A total of 35 phosphate solubilizing bacterial strains were isolated from waste mushroom bed of Agaricus bisporus in Buyeo-Gun, Chungnam and screened for the production of indole acetic acid (IAA). The best IAA producing strain was identified as Pantoea rodasii using 16S rRNA analysis. In addition to the IAA production, this strain could act as an efficient phosphate solubilizer (1100 ${\mu}g$$ml^{-1}$ after 5 days of incubation) also. The selected strain was cultured under different conditions in order to assess the optimum conditions for maximum IAA production. The nutrient broth (NB) medium was recorded as the best medium, where the maximum IAA production (229 ${\mu}g$$ml^{-1}$) was recorded at the start of stationary phase (12 hours after inoculation) of the bacteria growth. The performance of the strain was found to be maximum at the temperature of $30^{\circ}C$ followed by $25^{\circ}C$. IAA production was found to be increased with increasing tryptophan concentration (from 0.1 to 0.6%), however beyond this limit, a slight reduction in IAA production was observed. The strains' ability to produce IAA was further confirmed by extraction of crude IAA and subsequent TLC analysis. A specific spot from the extracted IAA preparation was found corresponding with the standard spot of IAA with same $R_f$ value. The results of HPLC analysis conducted in identifying and quantifying the IAA production more precisely, are in agreement with the results of the assessment done with colorimetric method. As revealed by the results of the pot experiment, the isolated strain could significantly enhance the growth (as measured by shoot and root growth) of mung bean plants compared to that of non-inoculated plants. Therefore it can be concluded that the present strain, Pantoea rodasii has great potential to be used as bio-inoculants.
Photosynthetic purple nonsulfur bacterial strains were isolated from the sediments collected from rice paddy fields and sludges of wastewater treatment plant, and their plant growth promoting capabilities were examined. Most well known phytohormones, auxin such as indole-3-acetic acid (IAA) and indole-3-butyric acid (IBA) and 5'-aminolevulinic acid (ALA) were detected by HPLC in the culture broth of these isolates. Among the isolated bacteria, Rhodopseudomonas faecalis D15 showed the highest production rate of 769.8 ${\mu}g$/mg protein of IAA, 1323 ${\mu}g$/mg protein of IBA and 7.4 mM/mg protein of ALA in the modified Biebl and Pfennig's medium. R. faecalis C9 showed the highest production rate of 20.82 ${\mu}g$/mg protein of gibberellin. In consequence, the root length and dry weight of the germinated tomato seedling treated with R. faecalis isolates were longer and heavier than those of uninoculated control after 15 days of incubation in the soil. Especially, the dry weight of germinated tomato seedling increased by 119.4% in C9-treated samples after 15 days. These purple nonsulfur bacteria may be utilized as environment-friendly biofertilizer in the agriculture.
콩으로부터 분리한 140균주의 근류균은 25균주(17.9%)가 Rhizobium fredii로 115 균주(82.1%)가 Brady-rhizobium japonicum으로 동정되었다. R. fredii에 속하는 분리 균주의 생존 pH 범위는 4..5∼9.0이었고 B. japonicum의 생육 pH 범위는 5.5∼8.0로 비교적 좁게 나타났다. B. japonicum에 속하는 98균주 중에서는 53균주(54%)가 IAA를 생산하지 않는 GT I group으로, 45균주(46%)는 IAA를 생산하는 GT II group으로 명확하게 구분되었으며, 항생물질에 대한 내성 유무에 의해 10개의 group으로 구분되었다.
3-weeks old Commelina was transferred to and grown in Hoagland solution (($\pm 100 \mu M \;Cd^{2+}, 100 \mu M \;Cd^{2+}+10 \mu M\;IAA,100 \mu M\; Cd^{2+}+100 \mu M \; IAA,100 \mu M \; Cd^{2+} +1 \mu M \; IAA)$) for three weeks and then a number of physiological activities was investigated. In the control the length of stem was increased to 7 cm after 3 weeks, but in the treatment of $Cd^{2+}$, 2.0 cm was grown. In cases of IAA with $Cd^{2+}$, the growth of the plants was increased to 3.7 cm, 5.0 cm and 3.3 cm in 100 $\mu$M, 10 $\mu$M and 1 mM IAA respectively, Cadmium stimulated stomatal opening. The stomata, treated with $Cd^{2+}$ opened to n degree of about 6.1 $\mu\textrm{m}$, but the stomata, treated with no cadmium opened to 4.5 $\mu\textrm{m}$. In the treatment of various concentation of IAA with cadmium the stomata opend to about 1 $\mu\textrm{m}$ more than that of cadmium alone. Cadmium reduced total chlorophyll content up to 13% for 3 weeks. In the treatment of $Cd^{2+}$ + IAA (10 $\mu$M and 100 $\mu$M) the clear change of total chlorophyll content was not observed, but in the addition of 1 mM IAA to $Cd^{2+}$ reduced the total chlorophyll content to about 9%. $Cd^{2+}$ reduced to 9% and 11% of Fv/Fm after two and three weeks respectively. In cases of IAA with $Cd^{2+}$, there were no clear changes of Fv/Fm. Cadmium reduced water potential to 67% after 3 weeks incubation, but in cases of IAA with $Cd^{2+}$, water potential was not clearly changed. Therefore, it could be concluded that the treatment of IAA showed clear alleviation of $Cd^{2+}$-induced several physiological toxicities.
Adventitious multiple shoots were developed from leaf, petiole and internode explants of Geophila reniformis D. Don. on MS medium supplemented with various concentrations of $N^6$-benzylaminopurine (BAP) or Kinetin (KIN) alone or in combination with indole-3-acetic acid (IAA). Leaf showed maximum organogenetic potential, followed by petiole and internode. Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 22.22 $\mu{M}$ BAP and 4.57 $\mu{M}$ IAA induced maximum shoot buds from leaf explants. Internodal segments showed low potential of direct organogenesis. The regenerated shoots rooted the best in presence of 10.75 - 13.44 $\mu{M}$$\alpha$-naphthalene acetic acid (NAA) along with 2.22 $\mu{M}$ BAP, and were successfully established in the field with a survival rate of 89.11%.
Bong, Ki Moon;Kim, Jong Min;Yoo, Jae-Hong;Park, In Chul;Lee, Chul Won;Kim, Pyoung Il
KSBB Journal
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v.31
no.3
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pp.158-164
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2016
Plant growth promoting (PGP) hormones, which are produced in a small quantity by bacteria, affect in plant growth and development. PGPs play an important role on the crop productivity in agricultural field. In this study, a photosynthetic bacterial strain producing the PGP was isolated from paddy soil. Bacterial isolate was gram negative, rod-shaped and motility positive. From the 16s rRNA gene sequence analysis, the isolate was identified as Rhodobacter capsulatus PS-2. The mass cultivation of R. capsulatus PS-2 was optimized by considering of the carbon, nitrogen and inorganic salt sources. Optimal medium composition was determined as Na-succinate 4.5 g, yeast extract 5 g, $K_2HPO_4$ 1 g, $MgSO_4$ 5 g, per liter. From the result of 500 L fermentation for 2 days using the optimal medium, the viable cells were $8.7{\times}10^9cfu/mL$. R. capsulatus PS-2 strain produced the carotenoid and indole-3-acetic acid (IAA). The carotenoid extraction and quantitative analysis were performed by HCl-assisting method. Total carotenoid contents from R. capsulatus PS-2 culture broth were measured as $7.02{\pm}0.04$ and $6.93{\pm}0.05mg/L$ under photoheterotrophic and chemoheterotrophic conditions, respectively. To measure the productivity of IAA, colorimetric method was employed using Salkowski reagent at optical density 535 nm. The results showed that the highest content of IAA was $197.44{\pm}5.92mg/L$ in the optimal medium supplemented with 0.3% tryptophan.
Jung, Yu Jin;Nogoy, Franz Marielle;Cho, Yong-Gu;Kang, Kwon Kyoo
Journal of Plant Biotechnology
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v.42
no.3
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pp.186-195
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2015
Anthranilate synthase (AS) is a key enzyme in the biosynthesis of tryptophan (Trp), which is the precursor of bioactive metabolites like indole-3-acetic acid and other indole alkaloids. Alpha anthranilate synthase 2 (OsASA2) plays a critical role in the feedback inhibition of tryptophan biosynthesis. In this study, two vectors with single (F124V) and double (S126F/L530D) point mutations of the OsASA2 gene for feedback-insensitive ${\alpha}$ subunit of rice anthranilate synthase were constructed and transformed into wildtype Dongjinbyeo by Agrobacterium-mediated transformation. Transgenic single and double mutant lines were selected as a single copy using TaqMan PCR utilized nos gene probe. To select intergenic lines, the flanking sequence of RB or LB was digested with a BfaI enzyme. Four intergenic lines were selected using a flanking sequence tagged (FST) analysis. Expression in rice (Oryza sativa L.) of the transgenes resulted in the accumulation of tryptophan (Trp), indole-3-acetonitrile (IAN), and indole-3-acetic acid (IAA) in leaves and tryptophan content as a free amino acid in seeds also increased up to 30 times relative to the wildtype. Two homozygous event lines, S-TG1 and D-TG1, were selected for characterization of agronomic traits and metabolite profiling of seeds. Differentially expressed genes (DEGs), related to ion transfer and nutrient supply, were upregulated and DEGs related to co-enzymes that work as functional genes were down regulated. These results suggest that two homozygous event lines may prove effective for the breeding of crops with an increased level of free tryptophan content.
The optimal culture conditions for root organogenesis from the callus of peonies (Paeonia lactiflora Pall.) were investigated. Root explants with vascular bundles were cultured in Murashige and Skoog (MS) medium combined with 0.5-4.0 mg/L auxins (indole acetic acid [IAA], naphthalene acetic acid [NAA], indolebutyric acid [IBA], and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid [2,4-D]) and 0.0-2.0 mg/L cytokinins (kinetin, zeatin, and benzylaminopurine [BAP]) to induce callus formation. The callus was then cultured in MS medium combined with three concentrations (0.1, 0.5, and 1.0 mg/L) of IAA, NAA, IBA, kinetin, zeatin, and BAP in the dark for 6 weeks. Based on the results, the effects of dark and light conditions on the callus cultured in MS medium with combinations of 0.1-1.0 mg/L IBA and zeatin for 6 weeks were studied. Callus formation was most effective (>+++) in the medium with a combination of 1.0 mg/L NAA and 1.0 mg/L zeatin. A high number of long adventitious roots were observed in the mediums with 0.1 mg/L IBA (6.66 and 4.82 cm) and 0.5 mg/L zeatin (2.32 and 0.72 cm) among auxins and cytokinins, respectively. The highest number (14.06) of adventitious roots were formed from the callus cultured in light in the MS medium combined with 0.1 mg/L IBA and 0.5 mg/L zeatin. This same medium induced the formation of the longest adventitious root (5.45 cm) in the dark. Thus, optimization of in vitro culture conditions may be possible for the mass propagation of adventitious roots in peonies.
Jung, Jin Hee;Kim, Sang Woo;Kim, Yun Seok;Lamsal, Kabir;Lee, Youn Su
The Korean Journal of Mycology
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v.41
no.2
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pp.118-126
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2013
The experiment was carried out to analyze the inhibition effect of plant pathogenic fungi and growth promotion activity induced by the bacterial strains isolated from peatmoss. Among the isolated bacterial strains, B10-2, B10-4, B10-5 and B10-6 which showed more than 30% inhibition rate against Botrytis cinerea and Rhizoctonia solani in vitro, were further analyzed in the greenhouse for the growth promotion activity on lettuce (Lactuca sativa), pak-choi (Brassica compestris L. ssp. chinensis) and Chinese cabbage (Brassica campestris L. ssp. pekinensis). The results showed the treatment of B10-4 on lettuce showed the highest growth promotion activity with the leaf area ($169.17cm^2$), fresh weight (leaf: 40.29 g, root: 8.80 g)and dry weight (leaf: 11.24 g, root: 4.17 g), which was about two folds as compared to control. On pak-choi, the growth promotion rate was the highest with the leaf area of $112.87cm^2$, leaf fresh weight of 60.70 g, root fresh weight of 3.37 g, leaf dry weight of 14.34 g, and root dry weight of 1.90 g. As a result of treatment of B10-13 on chinese cabbage, the growth promotion rate was the highest with the leaf area ($293.56cm^2$), fresh weight (leaf: 113.67 g, root: 2.40 g) and dry weight (leaf: 6.03 g, root: 0.53 g). The production of Indole Acetic Acid (IAA) and Indole-3-Butylic Acid (IBA) were also analyzed in these bacterial isolates. The IAA and IBA analyses were carried out in all bacterial isolates each day within the 5 days of incubation period. The highest production of IAA was observed with $112.57{\mu}g/mg$ protein in B10-4 after 3 days of incubation and IBA production was the highest in B10-2 with $58.71{\mu}g/mg$ protein after 2 days of incubation. Also, phosphate solubilizing activity was expressed significantly in B10-13 in comparison to that of other bacterial isolates. Bacterial identification showed that B10-2 was Bacillaceae bacterium and B10-5 was Bacillus cereus, B10-4 and B10-6 were Bacillus sp. and B-13 was Staphylococcus sp. by ITS sequence.
Leaf disks from cultivar 'Kennebec' and one selection line (ND 860-2) were cultured on Murashige-Skoog medium with various combinations of indole acetic acid (IAA) and zeatin riboside. Shoots, roots and callus were induced at various combinations of plant growth regulator levels. The medium containing $3.5mg{\cdot}L^{-1}$ IAA and $4.0mg{\cdot}L^{-1}$ zeatin riboside produced the most plantlets. Rooted regenerants were grown in the greenhouse. The growth of regenerated plants obtained from the MS medium supplemented with $7.0mg{\cdot}L^{-1}$ IAA and $3.0mg{\cdot}L^{-1}$ zeatin riboside was significantly greater than those grown from nodal expalnts. In ND 860-2, a leaf chimera with chlorophyll deficient (light yellow) sectors was found in plants regenerated fiom leaf disks (grown on MS medium supplemented with $3.5mg{\cdot}L^{-1}$ IAA and $3.0mg{\cdot}L^{-1}$ zeatin riboside) but not in plants grown from nodal explants. The phenotypic variability was also observed in the tuber number, size and weight.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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