• Journal of Veterinary Science
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• 제23권2호
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• pp.24.1-24.10
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• 2022

Background: Small interfering RNA technology has been considered a prospective alternative antiviral treatment using gene silencing against influenza viruses with high mutations rates. On the other hand, there are no reports on its effectiveness against the highly pathogenic avian influenza H5N1 virus isolated from Indonesia. Objectives: The main objective of this study was to improve the siRNA design based on the nucleoprotein gene (siRNA-NP) for the Indonesian H5N1 virus. Methods: The effectiveness of these siRNA-NPs (NP672, NP1433, and NP1469) was analyzed in vitro in Marbin-Darby canine kidney cells. Results: The siRNA-NP672 caused the largest decrease in viral production and gene expression at 24, 48, and 72 h post-infection compared to the other siRNA-NPs. Moreover, three serial passages of the H5N1 virus in the presence of siRNA-NP672 did not induce any mutations within the nucleoprotein gene. Conclusions: These findings suggest that siRNA-NP672 can provide better protection against the Indonesian strain of the H5N1 virus.

• 한국체육학회지인문사회과학편
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• 제55권4호
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• pp.507-516
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• 2016

본 연구는 지구성 운동 후 안정시 PGC-1α mRNA와 단백질의 안정성이 PPARβ/δ의 영향을 받는지 확인하는 것이다. 전기 자극 유전자 전이법(electroporation; EPO)을 이용하여 PPARβ/δ와 empty vector(EV) 유전자를 각각 생쥐의 왼쪽과 오른쪽 tibialis anterior(TA)근육에 전이하였으며, 처치하지 않은 대조군(control)과 1회 지구성 운동 후 시간에 경과에 따른 mRNA와 단백질을 비교하였다. 생쥐는 5시간 수영 운동을 1회 실시하였으며, 운동 직후(0h), 24시간(24h) 및 54시간(h)이 경과한 후 TA근육을 적출하였다. 운동 직후(0h) 대조군, EV 및 PPARβ/δ가 과발현된 근육의 PGC-1α mRNA는 좌업 그룹보다 각각 6.8배(p<.001)배, 6.2배(p<.001) 및 7.1배(p<.001) 증가하였으나, 24h 및 54h에 좌업 그룹수준으로 회복되었다. 운동 후 24h에 EV가 처치된 근육은 PGC-1α 및 PGC-1α ubiquitination이 좌업 그룹보다 각각 2.2배 및 1.74배 증가하였으나, 운동 후 54h에 좌업 그룹수준으로 회복되었다. PPARβ/δ 처치 그룹의 PGC-1α는 운동 후 24h와 54h에 좌업 그룹보다 각각 2.5배와 2.2배 증가하였으나 PGC-1α ubiquitination은 증가하지 않았다. 따라서 PPARβ/δ 과발현은 지구성 운동에 의한 PGC-1α mRNA 단백질 안정성에 영향을 미치지 않는다. 그러나 PPARβ/δ 과발현은 지구성 운동으로 증가된 PGC-1α mRNA가 단백질로 전환된 후 PGC-1α의 안정성을 증가시킨다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권4호
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• pp.234-239
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• 2001

천연풍미소재로 정미성 nucleotide 함량이 높은 효모추출물을 만들기 위해서 세포내 RNA 함량이 높은 효모균주 S , cerevisat MTY 62를 선별하여TRh, 당밀과 CSL배지로 발효조 회분배양과 유가배양을 수행하였다. 여러가지 단양한 간헐적 유가배양 중에서 40% 당밀과 20% CSL의농축기질액을 50ml 다섯번 공급하는 간헐적 유가배양 (IFB-IV) 에서 최대 세포농도는 33.8g-DCW/1 RNA 농도는 5221 mg/l RNA 함량은 153 mg-RNA/g DCW 값을 나타내었다. 일정속도의 유가배양에서는 기질 요액(40% molasses, 20% CSL)을 배양 9~13시간에서는 49 ml/h 13~21 이시간에서는 24 ml/h 그 이후로는 18 ml/h 로 기질공급속도를 단계적으로 감소시키는 유가배양 (CFB-III) 에서 42.7g-DCW-1 최대 세포농도를 5545 mg RNA/1의 RNA농도를 보여, 간헐적 및 일정 속도 유가배양 중에서 가장 높은 세포농도와 RNA 농도 값을 나타내었다. 그러나 RNA 함량 면에서는 가장 낮은 130 mg-RNA/g-DCW 값을 보여다. 즉 세포농도가 높을수록 RNA 함량은 감소하는 경향을 나타내었다. 이 상의 두 가지 유가배양에 대해 비증식속도 ($\mu$)에 따른 RNA 함량을 조사한 결과, $\mu$값이 증가할수록 RNA 함량도 증가하였다. 그러나 일정한 $\mu$에서는 일정속도의 기질공급 방식보다 간헐적 기질공급 방식이 더 높은 RNA 함량을 나타내었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제33권1호
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• pp.71-76
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• 2018

노로바이러스는 전 세계적으로 산발적인 발병 관련 비세균성 위장염의 주요 원인 물질이다. 노로바이러스 검출을 위해 역전사 실시간 PCR (RT qPCR)이 그 민감도와 특이성으로 인해 주요 수단으로 빠르게 자리 잡았다. 그러나 RT qPCR 분석을 위해서는 정확한 바이러스 RNA 추출방법이 필수적이다. TRIzol 시약은 생물학적 물질로부터 RNA의 추출에 이용되고 따라서 노로바이러스 RNA 추출에도 널리 사용된다. 이 연구에서는 인체 노로바이러스 유전체 그룹 I (GI) 및 유전자 그룹 II (GII)와 생쥐 노로바이러스(GV) 중에서 GII로부터의 TRIzol 을 이용한 바이러스 RNA의 추출률이 바이러스 시료 용액의 pH에 의존했다는 내용이 다루어졌다. 실시간 PCR의 Ct값으로 비교한 RNA 추출 수율은 산성 영역보다 알칼리성 pH에서 높았다. 이 연구 결과로 부터 TRIzol을 이용하여 GII RNA를 추출하여 노로바이러스를 정량적으로 분석할 때 pH조건이 대단히 중요하다는 것을 알 수 있었다.

• 미생물학회지
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• 제26권1호
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• pp.27-31
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• 1988

Biosynthesis and processing of cytoplasmic mRNA from heterogenous nuclear RNA (hn-RNA) in Aspergillus phoenicis were studied by $^{3}H$-uridine labeling and synchronous culture techniques during their life cycle. Incorporations of $^{3}H$-uridine into hn-RNA and mRNA were most rapid in vesicle-phialide fromation stage and diminished in hyphal growth stage. The processing of cytoplasmic mRNA from hn-RNA was proceeded more rapidly in hyphal growth and conidiophore formation stages than in conidia and vesicle-phialide formation stages. The specific radioactivities of hn-RNA and mRNA were very high in vesicle-phialide formation stage.

• Journal of Plant Biology
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• 제26권1호
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• pp.1-6
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• 1983

In order to investigate the effects of GA3 on RNA biosynthesis, the amounts of rRNA and tRNA in germinating maize seeds were measured. The amount of rRNA in the endospermless seedlings was remarkably increased by GA3 tretment after 48 h of germination, but no effect was observed after 12 h of germination. While the amout of rRNA in 0.5 cm shoots in length was decreased by GA3 treatment, both of the amounts of rRNA and tRNA were increased in 1~1.5 cm shoots. According to the above mentioned results, it may be suggested that RNA biosynthesis is affected by GA3 treatment, and that GA3 participates in the biosynthesis of rRNA rather than tRNA in germinating maize seeds.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권1호
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• pp.68-72
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• 2002

RNA 함량이 증가되고, 증식속도가 더 빠른 효모 변이주를 선별하기 위해, 모균주 Saccharomyces cerevisiae MTY62 세포에 화학적 돌연변이제인 ethylmethane sulfonate를 처리하여, YPD 배지에서는 잘 자라고 KCl 함유 배지에서는 자라지 않는 변이주들을 선별하였다. 이 변이주들 중 시험관 및 플라스크 배양을 통해 균체농도와 RNA 함량이 모균주 MTY62에 비해 각각 1.5배, 1.3배 증가한 M40-10 변이주를 최종적으로 선별하였다. 변이주 M40-l0을 발효조 회분배양한 결과, 최대비증식속도는 $0.38 h^{-1}$ , RNA 농도는 3210 mg-RNA/1, RNA 함량은 183mg-RNA/g-DCW 값을 보여, 모균주에 비해 각각 23%, 15%, 12%씩 증가하였다. M40-10 변이주를 간헐적 유가배양한 결과, 최대 균체농도는 35.6 g-DCW/1을, 최대 RNA 농도는 5677mg-RNA/l을, RNA함량은 160 mg-RNA/g-DCW을 나타내어 모균주보다 우수하였다. 일정속도의 유가배양에서도 M40-10 변이주의 최대 균체농도는 46.4g-DCW/1, RNA 농도는 6270mg-RNA/1, RNA 함량은 135mg-RNA/g-DCW을 보였다. 이들 유가배양에서 배양 중반기인 20시간 전후에서는 모균주에 비해 변이주의 세포농도는 30%, RNA 농도는 10% 정도 증가되었다. 또한 유가배양 말기까지도 RNA 분해는 거의 일어나지 않아, M40-10 변이주는 산성 RNase 활성이 크게 감소한 변이주임을 알 수 있었다.

• 한국식품과학회지
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• 제27권1호
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• pp.129-133
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• 1995

배양환경이 효모 RNA 축적과 autolysis 효율에 미치는 영향을 알아보기 위하여 연속배양을 실시하였다. Dilution rate의 증가에 따라 균체내의 RNA 함량은 증가하여 dilution rate=0.35 $h^{-1}$에서 14.8%를 나타내었고, 더불어 RNA productivity와 specific RNA productivity도 증가하였다. 고정된 D=0.2 $h^{-1}$에서 최적 균체량은 배양온도 $30^{\circ}C$ 에서 얻어졌으나, RNA 함량은 배양온도가 낮아질수록 높은 값을 보여 $24^{\circ}C$에서 12.7%로 나타났다. 한편, autolysis 효율 측면에서 균체 생육속도가 증가할수록 효모 extract의 추출율은 감소하였고, 효모 extract의 분해율은 증가하는 경향을 보였으나, 배양온도는 효모 autolysis 효율에 큰 영향을 미치지 않았다.

• 미생물학회지
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• 제27권2호
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• pp.77-84
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• 1989

Saccharomyces cerevisiae의 RNAI 유전자의 온도 감수성 돌연변이 균주는 성장허용 온도인 23"C에서는 정상적인 성"J--을하나, 성 장억제 온도인 36°C에서는 tRNA, rRNA 그러고 mRNA 의 선우울질을을 핵내에 축적함으후써 성장을 못한다. 본 실 험에서는 complementation 에 의하여 RNAI 유전자를 클로녕하였으며 concomitant loss 실험에 의하여 이 유천자의 클로닝 을 확인하였다. 유전자의 위치를 확인한 결과 3.5kb의 Bgl II 조각내에 RNAI 유전자가 존재함을 알 수 있였으며, 2.1kb에 해당하는 BamH I -Bgl II 조각에서는 RNAI 유전지에 의한 complementation 능력이 상실되는 것으후 보아 RNAI 유전자 는 3.5kb의 BglIl 조각내에 포함되는 BamH 1 자리 주위에 결쳐 있픔을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권8호
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• pp.781-786
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• 2009

Small interfering synthetic double-stranded RNA (siRNA) was applied to suppress the expression of the human cytotoxic-T-Iymphocyte antigen 4-immunoglobulin (hCTLA4Ig) gene transformed in transgenic rice cell cultures. The sequence of the 21-nucleotide siRNA was deliberately designed and synthesized with overhangs to inactivate the expression of hCTLA4Ig. The chemically synthesized siRNA duplex was combined with polyethyleneimine (PEl) at a mass ratio of 1:10 (0.33 ${\mu}g$ siRNA:3.3 ${\mu}g$ PEl) to produce complexes. The siRNA complexes (siRNA+PEI) were labeled with Cy3 in order to subsequently confirm the delivery by fluorescent microscopy. In addition, the cells were treated with sonoporation at 40 kHz and 419W for 90 s to improve the delivery. The siRNA complexes alone inhibited the expression of hCTLA4Ig to 45% compared with control. The siRNA complexes delivered with sonoporation downregulated the production of hCTLA4Ig to 73%. Therefore, we concluded that the delivery of siRNA complexes into plant cells could be enhanced successfully by sonoporation.