• 한국식품과학회지
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• 제44권5호
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• pp.638-642
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• 2012

돼지축사에서 채집해온 6개의 육성돈의 분변에서 식중독 유발 바이러스인 HAV와 HEV를 검출하였으며, HAV는 88.3%의 검출율을 보였으며, HEV는 33.3%의 검출율을 보였다. 결과에는 제시하지 않았으나, 염기서열 분석결과 HEV는 사람에게 전염이 가능한 유전자형인 III형이었으며, 실험적으로 사람의 간세포인 PLC/PRF/5에 접종하였을 때 증식이 됨을 확인하였다. 식중독 유발 바이러스인 HAV와 HEV는 오염된 식품이나 물을 섭취하거나 교차 오염에 의해 전염이 가능하기 때문에 돼지축사에서 위생상태의 개선뿐만 아니라 육류를 섭취하기 전인 운송 및 가공과정까지 식중독 유발 바이러스에 의한 교차오염을 막는 노력이 필요하다. HAV와 HEV 모두 검출된 분변에서 HAV를 순수분리하고 빠르게 검출하기 위해 IMS-RT-PCR을 적용하였으며, 항원-항체 반응에 의해 순수하게 HAV만을 분리할 수 있었다. 또한 HAV만이 순수분리 되었는지 재확인하기위해 세포감염을 통해 증식된 바이러스를 확보한 후 nested RT-PCR을 수행한 결과, HAV만을 순수 분리할 수 있음을 확인하였다. 이는 IMS 활용기술이 단순히 항체를 교체함으로써 다른 특정 식중독 유발 바이러스의 다양한 시료에서 바이러스 순수분리 및 검출에 활용 가능성이 있음을 확인하였다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제4권1호
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• pp.32-38
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• 2001

Several molecular biological techniques have been used to detect virus rapidly and accurately, but these methods have limitations in the early stage of viral infection with very low concentration of virus. We compared the detection limits of IMS-PCR, Western blot and ELISA with infectious hematopoietic necrosis virus OHNV). Four antibodies, rabbit anti-IHNV polyclonal antibody, anti-IHNV nucleocapsid protein monoclonal antibody, anti-IHNV nucleocapsid protein polyclonal antibody, and anti-IHNV glycoprotein polyclonal antibody, were tested to find out the most effective antibody for each method. The detection limit with IMS- PCR was $2\times10^6$ pfu when the viral RNA was extracted before RT-PCR. In the western blot with rabbit anti­IHNV polyclonal antibody one pfu of virus could be detected. In ELISA, 10 pfu of virus particles were detected with the same antibody.

• 한국수산과학회지
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• 제30권6호
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• pp.948-955
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• 1997

Immunomagnetic separation of virus coupled with .reverse transcription-polymerase chain reaction (IMS-PCR) was performed with infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV). A DNA fragment of expected size was synthesized in the RT-PCR with total RNA extracted from IHNV inoculated CHSE-214. In a SDS-PAGE analysis, a protein band of over 70kDa was detected from non-infected cells and cells inoculated with IHNV and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). This protein was detected in the Western blot analysis probably because of non-specific reaction to monoclonal antibody against IHNV nucleocapsid protein. In the immunomagnetic separation, magnetic beads coated with monoclonal antibody against the IHNV nucleocapsid protein was incubated with supernatant from IHNV inoculated CHSE-214 cells. During this process, the non-specifically reacting protein could be removed by washing the magnetic bead with PBS in the presence of an external magnetic field, and viral proteins were detected from the remaining, cleaned magnetic beads. It was necessary to extract viral RNA from the captured virus particles before RT-PCR, and no DNA product was detected when the captured virus was only heated 5 min at $95^{\circ}C$. A PCR-product of expected size was synthesized from IMS-PCR with magnetic beads double coated either by goat anti-mouse IgG antibody -monoclonal antibody or streptavidin - biotin conjugated monoclonal antibody.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제21권2호
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• pp.170-174
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• 2014

식중독 유발 바이러스인 HAV는 제 1군 감염병원으로 규정되면서 감염 시 원인식품을 빠르게 분석하게 되었으며 그로 인해 정확하면서 빠른 검출기술을 요구하게 되었다. 본 연구에서는 HAV에 오염된 상추에서 신속하게 바이러스를 검사하기 위해서 IMS를 통하여 신속하게 HAV를 순수 분리 및 농축하였고, 형광물질인 quantum dot을 활용하여 형광검출을 실시하였다. 또한 일반적으로 바이러스 농축에 사용되는 PEG 농축방법과 비교하였을 때 검출능은 유사한 결과를 얻었으나, 농축시간 면에서는 IMS를 통한 방법이 효과적이었다. 또한 IMS 방법으로 확보된 항원을 Quantum dot을 활용하여 10분 이내에 바이러스를 검출할 수 있었다. 본 연구에서 제시된 검출기반은 식품 유통 과정 중 다양한 식중독 바이러스로부터 소비자를 보호 할 수 있는 검사방법으로 활용될 수 있다고 기대된다.

• 원예과학기술지
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• 제29권6호
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• pp.623-632
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• 2011

본 연구는 배추에서 항암물질 PEITC의 함량을 높이기 위하여 PEITC 대사과정에서 관련 유전자인 myrosinase (MYR)와 Glutathione S-transferase(GST) 유전자를 분리하고 Agrobacterium tumefacien 형질전환 방법을 통하여 유전자 발현을 조절하였다. 분리된 MYR과 GST의 cDNA는 각각 1647bp와 624bp임을 확인하였고 pET system으로 단백질의 발현을 확인하였다. 형질전환을 위해서 MYR-과발현 벡터와 GST-발현억제 벡터를 제작하였으며 이를 이용하여 배추에 형질전환한 후 PCR 검정을 통해 MYR-과발현 벡터로 형질전환된 개체(IMS) 13개체를 GST-발현억제 벡터로 형질전환된 개체(IGA) 5개체를 선발하였다. 선발된 $T_0$ 개체는 $T_1$ 세대로 진전시켰으며 $T_1$ 형질전환 계통의 서던분석 결과 배추 genome내로 1-4 copy의 T-DNA가 삽입된 것을 확인하였다. 유전자 발현양을 real-time RT PCR로 조사한 결과 IMS는 발현량이 1.03-4.25배 증가하였고 IGA는 26.42-42.22배 감소하였다. IMS와 IGA의 각 계통에서 PEITC의 농도를 GC-MS 방법을 이용하여 확인한 결과 IMS는 PEITC 함량이 형질전환이 되지 않은 대조군에 비해 최대 4.86배까지 증가한 계통을 확인하였고 IGA는 최대 3.89배까지 증가된 계통을 확인하였다. 최종적으로 본 연구를 통하여 항암물질 PEITC량의 증가를 보인 형질전환계통 IMS 1, 3, 5, 12, 15 및 IGA 1, 2, 4를 선발하였다.

• 생명과학회지
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• 제16권5호
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• pp.729-733
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• 2006

크립토스포리디움의 활성 및 감염성 판정을 위해 Direct RT-PCR, 세포배양 후 RT-PCR 및 면역형광염색법을 비교한 결과는 다음과 같다. 1) 크립토스포리디움의 HSP70 gene에 대해 direct RT-PCR한 결과, 민감도가 매우 높아 저농도로 존재하는 환경시료에서의 크립토스포리디움 활성을 모니터링하는데 장점이 있을 것으로 보이나, 감염성의 판정은 알 수 없으며, 정량화가 안되는 단점이 있었다. 2) ${\beta}-tubulin$ gene에 대해 RT-nested PCR을 한 결과 크립 토스포리디움의 난포낭이 $1{\times}10^4$ 세포수정도 되어야 검출이 되는 것으로 나타나 HSP70 gene에 대한 RT-PCR결과와 비교할 때 10,000배 이상 민감도가 떨어지는 것으로 나타났다. 3) 세포배양 후 RT-PCR 또는 면역형광염색법을 이용할 경우에는 민감도가 direct RT-PCR보다 다소 떨어지는 단점이 있었으나 크립토스포리디움의 오염원이나 오염이 심한 지역의 감염성 조사에 적합할 것으로 나타났으나, 정량화가 필요한 경우에는 세포배양 후 면역형광염색법이 효과적일 것으로 나타났다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제25권4호
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• pp.376-387
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• 2010

식품으로부터 식중독세균을 검출하는 대부분의 전통적인 방법들은 분리하고자 하는 미생물에 적합한 선택배지에 의존할 수밖에 없다. 이러한 선택배지들은 높은 경제성에도 불구하고 오래 걸려 때를 놓치게 되는 소요 시간이 항상 걸림돌로 작용하고 있으며, 하나의 선택배지로 한의 균만을 선택적으로 분리해 내는 등의 단점이 있다. 이러한 단점을 최소화하기 위하여 IMS 등 면역학적 또는 분자생물학적 기법들을 접목시키고 있고, 증균에서 분리와 확인을 동시에 할 수 있는 package 형태의 제품들이 시판되고 있다. 또한 이러한 제품 중 일부는 국제표준기구로부터 인증을 받았고 대부분 chromogenic 기질을 함유한 선택배지들이 포함되어 있을 만큼 신뢰도가 높다고 할 수 있다. 그러나 선택배지 자체만은 이들 단점을 해결할 수 없어 항체를 활용한 신속, 간편하고 환경친화적인 ELISA법, 검출장비가 불필요하여 가장 신속, 간편하게 현장에서 사용하도록 기술을 향상시킨 paper-strip kit나 ELISA 분석 시 직면하는 시료의 matrix effect를 최소화할 수 있다는 장점을 지닌 형광면역분석법(fluoroimmunoassay)등 새로운 기술이 용도에 맞게 다양하게 개발되고 있다. 또한 동시진단 능력이 우수한 현장 진단형 시스템이 개발될 경우, 향후 신 시장 창출, 바이오칩 기술발전, 식중독균을 포함한 위해 미생물의 동시진단 및 역학조사 등에 지대한 기여를 할 것으로 판단된다. 식품에서 식품위해미생물 검출에 있어서 가장 이상적인 방법은 검출 과정이 간단하고 경제적이며 정확하여야 한다는 것이다. 또한 정량적 결과 산출이 가능하여야 하고, 자동화된 방법으로 전환이 가능하여야 산업에 적용될 수 있다는 것인데, 이러한 이상적인 검출방법은 현재까지 존재하지 않는다. 다만, 여러 방법들이 각각의 장점을 갖고 있을 뿐이다. 즉, 현실적 대안은 현재까지 개발된 각각의 방법을 목적과 대상에 따라 시의적절하게 병용 사용하여야 한다는 것이다.