In this study, bacterial strains were isolated from soils from 30 locations of Samcheok, Gangwon province. Of the isolated strains, seven showed potential plant growth promoting and antagonistic activities. Based on cultural and morphological characterization, and 16S rRNA gene sequencing, these strains were identified as Paenibacillus species. All seven strains produced ammonia, cellulase, hydrocyanic acid, indole-3-acetic acid, protease, phosphatase, and siderophores. They also inhibited the mycelial growth of Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici in vitro. The seven Paenibacillus strains enhanced a range of growth parameters in tomato plants under greenhouse conditions, in comparison with non-inoculated control plants. Notably, treatment of tomato plants with one identified strain, P. polymyxa SC09-21, resulted in 80.0% suppression of fusarium crown and root rot under greenhouse conditions. The plant growth promoting and antifungal activity of P. polymyxa SC09-21 identified in this study highlight its potential suitability as a bioinoculant.
In search of an effective biological control agent against the tomato pathogen Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, rhizospheric soil samples were collected from eight agro-ecological zones of Bangladesh. Among the bacteria isolated from soil, 24 isolates were randomly selected and evaluated for their antagonistic activity against F. oxysporum f. sp. lycopersici. The two promising antagonistic isolates were identified as Brevundimonas olei and Bacillus methylotrophicus based on morphological, biochemical and molecular characteristics. These two isolates were evaluated for their biocontrol activity and growth promotion of two tomato cultivars (cv. Pusa Rubi and Ratan) for two consecutive years. Treatment of Pusa Rubi and Ratan seeds with B. olei prior to inoculation of pathogen caused 44.99% and 41.91% disease inhibition respectively compared to the untreated but pathogen-inoculated control plants. However, treatment of Pusa Rubi and Ratan seeds with B. methylotrophicus caused 24.99% and 39.20% disease inhibition respectively. Furthermore, both the isolates enhanced the growth of tomato plants. The study revealed that these indigenous bacterial isolates can be used as an effective biocontrol agent against Fusarium wilt of tomato.
The intergenic spacer(IGS) sequence of Fusarium oxysporum have been reported to provide reliable information concerning intraspecific variation and phylogeny of fungal species. The eleven strains of Fusarium oxysporum and its formae speciales belonging to section Elegans were compared with sequencing analysis. The direct sequencing of partial IGS was carried out using PCR with primer NIGS1(5'-CTTCGCCTCGATTTCCCCAA-3')/NIGS2(5'-TCGTCGCCGACAGTTTTCTG-3') and internal primer NIGS3(5'-TCGAGGATCGATTCGAGG-3')/NIGS4(5'-CCTCGAATCGATCCTCGA-3'). A single PCR product was found for each strain. The PCR fragments were sequenced and revealed a few within species polymorphisms at the sequence level. The size of partial IGS sequencing of F. oxysporum was divided into three groups; $526{\sim}527$ bp including F. o. f. sp. chrysanthemi, cucumerinum, cyclaminis, lycopersici, and fragariae; $514{\sim}516$ bp including F. o. f. sp. lilii, conglutinans, and raphani; 435 bp for F. o. f. sp. cucumerinum from Korea. Sequence analysis of PCR products showed that transitions were more frequent than transversions as well as the average numbers of substitution per site were range 0.41% to 3.54%.
Kim, Mi-Reu;Lee, Jeong Jin;Min, Jiyoung;Kim, Sun Ha;Kim, Dae-Gyu;Oh, Sang-Keun
Korean Journal of Agricultural Science
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v.48
no.1
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pp.151-161
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2021
Fusarium wilt disease of tomato plants caused by Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici (FOL race2) is one of the most important diseases of tomatoes worldwide. In the competition between tomato and FOL, the FOL can win by overcoming the immune system of tomato plants. Resistant interaction between the FOL race2 and tomato plants is controlled by avirulence genes (AVR2) in FOL and the corresponding resistance genes (I2) in tomato plants. In this study, 7 FOL isolates (KACC) were used to test their pathogenicity, and FOL race2 was selected because it is a broad problem in Korea. The Fol40044 isolates showed the most severe pathogenicity, and the avr2 gene was also isolated and identified. Moreover, to select resistance, 20 tomato varieties were inoculated with the Fol40044, and the degree of pathogenicity was evaluated by analyzing the expression of the avr2 gene. As a result, three resistant tomato varieties (PCNUF73, PCNUF101, PCNUF113) were selected, and the expression of the avr2 gene was much lower than that of the control Heinz cultivar. This result shows that the screening assay is very efficient when the avr2 gene is used as a marker to evaluate the expression level when selecting varieties resistant to tomato wilt disease. Based on these results, it is possible to isolate the I2 gene, which exhibits resistance and molecular biological interactions with the AVR2 gene from the three tomato-resistant varieties. The I2 gene provides breeders more opportunities for Fusarium disease resistance and may contribute to our understanding of their interactions with the FOL and host plant.
To screen antagonistic fungi against plant pathogens, dual culture assay (DCA) and culture filtrate assay (CFA) were performed with unknown soil-born fungi. Among the different fungi isolated and screened from the soil, fungal isolate ANU-301 successfully inhibited growth of different plant pathogenic fungi, Colletotrichum acutatum, Alternaria alternata, and Fusarium oxysporum, in DCA and CFA. Morphological characteristics and rDNA internal transcribed spacer sequence analysis identified ANU-301 as Aspergillus terreus. Inoculation of tomato plants with Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (FOL) induced severe wilting symptom; however, co-inoculation with ANU-301 significantly enhanced resistance of tomato plants against FOL. In addition, culture filtrate (CF) of ANU-301 not only showed bacterial growth inhibition activity against Dickeya chrysanthemi (Dc), but also demonstrated protective effect in potato tuber against soft rot disease. Gas chromatography-tandem mass spectrometry analysis of CF of ANU-301 identified 2,4-bis(1-methyl-1-phenylethyl)-phenol (MPP) as the most abundant compound. MPP inhibited growth of Dc, but not of FOL, in a dose-dependent manner, and protected potato tuber from the soft rot disease induced by Dc. In conclusion, Aspergillus terreus ANU-301 could be used and further tested as a potential biological control agent.
Since many pesticides cause various health and environmental problems, alternative measures to replace them are needed, and the bacteria producing the antifungal substances can be one of them. In this study, several rhizobacteria were isolated and their antifungal activities against some important plant pathogenic fungi were examined. Pseudomonas otitidis TK1 and Paenibacillus peoriae RhAn32 inhibited the growth of Fusarium oxysporum f. sp. niveum and F. oxysporum f. sp. lycopersici by 49.8% and 45.6%, and 45.1% and 48.3%, respectively compared to those of the control. P. peoriae RhAn32 also decreased the growth of F. oxysporum f. sp. raphani by 37.5%. This growth inhibition might be due to the production of antifungal substances, such as siderophore, hydrogen cyanide and chitinase, which were produced by these rhizobacteria. P. otitidis TK1 also produced plant growth hormones indole acetic acid and indole butyric acid at $293.41{\mu}g/mg$ protein and $418.53{\mu}g/mg$ protein, respectively. When P. otitidis TK1 and B. cereus TK2 were inoculated together with F. oxysporum f. sp. lycopersici to the 4 weeks grown tomato seedlings and incubated additional 8 weeks, the stem lengths of tomato increased up to 45.7% and 55.3% and root lengths were raised to 64.9% and 60.8%, respectively than those of the control group. The wet weights increased by 118% and 182%, respectively compared to the control group.
The potential of. nonpathogenic Fusarium oxysporum strain Avr5, either alone or in combination with chitosan and Bion, for inducing defense reaction in tomato plants inoculated with F. oxysporum f. sp lycopersici, was studied in vitro and glasshouse conditions. Application Bion at concentration of 5, 50, 100 and $500{\mu}g$/ml, and the highest concentration of chitosan reduced in vitro growth of the pathogen. Nonpathogenic F. oxysporum Avr5 reduced the disease severity of Fusarium wilt of tomato in split plants, significantly. Bion and chitosan applied on tomato seedlings at concentration $100{\mu}g$ a.i./plant; 15, 10 and 5 days before inoculation of pathogen. All treatments significantly reduced disease severity of Fusarium wilt of tomato relative to the infected control. The biggest disease reduction and increasing tomato growth belong to combination of nonpathogenic Fusarium and Bion. Growth rate of shoot and root markedly inhibited in tomato plants in response to tomato Fusarium wilt as compared with healthy control. These results suggest that reduction in disease incidence and promotion in growth parameters in tomato plants inoculated with nonpathogenic Fusarium and sprayed with elicitors could be related to the synergistic and cooperative effect between them, which lead to the induction and regulation of disease resistance. Combination of elicitors and non-pathogenic Fusarium synergistically inhibit the growth of pathogen and provide the first experimental support to the hypothesis that such synergy can contribute to enhanced fungal resistance in tomato. This chemical could provide a new approach for suppression of tomato Fusarium wilt, but its practical use needs further investigation.
Effects of chitosan on growth of tomato plant, and suppression of Fusaruim wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici and late blight casued by Phytophthora infestans, were examined. Both late blight and fusarium wilt were suppressed by spray and irrigation of chitosan, respectively. Inhibition of mycelial growth was not greatly affected by molecular size of chitosan but, concentration dependent effects was observed. Ninty percent of P. infestans and 80% of F. oxysporum f. sp. lycopersici of mycelial growth was inhibited by 1,000 ppm of chitosan (MW 30,000~50,000) when amended in plate media. Induction of defense-related gene expression in plant by chitosan treatments were observed when chitosan treated tobacco and tomato RNA samples were hybridized with several defense-related genes as probes. The results revealed that $\beta$-1,3-glucanase and chitinase genes were strongly induced, while pathogenesis-related protein-1, 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase, anionic peroxidase, phenylalanine ammonia lyase genes were weakly induced by chitosan treatment. These results suggest that chitosan have dual effects on these host-pathogen interactions. Possible roles of chitosan in suppression of tomato diseases by inhibition of mycelial growth and activation of plant defense responses are discussed.
The experiments were conducted to study the distribution of wilt of strawberry caused by Fusarium in Korea, the characters of the causal fnngus and its control. The results obtained are summarized as follows. 1. Wilt of strawberry has been found in Gimhae and Samrangjin, Gyeongnam province a few years ago. This disease has been spreading year after year, and observed on farms in most of the strawberry-growing areas in Korea. 2. The fungus was isolated frequently from the crowns and petioles of diseased straw berry plants, and the fungus belonging to Fusariun oxysporum in terms of the morphological characteristics of macroconidia, microconidia, chlamydospore and conidiophore on V-8 Agar. 3. The macroconidia formation of the fungus varied remarkably with the Isolates and kinds of medium tested. However. all isolates abundantly produced macroconidia on V-8 Agar. 4. The cross-inoculation tests with several forma specialis of F. oxysporum to cucumber, tomato, watermelon, luffa, cabbage, melon and strawberry were carried out. The isolates from strawberry viz. Kodama's F. oxysporum f. sp. fragariae and S-1 of the authors were pathogenic to only strawberry. The fungus was also similar in morphology and symptoms to Kodama's and Winks' isolate of F. oxysporum f. sp. fragariae. Therefore, the fungus is identified as Fusarium oxysporum Schl. f. sp. fragariae Winks & Williams. 5. The most effective fungicides were Benomyl and Homai for inhibiting sporulation and mycelial growth of the fungus. 6 The cultivar Kurumae 35, Himiko, Senga gigana and Daehak I were resistant, whereas Hokowase, Instiate Z4, Juspa, Puget beauty and Marshall were susceptible to the fungus with artificial inoculation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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