본 실험에서는 HRF의 조절단백질을 알아보기 위해 HRF를 bait로 한 yeast two hybrid assay를 실행한 결과 해당과정에 관여하는 TPI(triosephosphate isomerase)라는 효소를 발견하였으며, 가장 많이 중복되어 있었다. In vitro에서 HRF는 TPI의 C말단 잔기 부근(아미노산 156-249)이 상호작용에 주로 관여하는 부위임을 알 수 있었다. 또한, HeLa 세포에서 immunoprecipitation을 이용하여 HRF와 TPI의 상호작용이 실제 in vivo에서도 일어나는 현상이라는 것을 밝혔다. 결과적으로 HRF와 TPI 상호작용은 세포내 일정량이 존재하며 여러가지 신호전달에 의해 동시에 Na,K-ATPase와도 상호작용하는 것으로 생각된다.
Anti-tumor activity of the proteins from Gecko (GP) on cervical cancer cells, and its signaling mechanisms were assessed by viable cell counting, propidium iodide (PI) staining, and Western blot analysis. GP induced the cell death of HeLa cells in a dose-dependent manner while it did not affect the viability of normal cells. Western blot analysis showed that GP decreased the activation of Akt, and co-administration of GP and Akt inhibitors synergistically exerted anti-tumor activities on HeLa cells, suggesting the involvement of PI3-kinase/Akt pathway in GP-induced cell death of the cancer cells. Indeed, the cytotoxic effect of GP against HeLa cells was inhibited by overexpression of constituvely active form of Akt in HeLa cells. The candidates of the functional proteins in GP were analyzed by Mass-spectrum. Taken together, our results suggest that GP elicits anti-tumor activity against HeLa cells by inhibition of PI3-kinase/Akt pathway.
The present study was aimed at determining the effects of alkylating and oxidative stress inducing agents on a newly identified variant of DNA polymerase beta ($pol{\beta}{\Delta}_{208-304}$) specific for ovarian cancer. $Pol{\beta}{\Delta}_{208-304}$ has a deletion of exons 11-13 which lie in the catalytic part of enzyme. We compared the effect of these chemicals on HeLa cells and HeLa cells stably transfected with this variant cloned into in pcDNAI/neo vector by MTT, colony forming and apoptosis assays. $Pol{\beta}{\Delta}_{208-304}$ cells exhibited greater sensitivity to an alkylating agent and less sensitivity towards $H_2O_2$ and UV when compared with HeLa cells alone. It has been shown that cell death in $Pol{\beta}{\Delta}_{208-304}$ transfected HeLa cells is mediated by the caspase 9 cascade. Exon 11 has nucleotidyl selection activity, while exons 12 and 13 have dNTP selection activity. Hence deletion of this part may affect polymerizing activity although single strand binding and double strand binding activity may remain same. The lack of this part may adversely affect catalytic activity of DNA polymerase beta so that the variant may act as a dominant negative mutant. This would represent clinical significance if translated into a clinical setting because resistance to radiation or chemotherapy during the relapse of the disease could be potentially overcome by this approach.
Helicobacter pylori (H. pyroli) infection it associated with type B gastritis, peptic uler disease, and gastric cancer. The vacuolation of cells induced by H. pylori is thought to be essential for the initiation and maintenance of gastric infection. The roles of H. pylori cytotoxin, urease, and ammonia in the vacuolation of HeLa cells were determined. H. pylori toxin induced vacuolation of HeLa cells. Korean and Japanese radishes significantly prevented the vacuolation of HeLa cells induced by H. pylori toxin. The urease activity in vacuolated cells was also decreased with Korean and Japanese radishes. H. Pylori toxin-induced vacuolation was inhibited by vacuolar type ATPase inhibitors (bafilomycin and N-ethylmaleimide). However, further investigation is required to determine the mechanisms of radish for the inhibition of vacuole formation of eukaryotic cells in response to the H. pylori toxin.
Purpose: This experiment was designed to find out increasing effects of S. barbata. co-treatment with anti-cancer drugs at cancer cell's growth inhibition effect. Methods: Divergent observational study of the S. barbata. co-treatment with Cisplatin treatment on HeLa cell. Cell viability using MTT assay, Cell Culture and Cytotoxicity Studies, Cell Cycle Analysis, Annexin V-FITC/PI assay, Cell morphological assessment, PARP cleavage using Western blotting analysis when HeLa cell were co-treated with Cisplatin and Scutellaria Barbata extracts. Results: When HeLa cell were co-treated with Cisplatin and Scutellaria Barbata extracts, we found out viability of HeLa cell, changing in the distribution of cell cycle, Annexin V-FITC staining, DAPI staining, PARP clavage protein assay by Western-blot. So Scutellaria Barbata extracts have increased apoptosis Conclusion: When co-treated Scutellaria Barbata extracts with anti-cancer drugs, the anti-cancer effects were increased. We still not sure which constituent apoptosis at cancer cells and activates anti-cancer effects suppressing, but we believe that it'll be revealed here after with following experiments.
Background: Changes to work-life balance has increased the incidence of cervical cancer among younger people. A minor ginseng saponin known as ginsenoside Rk1 can inhibit the growth and survival of human cancer cells; however, whether ginsenoside Rk1 inhibits HeLa cell proliferation is unknown. Methods and results: Ginsenoside Rk1 blocked HeLa cells in the G0/G1 phase in a dose-dependent manner and inhibited cell division and proliferation. Ginsenoside Rk1 markedly also activated the apoptotic signaling pathway via caspase 3, PARP, and caspase 6. In addition, ginsenoside Rk1 increased LC3B protein expression, indicating the promotion of the autophagy signaling pathway. Protein processing in the endoplasmic reticulum signaling pathway was downregulated in Gene Ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway enrichment analyses, consistent with teal-time quantitative PCR and western blotting that showed YOD1, HSPA4L, DNAJC3, and HSP90AA1 expression levels were dramatically decreased in HeLa cells treated with ginsenoside Rk1, with YOD1 was the most significantly inhibited by ginsenoside Rk1 treatment. Conclusion: These findings indicate that the toxicity of ginsenoside Rk1 in HeLa cells can be explained by the inhibition of protein synthesis in the endoplasmic reticulum and enhanced apoptosis, with YOD1 acting as a potential target for cervical cancer treatment.
Objectives There have been developed to use targeting ability for antimicrobial, anticancerous, gene therapy and cosmetics through analysis of various membrane proteins isolated from cell organelles. Methods It was examined about the lysosomal membrane protein extracted from lysosome isolated from HeLa cell treated by 100 ppm melanin for 24 hours in order to find associated with targeting ability to melanin using by 2-dimensional electrophoresis. Results The result showed 14 up-regulated (1.5-fold) and 13 down-regulated (2.0-fold) spots in relation to melanin exposure. Conclusions It has been found that lysosomal membrane proteins are associated with melanin to decolorize and quantity through cellular activation of lysosome.
Gamdutang aqua-acupuncture solution (GAS), Gamdutang water-extracted solution (GWS) and Dae-Gamdutang aqua-acupuncture solution (DGAS) were prepared and tested for antitumor activities. It was shown to possess considerable toxicity toward various tumor cell lines. Concentration of 5 $\times$ and 10$\times$ of GAS resulted in more than 70% inhibition of growth in Ehrlich ascites tumor cells (EATC), Hepa1c1c7 and A549. GAS at concentrations of 5$\times$ and 10$\times$ revealed more than 60% inhibition in HeLa. GWS showed more than 50% inhibition of growth with EATC and HeLa at concentrations of 5$\times$ and 10$\times$, respectively. Toxicity assay with GWS in Hepa1c1c7 and A549 revealed that more than 80% inhibition of growth at the concentration of 5$\times$ and 10$\times$. In morphological study, the number of cells were decreased, and the shape of cells was round-form in EATC, Hepa1c1c7, A549, HeLa with GAS.
Cancer is an unfavorable human disease, and the treatment commonly have side effects and can be ineffective. Since exploration and development of cancer treatment drugs is particularly demanding, this study aimed to investigate the anticancer activities of Polysiponia morrowii extract s (PME) on CT-26 and HeLa cells. The results showed that PME inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner, with IC50 values of 41.04% in CT-26 and 48.51% in HeLa cell cultures. Moreover, cytological observation using Hoechst 33342 staining assay showed typical apoptotic morphology in both cancer cells, and production of sub-G1 DNA was induced by PME treatment in a dose-dependent manner, with 34.41% in CT-26 and 46.01% in HeLa cell cultures. These findings suggest that PME may have potential preventive effects or medicinal value in the treatment of colorectal and cervical cancers.
임상적으로 많이 이용되는 범위의 방사선 조사에서는 증식능의 상실을 세포사망으로 정의를 내린다. 본 연구는 실험용 orthovoltage조사기를 이용하여 확립된 세포주인 Hela.53(5C)를 대상으로 각각 100 cGy, 200 cGy, 400 cGy 및 600 cGy 방사선조사 후 2주일간 배양후 crystal violet 염색을 하여 육안적으로 판별가능한 크기의 집락의 수를 산출하여 다음의 결과를 얻었다. HeLa.S3(SC) 세포의 집락 형성능은 0.464이었다. 세포의 생존곡선의 형태는 다표적, 1 hit 형태를 보였다. Do는 150 cGy, Dq는 80 cGy, 외삽치는 1.7이었다. 이 연구결과는 향후 다양한 방사선 생물학 연구에 참고자료로 이용 가능하리라 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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