and 4 hours following carrageenin-induced paw edema in rats. Results : SG extract showed inhibitory effect on $PGE_2$, IL-6 and TNF-$\alpha$ by LPS-stimulated RAW 264.7 cells. But SG extract was not inhibitory effect on NO by LPS-stimulated RAW 264.7 cells. And administration of SG extract (1 g/kg) showed a reduction in carrageenin-induced paw edema on rats. Conclusions : These results suggest that SG extract has anti-inflammatory activities in vitro and in vivo models.

• 한방안이비인후피부과학회지
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• 제22권2호
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• pp.92-103
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• 2009

Objectives : The present study was examined to evaluate the anti-inflammatory effects of the Humulus japonicus MeOH extracts (HJE) in vivo. Methods : The effects of HJE on anti-inflammation were measured by production of NO, iNOS (inducible Nitric Oxide Synthase), COX-2, I$\kappa$B$\alpha$ (Inhibitor kappa B alpha), NF$\kappa$B (Nuclear Factor kappa B), TNF-$\alpha$ (Tumor Necrosis Factor-alpha) and IL-1$\beta$ (Interleukin-1$\beta$), IL-6 in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. Results : 1. All concentrations of HJE(0.03 and 0.10 mg/ml) had no significant cytotoxicity in Raw 264.7 cell during the entire experimental period. 2. The level of NO and iNOS in culture medium was dramatically increased by LPS application. However, these increases were dose-dependently(0.03 and 0.10 mg/ml) attenuated by treatment with HJE. 3. HJE extract reduced PGE2 levels in a dose-dependent manner as a consequence of inhibition of COX-2 protein expression in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. 4. 0.10 mg/ml HJE significantly inhibited the phosphorylation of I$\kappa$B$\alpha$ indicating the suppression of NF-$\kappa$B pathway in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. 5. 0.10 mg/ml HJE significantly inhibited the production of TNF-$\alpha$ in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. 6. All concentrations of HJE significantly inhibited the production of IL-1$\beta$, IL-6 in Raw 264.7 macrophage cells stimulated with LPS. Conclusions : These results provide evidences that therapeutic effect of HJE on heat syndrome, especially due to the acute inflammation, are partly due to the reduction of some of inflammatory factors by inhibiting iNOS and COX-2 through the suppression of p-I$\kappa$B$\alpha$. Moreover, it suggests that the mechanism of action of HJE comes from the suppression of inflammatory mediators, such as NO, PGE$_2$ and pro-inflammatory cytokines.

• 대한의생명과학회지
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• 제14권3호
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• pp.147-155
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• 2008

In previous works, we found that solvent extract of Opuntia humifusa Raf., a member of the lactaceae family, displayed potent anti-oxidative and anti-inflammatory activities. Thus, all solvent fractions, except for the water layer, showed potent scavenging effects. According to activity-guided fractionation, one of active radical scavenging principles in the ethyl acetate fraction was found to be taxifolin. In this study, we investigated whether taxifolin showed anti-oxidative activity. In addition, taxifolin modulated nitric oxide (NO) release and the expression of pro-inflammatory cytokine mRNA such as interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$), IL-6, granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), and TNF-${\alpha}$. Taxifolin showed potent anti-oxidant activity with the $IC_{50}\;of\;8.5{\pm}1.4\;and\;9.3{\pm}1.0{\mu}M$ using xanthine/xanthine oxidase (XO) assay and 2,2-Diphenyl-lpicrylhydrazyl radical (DPPH) assay, respectively. We next determined the role of taxifolin on the immunomodulating activity using murine macrophage cell line RAW264.7 cells. Taxifolin dose-dependently inhibited NO production in lipopolysaccharide (LPS)-activated RAW264.7. It also significantly blocked the expression of inducible NO synthase (iNOS) mRNA in the LPS-stimulated RAW264.7 cells. In addition, taxifolin potently suppressed the expression of IL-$1{\beta}$, IL-6 and GM-CSF mRNA in LPS-activated RAW264.7 cells, but not that of TNF-${\alpha}$ Moreover, taxifolin significantly inhibited the transcriptional activity of nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) and activator protein -1 (AP-1). These results suggest that taxifolin may downregulate inflammatory iNOS, IL-$1{\beta}$, IL-6 and GM-CSF gene expressions through inhibition of NF-K and AP-1 activation in LPS-stimulated RAW264.7 cells.

• 한국식품과학회지
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• 제49권3호
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• pp.343-348
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• 2017

상백피 및 상지 에탄올 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위하여 RAW 264.7 세포를 사용하여 시험하였다. 상백피, 상지 추출물의 활성산소종, 산화질소(II), 프로스타글란딘 $E_2$, 인터류킨-6, 종양괴사인자-${\alpha}$ 등의 생성능과 COX-2, iNOS mRNA 발현을 확인하였다. 산화질소(II) 생성량은 두 추출물 모두 유의하게 비슷한 정도로 감소시켰으나, 활성산소종 생성에서는 상백피 추출물이 상지 추출물 보다 억제 효과가 높게 나타났다. 프로스타글란딘 $E_2$와 인터류킨-6 생성에서는 상지 추출물의 억제 효과가 강하게 나타났으며, COX-2와 iNOS mRNA 발현량 또한 상지 추출물의 상백피에 비해 유의하게 감소시킴을 확인하였다. 본 연구에서 확인한 결과로 상백피, 상지 추출물 모두 염증 매개인자 발현 억제를 통해 항염증 효과를 가짐을 알 수 있었으며, 상지 추출물이 상백피 추출물 보다 염증 완화 효과가 강한 것으로 나타났다. 향후에는 상백피 및 상지 추출물의 주요 활성 성분들의 차이와, 염증완화 메커니즘을 통한 관련 질환에 효과가 있는지 정확한 작용메커니즘 확인 등의 분석실험이 필요할 것으로 생각된다.

• 대한본초학회지
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• 제23권3호
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• pp.127-134
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• 2008

Objectives : The present study was designed to investigate whether Ostericum koreanum (OK) could regulate lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory response in vitro and in vivo. Methods : To evaluate of anti-inflammatory effect of OK, we examined Nitric oxide (NO), proinflammatory cytokines production in LPS-stimulated RAW264.7 cells. Furthermore, we checked molecular mechanism especially in the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and the degradation of inhibitory kappa B a ($Ik-B{\alpha}$) using western blot and also investigated survival of mice in LPS-mediated endotoxin shock. Results : 1. Extract from OK itself have weak cytotoxic effect on RAW264.7 cells. Extract from OK inhibited LPS-induced NO, tumor necrosis $factor-{\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$), interleukin $(IL)-1{\beta}$, IL-6 and IL-10 production in RAW264.7 cells. 2. OK inhibited the phosphorylation of MAPKs, such as p38, extracelluar signal-regulated kinase (ERK1/2) and c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) and also the degradation of $I{\kappa}-B{\alpha}$ in the LPS-stimulated RAW264.7 cells 3. OK did not inhibit LPS-induced endotoxin shock. Conclusions : OK down-regulated LPS-induced NO and cytokines production through suppressing activation of MAPKs and degradation of $I{\kappa}-B{\alpha}$. Our results suggested that OK may be a beneficial drug against inflammatory diseases.

• 한국식품영양과학회지
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• 제41권9호
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• pp.1242-1247
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• 2012

본 연구를 통하여 청시닥나무의 에탄올 추출물은 쥐 대식세포인 Raw264.7 세포에 LPS로 유도된 염증반응에 미치는 효과가 있음을 확인하였다. 청시닥나무 목질부와 수피부에 에탄올을 가하여 추출한 뒤 그 추출물과 분획물의 NO 생성능 및 세포증식능을 실험한 결과 수피부의 EtOAc 분획이 세포증식능에 영향을 주지 않으면서 NO의 생성을 억제함을 확인하였다. 청시닥나무 수피부 에탄올 추출물 EtOAc 분획(EFEBA)은 Raw264.7 세포에서 LPS에 의해 생성된 NO의 분비와 iNOS의 단백질 및 mRNA의 발현을 농도 의존적으로 감소시켰고, 염증 반응 시 생성되는 IL-6, IL-$1{\beta}$ 그리고 TNF-${\alpha}$의 mRNA의 발현도 현저히 감소시켰다. 또한 $I{\kappa}B{\alpha}$의 degradation을 감소시키고 p65의 인산화를 감소시켜 NF-${\kappa}B$ signaling을 통해 염증작용을 조절함을 확인하였다.