Shrestha Bhushan;Kim Ho Kyung;Sung Gi Ho;Spatafora Joseph W.;Sung Jae Mo
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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v.9
no.6
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pp.440-446
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2004
Interest in in vitro study of entomopathogenic fungi, including Cordyceps species, has been increasing due to their valuable bioactive compounds and biocontrol effects. Among Cordyceps species, in vitro stromata of C militaris has been successfully produced and cultivated for industrial purposes. However, genetic study on in vitro stromata formation of C militaris has not been carried out yet. Here, relationship between mating system and perithecial stromata formation of C militaris is reported. Mating system was determined by observing perithecial stromata formation from mono-ascospore cultures and their pair-wise combinations. Certain combinations of mono-ascospore strains produced perithecial club-shaped stromata, whereas other combinations produced either no stromata or only abnormal non-perithecial stromata. Similarly, monoascospore cultures without combination produced either no stromata or only abnormal nonperithecial stromata. Despite obvious heterothallism, self-fertility was occasionally observed in few strains of C militaris. These observations indicated that C militaris behaves as a bipolar heterothallic fungus and requires two mating compatible strains in order to produce regular clubshaped perithecial stromata, a fundamental requirement for its industrial cultivation.
Polymerase chain reaction (PCR) is well established as an indispensable tool of molecular biology; and yet a limitation for cloning applications continues to be that products often require subsequent restriction to be that products often require subsequent restriction digests, blunt-end ligation, or the use of special linear vectors. Here a rapid, PCR-based system is described for the simple, restriction enzyme-free generation of synthetic, 'restriction-like' DNA fragments with staggered ends. Any 3'- or 5'-protruding terminus, but also non-palindromic overhangs with an unrestricted single strand length are specifically created. With longer overhangs, "Restriction-PCR" does not even require a ligation step prior to transformation. Thereby the technique presents a powerful tool e.g. for a successive, authentic reconstitution of sub-fragments of long genes with no need to manipulate the sequence or to introduce restriction sites. Since restriction enzyme-free and thereby devoid the limitations of partial DNA digests, "Restriction-PCR" allows a straight one-step generation and cloning of difficult DNA fragments that internally carry additional sites for specific sequence insertions or deletions can be precisely engineered into genes of interest. With these properties "Restriction-PCR" has the potential to add significant speed and versatility to a wide variety of DNA cloning applications.
The role of phospholipase D (PLD) in cancer development and management has been a major area of interest for researchers. The purpose of this mini-review is to explore PLD and its distinct role during chemotherapy including anti-apoptotic function. PLD is an enzyme that belongs to the phospholipase super family and is found in a broad range of organisms such as viruses, yeast, bacteria, animals, and plants. The function and activity of PLD are widely dependent on and regulated by neurotransmitters, hormones, small monomeric GTPases, and lipids. A growing body of research has shown that PLD activity is significantly increased in cancer tissues and cells, indicating that it plays a critical role in signal transduction, cell proliferation, and anti-apoptotic processes. In addition, recent studies show that PLD is a downstream transcriptional target of proteins that contribute to inflammation and carcinogenesis such as Sp1, $NF{\kappa}B$, TCF4, ATF-2, NFATc2, and EWS-Fli. Thus, compounds that inhibit expression or activity of PLD in cells can be potentially useful in reducing inflammation and sensitizing resistant cancers during chemotherapy.
A cDNA, encoding the human growth hormone (hGH), was synthesized based on the known 191 amino acid sequence. Its codon usage was optimized for a high level expression in Escherichia coli. Unique restriction sites were incorporated throughout the gene to facilitate mutagenesis in further studies. To minimize an initiation translation problem, a 624-bp cassette that contained a ribosome binding site and a start codon were fused to the hGH-coding sequence that was flanked between the EcoRI and HindIII sites. The whole fragment was synthesized by an overlapped extension of eight long synthetic oligonucleotides. The four-short duplexes of DNA, which were first formed by annealing and filling-in with a Klenow fragment, were assembled to form a complete hGH gene. The hGH was cloned and expressed successfully using a pET17b plasmid that contained the T7 promoter. Recombinant hGH yielded as much as 20% of the total cellular proteins. However, the majority of the protein was in the form of insoluble inclusion bodies. N-terminal amino acid sequencing also showed that the hGH produced in E. coli contained formyl-methionine. This study provides a useful model for synthesis of the gene of interest and production of recombinant proteins in E. coli.
Kim, Sunhong;Kim, Jeong-Hoon;Park, Bi Oh;Kwak, Young Shin
BMB Reports
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v.47
no.3
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pp.173-178
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2014
There is rapidly growing interest in the human microbiome because of its implication in metabolic disorders and inflammatory diseases. Consequently, understanding the biology of short chain fatty acids and their receptors has become very important for identifying novel therapeutic avenues. GPR41 and GPR43 have been recognized as the cognate receptors for SCFAs and their roles in metabolism and inflammation have drawn much attention in recent years. GPR43 is highly expressed on immune cells and has been suggested to play a role in inflammatory diseases such as inflammatory bowel disease. Both GPR41 and GPR43 have been implicated in diabetes and obesity via the regulation of adipose tissue and gastrointestinal hormones. So far, many studies have provided contradictory results, and therefore further research is required to validate these receptors as drug targets. We will also discuss the synthetic modulators of GPR41 and GPR43 that are critical to understanding the functions of these receptors.
Traditionally, the larvae of Allomyrina dichotoma (AD), a species of the rhinoceros beetle, have been widely used for their antidiabetic, antihepatofibrotic, antineoplastic, and antiobesity effects. The United Nations' Food and Agriculture Organization has reported on the possibility of using edible insects in human dietary supplements in the future. However, despite the growing interest in insect-based bio-active products, the biological activities of these products have rarely been studied. Previously, we reported that AD larvae inhibit the in vitro differentiation of adipocytes via transcription factor downregulation. In this study, our objective was to evaluate the effects of a hot-water extract of AD larvae on allergy and inflammation. To investigate the inhibitory effect of the extract on allergic reactions, we measured the levels of ${\beta}-hexosaminidase$, tumor necrosis $factor-{\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$), interleukin-4 (IL-4), and cyclooxygenase-2 (COX-2) after activation of RBL-2H3 cells using Compound 48/80. In addition, the inhibitory effect of the extract on inflammation was determined using Raw 264.7 cells after lipopolysaccharide (LPS) stimulation. The extract significantly inhibited the ${\beta}-hexosaminidase$, $TNF-{\alpha}$, IL-4, and COX-2 levels in RBL-2H3 cells. Furthermore, it effectively inhibited the inflammatory cytokine IL-6, nitric oxide, and inducible nitric oxide synthase expression in LPS-stimulated Raw 264.7 cells. These results suggest that AD larval extract can be potentially developed as an antiallergic and anti-inflammatory therapeutic agent.
This study examined the effects of SSI argumentation program on the preservice biology teachers' decision-making types and communication ability. The SSI argumentation program was developed based on 'Social Decision-Making & Problem-Solving strategy' and Toulmin's argumentation pattern. The preservice teachers had opportunities of SSI argumentation through small group discussions. They were asked to identify the issues regarding SSI, think of solutions, and make a decision along with claims, warrants, data, and rebuttals. The preservice biology teachers experienced four SSI topics of abortion, euthanasia, gene manipulation, artificial intelligence. The results indicated that the preservice biology teachers significantly improved the communication ability after the intervention, but they did not change their types of decision-making. In addition, after the intervention, the Pearson correlation results indicated that 'the logical type' of decision-making significantly relates to the communication ability(p<.01). The preservice biology teachers mentioned that they improved their ability of considering warrants, data, background information, context, and rebuttals. Further, the preserivce biology teachers mentioned that they became take an interest in socioscientific issues and improved their ability of accepting criticism from others as well as caring about others when they argue each other. This study implicated that the SSI argumentation program has effects on improving personality education in school science.
Mao, W.H.;Albrecht, E.;Teuscher, F.;Yang, Q.;Zhao, R.Q.;Wegner, J.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.21
no.5
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pp.640-647
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2008
Breed differences in adult animals are determined during fetal development. If interventions are to be developed that influence growth of muscle and fat, it is important to know at which time during gestation breed differences appear and are fixed. The objective of this study was to characterize fetal development in cattle of different breeds. Pregnant cows of 4 cattle breeds with different growth impetus and muscularity were slaughtered under normal processing conditions and the fetuses were removed. German Angus, a typical beef cattle; Galloway, a smaller, environmentally resistant beef type; Holstein Friesian, a dairy type; and Belgian Blue, an extreme type for muscle growth were used. Fetuses of each breed were investigated at 3, 6, and 9 mo of gestation. Fetuses were weighed and dissected into carcass, organs, and muscles. Body fat weight was obtained using the Soxhlet extraction method. Fetal weight increased most rapidly in the third trimester of gestation mainly due to the accelerated muscle and fat deposition. The organ weight to body weight (BW) ratios decreased and the muscle and fat weight to BW ratios increased. At 3 mo of gestation, Galloway fetuses had the significantly smallest BW, half-carcass weight, leg weight, organ weight, muscle weight and shortest leg length. In contrast, Holstein fetuses had the significantly greatest BW, liver, kidney, and lung weights and significantly longest leg length among the 4 breeds, but no differences between Holstein Friesian and Belgian Blue were detected in half-carcass and leg weight. Indeed, Belgian Blue fetuses had the significantly greatest half-carcass weight, leg weight, and muscle weight at 9 mo of gestation, and Galloway had a significantly greater body fat to BW ratio than Holstein Friesian and Belgian Blue. These differences were not evident at 3 and 6 mo of gestation. These data show that the profound increase of tissue and organ weights occurred in later gestation in cattle fetuses even though breed differences were evident as early as 3 mo of gestation. Depending on the tissue of interest, impacting fetal growth likely needs to occur early in gestation before the appearance of breed-specific differences.
The convergence of molecular and genetic disciplines with non-invasive imaging technologies has provided an opportunity for earlier detection of disease processes which begin with molecular and cellular abnormalities. This emerging field, known as molecular imaging, is a relatively new discipline that has been rapidly developed over the past decade. It endeavors to construct a visual representation, characterization, and quantification of biological processes at the molecular and cellular level within living organisms. One of the goals of molecular imaging is to translate our expanding knowledge of molecular biology and genomic sciences into good patient care. The practice of molecular imaging is still largely experimental, and only limited clinical success has been achieved. However, it is anticipated that molecular imaging will move increasingly out of the research laboratory and into the clinic over the next decade. Non-invasive in vivo molecular imaging makes use of nuclear, magnetic resonance, and in vivo optical imaging systems. Recently, an interest in Positron Emission Tomography (PET) has been revived, and along with optical imaging systems PET is assuming new, important roles in molecular genetic imaging studies. Current PET molecular imaging strategies mostly rely on the detection of probe accumulation directly related to the physiology or the level of reporter gene expression. PET imaging of both endogenous and exogenous gene expression can be achieved in animals using reporter constructs and radio-labeled probes. As increasing numbers of genetic markers become available for imaging targets, it is anticipated that a better understanding of genomics will contribute to the advancement of the molecular genetic imaging field. In this report, the principles of non-invasive molecular genetic imaging, its applications and future directions are discussed.
There is growing interest in the production of microalgae-based, high-value by-products as an emerging green biotechnology. However, a cultivation platform for Oocystis sp. has yet to be established. We therefore examined the effects of bacterial culture additions on the growth and production of valuable compounds of the microalgal strain Oocystis sp. KNUA044, isolated from a locally adapted region in Korea. The strain grew only in the presence of a clear supernatant of Sphingomonas sp. KNU100 culture solution and generated 28.57 mg/l/d of biomass productivity. Protein content (43.9 wt%) was approximately two-fold higher than carbohydrate content (29.4 wt%) and lipid content (13.9 wt%). Oocystis sp. KNUA044 produced the monosaccharide fucose (33 ㎍/mg and 0.94 mg/l/d), reported here for the first time. Fatty acid profiling showed high accumulation (over 60%) of polyunsaturated fatty acids (PUFAs) compared to saturated (29.4%) and monounsaturated fatty acids (9.9%) under the same culture conditions. Of these PUFAs, the algal strain produced the highest concentration of linolenic acid (C18:3 ω3; 40.2%) in the omega-3 family and generated eicosapentaenoic acid (C20:5 ω3; 6.0%), also known as EPA. Based on these results, we suggest that the application of Sphingomonas sp. KNU100 for strain-dependent cultivation of Oocystis sp. KNUA044 holds future promise as a bioprocess capable of increasing algal biomass and high-value bioactive by-products, including fucose and PUFAs such as linolenic acid and EPA.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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