세포질과 핵단백질의 serine과 threonine 잔기에 O-linked N-acetyl-$\beta$-glucosamine (O-GlcNAc)의 첨가는고등 진핵 세포에서 흔히 일어나는 번역 후 단백질의 변형 중 하나로서 단백질의 인산화와 유사한 세포 내 신호전달에 관여하는 것으로 보인다. O-GlcNAc의 첨가와 제거는 O-GlcNAc transferase (OGT)와 O-linked N-acetyl-$\beta$-D-glucos-aminidase (O-GlcNAcase) 효소에 의해 각각 촉매된다. 두가지 종류의 사람 유래 O-GlcNAcase 유전자(O-GlcNAcase, v-O-GlcNAcase)를cloning하고 세 가지의 융합단백질로 대장균에서 생산을 시도하였다. O-GlcNAcase의 기질 유사체 인 ${\rho}$-nitrophenyl-N-acetyl-$\beta$-D-g1ucosaminide (${\rho}$NP-$\beta$-D-GlcNAc)를 기질로 사용하여 효소활성을 측정 한 결과 v-O-GlcNAcase는 활성을 나타내지 않았다. 여러 종류의 amino sugar 기질 유사체를 사용하여 O-GlcNAcase의 활성을 측정하였으나 오직 ${\rho}$NP-$\beta$-D-GlcNAc만이 활성을 보였다. Blast검색으로 분석한 결과 아미노 말단의 hyaluronidase-like domain (hyaluronidase-유사 영역)과 카르복시 말단의 N-acetyltransferase 영역 두 곳의 conserved domains 존재하였다. 효소촉매에 중요한 영역을 밝히기 위해 여러 deletion mutants(결손 변이체)를 제작한 후 효소활성을 측정하고 Western blot으로 분석하였다. Hyaluronidas-유사 영역, 유전자 내부와 N-acetyltransferase 영역을 제거할 경우 효소활성이 사라졌으나 아미노 말단의 55개 아미노산과 카르복시 말단의 truncation은 활성을 일부분 유지하였다. 위의 사실에 기초하여 hyaluronidas-유사 영역은 효소활성에 중요하고 카르복시 말단의 N-acetyltransferase 영역은 조절기능으로 작용하는 것으로 추정된다.
우리나라 주요 식품들의 단백질 아미노산 함량을 최근에 와서 크게 실용화되고 있는 GLC 방법에 의해 분석함에 있어서 GLC의 기술적 재평가를 하고자 시험 하였든바 1. 우선 여러식품들의 단백질 질소함량을 조사하여 GLC 분석에 필요한 시료량을 정하였으며 2. GLC에 주입한 17종 아미노산들이 대하여 조사한 결과 Arginine, Cystine, Histidine, Tyrosine을 제외한 13종만이 주입한 량에 비례하여 detector response 를 얻었다. 3. 13종 아미노산에 대한 RMR 치(値)를 얻었다. 4. 아미노산에 대한 recovery 검정(檢定)을 하였든바 거의 100% 가까이 recover되었으며, 가수분해가 recovery에 미치는 영향을 조사하였든바 별 영향이 없었음을 알았다. 5. GLC와 ion-exchange chromatography 분석법을 비교시험하였든바 백어포 시료에 있어서는 Threonine과 Asparagine만이 두 방법에서 거의 같게 나왔고 다른 아미노산들은 GLC에서 보다 많은량이 나타났다. 6. 각식품들에 대한 단백질 아미노산함량을 측정하였든바 식품종류에 따라 그리고 보리 및 대두에 있어서는 품종에 따라서도 아미노산 함량이 다르게 나타났다.
본 연구의 질문은 다음과 같다. 글로벌 리더십 역량들은 무엇인가? 그리고 글로벌 리더십 역량들의 통합적 프레임은 무엇인가? 이 연구질문에 답하기 위하여 다음과 같은 구체적인 연구목표를 설정하였다. 첫째, 글로벌 리더십 역량(GLC)의 범위를 확인한다. 둘째, 연구자들의 동의를 얻을 수 있는 차원들을 추출한다. 셋째, 재구성된 글로벌 리더십 역량 모형을 제시한다. 글로벌 리더십 역량 및 글로벌 마인드에 관한 문헌연구와 내용분석을 통하여, 기존의 GLC들을 분류하기 위한 두가지 차원 -주체와 객체- 이 드러났다. 도출된 객체는 자신, 타인, 문화, 사업, 글로벌 세계이며, 글로벌 리더인 주체의 차원은 보다 구체적으로 인간활동의 앎/실행 과정과 인지적, 정서적, 행동적 측면으로 세분화되었다. 기존의 GLC는 두가치 차원에 따라 다시 틀지워지고 재정렬되었다. 그 결과, 11개의 무리로 분류된 새로운 GLC틀이 제시되었다. 앎에 관련된 GLC군으로서 개인적, 사회적, 문화적, 사업적 감각과 글로벌 마음가짐이 포함되었고, 실행에 관련된 GLC군으로서 개인적, 사회적, 문화적 사업적 탁월함과 글로벌 변화가 포함되었다. 그리고 개인의 특성은 앎과 실행 과정의 핵심에 위치하였다. 마지막으로, 본 연구의 의의와 시사점, 그리고 향후 연구에 관한 제언이 제시되었다.
단백질의 serine이나 threonine의 수산기에 N-acetyl-${\beta}$-D-glucosamine (O-GlcNAc)으로 변형되는 당쇄는 대부분의 진핵세포에서 광범위하게 일어나는 번역 후 수식의 일종으로 여러 세포 내 현상에 관여하고 있다. O-GlcNAc의 변형정도는 O-GlcNAc transfearse (OGT)와 O-linked N-acetyl-${\beta}$-D-glucosaminidase (O-GlcNAcase)에 의해 조절된다. O-GlcNAcase의 효소활성 조절물질을 탐색하기 위한 시험관 내 검정계를 확립하기 위해 재조합 O-GlcNAcase의 생산을 시도하였다. O-GlcNAcase 발현을 최적화하기 위한 배양조건을 검토한 결과 유도 배양온도 $30^{\circ}C$, 유도제인 L-arabinose 0.02%, 유도 배양시간 5시간 등으로 나타났다. 위의 조건에서 대장균 형질전환체를 배양하면서 한 시간 간격으로 배양액을 채취하여 세포를 파괴하고 얻은 효소용액의 활성은 배양 후 3시간에서 5시간까지는 급격히 증가하였으나 그 이후는 거의 증가하지 않았다. Western blot으로 발현된 단백질 양을 조사한 결과는 활성 그래프와 비슷한 양상을 보였다. 이렇게 생산한 O-GlcNAcase의 최적 반응조건은 pH 6.5, 반응온도 $45^{\circ}C$, 기질의 농도 2 mM, pH 6.5로 나타났다.
Park, Jung-Eun;Kwon, Hye-Jin;Kang, Yup;Kim, Young-Soo
BMB Reports
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제40권6호
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pp.1058-1068
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2007
The post-translational modifications of Ser and Thr residues by O-linked $\beta$-N-acetylglucosamine (O-GlcNAc), i.e., O-GlcNAcylation, is considered a key means of regulating signaling, in a manner analogous to protein phosphorylation. Furthermore, it has been suggested that the increased flux of glucose through the hexosamine biosynthetic pathway (HBP) stimulates O-GlcNAcylation, and that this may be responsible for many of the manifestations of type 2 diabetes mellitus. To determine whether excessive O-GlcNAcylation of target proteins results in pancreatic $\beta$ cell dysfunction, we increased nucleocytoplasmic protein O-GlcNAcylation levels in $\beta$ cells by exposing them to streptozotocin and/or glucosamine. Streptozotocin and glucosamine co-treatment increased O-GlcNAcylated proteomic patterns as assessed by immunoblotting, and these increases in nuclear and cytoplasmic protein O-GlcNAcylations were accompanied by impaired insulin secretion and enhanced apoptosis in pancreatic $\beta$ cells. This observed $\beta$cell dysfunction prompted us to examine Akt and Bcl-2 family member proteins to determine which proteins are O-GlcNAcylated under conditions of high HBP throughput, and how these proteins are associated with $\beta$ cell apoptosis. Eventually, we identified ten new O-GlcNAcylated proteins that were expressed during $\beta$ cell apoptosis, and analyzed the functional implications of these proteins in relation to pancreatic $\beta$ cell dysfunction.
The free phenolic fraction from Korean white ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) was studied by GLC/MS as trimethylsilyl and methyl derivative. Five phenolic compounds such as 2,6-ditert butyl p-crestal, phloroglucinol, protocatechuic acid, isoferulic acid, quinic acid were identified newly. And additionally 13 organic acids and hydrocarbons were also identified in the fraction.
Land cover (LC) is an important factor in socioeconomic and environmental studies. According to various studies, a number of LC maps, including global land cover (GLC) datasets, are made using polar orbit satellite data. Due to the insufficiencies of reference datasets in Northeast Asia, several LC maps display discrepancies in that region. In this paper, we performed a feasibility assessment of LC mapping using Geostationary Ocean Color Imager (GOCI) data over Northeast Asia. To produce the LC map, the GOCI normalized difference vegetation index (NDVI) was used as an input dataset and a level-2 LC map of South Korea was used as a reference dataset to evaluate the LC map. In this paper, 7 LC types(urban, croplands, forest, grasslands, wetlands, barren, and water) were defined to reflect Northeast Asian LC. The LC map was produced via principal component analysis (PCA) with K-means clustering, and a sensitivity analysis was performed. The overall accuracy was calculated to be 77.94%. Furthermore, to assess the accuracy of the LC map not only in South Korea but also in Northeast Asia, 6 GLC datasets (IGBP, UMD, GLC2000, GlobCover2009, MCD12Q1, GlobeLand30) were used as comparison datasets. The accuracy scores for the 6 GLC datasets were calculated to be 59.41%, 56.82%, 60.97%, 51.71%, 70.24%, and 72.80%, respectively. Therefore, the first attempt to produce the LC map using geostationary satellite data is considered to be acceptable.
종래에 사용해 오던 HPLC에 의한 quizalofop-ethyl의 분석법을 개선시키고, 또한 ELISA와 GLC를 이용한 새로운 quizalofop-ethyl분석법을 개발하고자 시험을 수행한 결과는 다음과 같다. ELISA 실험에서 적정배양온도는 $37^{\circ}C$였으며 배양시간은 4시간이었다. Coating antigen의 적정수준은 $20{\mu}l/ml$이며 검출 한계는 5ppb이고 회수율은 95%이상이었다. 또 GLC와 HPLC에 의한 검출한계는 5ppb, 100ppb였으며, 토양에서의 회수율은 95.4, 89.5% 이상으로 나타났다. 이상에서 보는 바와 같이 ELISA와 GLC에 의한 quizalofop-ethyl분석법이 HPLC에 의한 것보다 양호한 것으로 나타났다.
Acarviosine-glucose (AcvGlc) is an ${\alpha}$-glucosidase inhibitor and has similar inhibitory activity to acarbose in vitro. We synthesized AcvGlc by treating acarbose with Bacillus stearothermophilus maltogenic amylase and fed C57BL/6J and db/db mice with diets containing purified AcvGlc and acarbose for 1 week. AcvGlc (50 and 100 mg/100 g diet) significantly reduced plasma glucose and triglyceride levels in db/db mice by 42 and 51 %, respectively (p<0.0001). The hypoglycemic and hypotriglyceridemic effects of AcvGlc were slightly, but significantly, greater than those seen with acarbose treatment (p<0.0001) in C57BL/6J mice. In an oral glucose tolerance test, glucose tolerance was significantly improved at all time points (p<0.01). The expression of two novel glucose transporters (GLUTs), GLUT10 and GLUT12, were examined by Western blot analysis. GLUT10 was markedly increased in the db/db livers. After AcvGlc treatment, the expression of hepatic GLUT10 was decreased whereas intestinal GLUT12 was significantly increased in both strains of mice. Our results show that AcvGlc improves plasma lipid and glucose metabolism slightly more than acarbose. Regulation of hepatic GLUT10 and intestinal GLUT12 may be important in controlling blood glucose levels.
N-Acetylglucosamine kinase (GlcNAc kinase or NAGK; EC 2.7.1.59)는 GlcNAc를 인산화하여 GlcNAc-6-phosphate를 만드는 효소이다. 효소자체에 대한 자세한 연구에도 불구하고 포유류에서NAGK의 표현에 대한 연구는 거의 없다. 배양한 흰쥐의 해마신경세포에서 NAGK은 세포체/가지돌기 영역에서 클러스터(cluster)를 형성한다. 본 연구에서는 가지돌기의 긴 축에서부터 가쪽으로 돌출되는 NAGK 클러스터에 대하여 연구하였다. 배양한 해마신경세포를 NAGK와 다양한 연접표지단백질에 대한 항체로 이중염색한 결과 NAGK 클러스터가 가지돌기의 바닥에는 있었지만 억제성 연접후부위에는 존재하지 않았다. 또한 흰쥐 전뇌(forebrain)의 균질액(homogenate, BH), 연접체(synaptosome, S), 연접후치밀질(postsynaptic density, PSD) 분획을 NAGK 항체로 면역염색한 결과 NAGK는 연접체에는 있었지만 PSD 분획에는 존재하지 않았다. 이러한 결과들은 NAGK가 가지돌기가시(spine)의 바닥쪽으로 돌출됨을 의미한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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