In the search for new naturally occurring angiogenic inhibitory we found that culture broths from two unidentified fungal strains exerted potent inhibitory activities on capillary-like tube formation of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) in vitro. Two active compounds were isolated by bioassay-guided separation and their structures were identified as gliotoxin (1) and its derivative methylthiogliotoxin (2) by spectroscopic analyses. These compounds significantly inhibited the migration of HUVEC assessed by in vitro wounding migration assay and exhibited at least 10 times more potent inhibition of proliferation of HUVECs as compared with that of cancer cell lines such as HeLa, MCF-7, and KB 3-1 cells. Especially, gliotoxin having disulfide group exerted more potent activities than methylthiogliotoxin, suggesting that gliotoxin could be a useful compound for further study as an anti-angiogenic agent.
Degradation of butylbenzyl phthalate (BBP) by the white rot fungus Pleurotus ostreatus and the activities of some degrading enzymes were examined in two different media containing 100 mg/l of the compound. P. ostreatus pre-grown for 7 days in complex YMG medium was able to completely degrade BBP within an additional 24 h but degraded only 35 mg/l of BBP in 5 days of incubation in minimal medium. Fungal cell mass in the culture in YMG medium was higher in the presence than in the absence of BBP. The esterase activity of the fungal culture in YMG medium was higher than that in minimal medium and increased with the addition of BBP. On the contrary, laccase activity was higher in minimal medium and it did not increase upon the addition of BBP. General peroxidase activity increased for a few days after the addition of BBP to both media. The degradation of BBP and its metabolites by P. ostreatus thus may be attributed mostly to esterase rather than lignin-degrading laccase. In addition, the activities of the enzymes involved in BBP degradation and their changes varied significantly in the different media and culture conditions.
The fungal isolate Isaria javanica pf185 has potential as a mycopesticide because it demonstrates insecticidal activity against the green peach aphid and antifungal activity against Colletotrichum gloeosporioides. For commercialization of this isolate, determination of the optimal and least expensive culture conditions is required; however, these data are not currently available. This study describes the conditions for optimal development of conidia and production of metabolites for the biocontrol of the fungal pathogen. The optimal culture conditions were examined using cultures on solid agar and liquid media. High growth temperature enhanced spore formation but reduced antifungal activity in both solid and liquid media. The highest spore yield was obtained in a medium containing glucose as a carbon source and yeast extract as a nitrogen source. Soybean powder and wheat bran were effective nitrogen sources that promoted spore production and antifungal activity of the isolate. These results revealed the basic, cost-effective growth media for commercial production of a biopesticide with insecticidal and antifungal properties for use in integrated pest management.
Quorum sensing (QS)-mediated infections cause severe diseases in human beings. The control of infectious diseases by inhibiting QS using antipathogenic drugs is a promising approach as antibiotics are proving inefficient in treating these diseases. Marine fungal (Pestalotiopsis sydowiana PPR) extract was found to possess effective antipathogenic characteristics. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the fungal extract against test pathogen Pseudomonas aeruginosa PAO1 was 1,000 ㎍/ml. Sub-MIC concentrations (250 and 500 ㎍/ml) of fungal extract reduced QS-regulated virulence phenotypes such as the production of pyocyanin, chitinase, protease, elastase, and staphylolytic activity in P. aeruginosa PAO1 by 84.15%, 73.15%, 67.37%, 62.37%, and 33.65%, respectively. Moreover, it also reduced the production of exopolysaccharides (74.99%), rhamnolipids (68.01%), and alginate (54.98%), and inhibited the biofilm formation of the bacteria by 90.54%. In silico analysis revealed that the metabolite of P. sydowiana PPR binds to the bacterial QS receptor proteins (LasR and RhlR) similar to their respective natural signaling molecules. Cyclo(-Leu-Pro) (CLP) and 4-Hydroxyphenylacetamide (4-HPA) were identified as potent bioactive compounds among the metabolites of P. sydowiana PPR using in silico approaches. The MIC values of CLP and 4-HPA against P. aeruginosa PAO1 were determined as 250 and 125 ㎍/ml, respectively. All the antivirulence assays were conducted at sub-MIC concentrations of CLP (125 ㎍/ml) and 4-HPA (62.5 ㎍/ml), which resulted in marked reduction in all the investigated virulence factors. This was further supported by gene expression studies. The findings suggest that the metabolites of P. sydowiana PPR can be employed as promising QS inhibitors that target pathogenic bacteria.
최근 기후의 급속한 변화에 따라서 식품과 농산물에 Aspergillus, Fusarium 및 Penicillium속에 해당하는 곰팡이에 의한 오염이 빈번하고 이들에 의해 생성되는 aflatoxins, fumonisins, ochratoxins, patulin, trichothecenes, zearalenone등의 곰팡이 독소로 인해서 인간의 건강에 위해를 끼치고 또한 경제적인 손실을 가져오게 하고 있다. 최근 건강에 대한 소비자의 관심으로 인하여 기존에 사용되고 있는 프로피온산 및 소브산과 같은 보존료에 대한 거부감이 증가하고 있어 천연의 소재로부터 이를 대체할 만한 항진균제의 개발이 필요한 상황이다. 본 총설에서는 곰팡이의 생육 및 독소 생성을 제어하기 위한 생물학적 방법으로 유산균의 역할에 대하여 살펴보고자 하였다. 최근의 연구에 의하면 유산균은 저분자 화합물인 유기산, reuterin, 단백질 유래 화합물, 하이드록시 지방산, 페놀 화합물과 같은 다양한 대사산물을 통하여 곰팡이의 생육을 효과적으로 억제시키고 있으며, 또한 유산균의 세포벽 구성성분과의 흡착, 곰팡이 독소의 분해 및 곰팡이 독소의 생산 저해 등을 통하여 곰팡이 독소의 생산을 감소시키고 있는 사실이 제시되고 있다. 유산균은 다양한 종류를 포함하고 있으며 다양한 대사산물을 생산하고 있으므로 이를 바탕으로 효과적으로 곰팡이의 생육 및 독소 생산을 제어할 수 있는 잠재력 갖추고 있으므로, 유산균은 식품에 있어서 곰팡이의 생육을 조절하는 소재로서 주목 받을 것으로 기대된다.
Endophytic fungi are known for the production of valuable metabolites, but information on the gibberellin production capacity of this group is limited. We isolated 9 endophytic fungi from the roots of salt-stressed soybean plants and screened them on waito-c rice, in order to identify plant growth promoting fungal strains. The fungal isolate TK-2-4 gave maximum plant length (20.35 cm) promotion in comparison with wild-type Gibberella fujikuroi (19.5 cm). In a separate experiment, bioassay of TK-2-4 promoted plant length and biomass of soybean cultivar Taegwangkong. The TK-2-4 culture filtrate was analyzed for the presence of gibberellins, and it was found that all physiologically active gibberellins, especially $GA_4$ and $GA_7$, were present in higher amounts ($GA_1$, 0.11 ng/ml; $GA_3$, 2.91 ng/ml; $GA_4$, 3.21 ng/ml; and $GA_7$, 1.4 ng/ml) in conjunction with physiologically inactive $GA_9$ (0.05 ng/ml), $GA_{12}$ (0.23 ng/ ml), $GA_{15}$ (0.42 ng/ml), $GA_{19}$ (0.53 ng/ml), and $GA_{20}$ (0.06 ng/ml). The fungal isolate TK-2-4 was later identified as a new strain of Phoma herbarum, through the phylogenetic analysis of 28S rDNA sequence.
Plant growth promoting fungi (PGPF) are well known for the production of useful secondary metabolites. However, limited information is available on the gibberellin (GA) production capacity of PGPF of endophytic origin. In the current study, 15 fungal endophytes were isolated from the roots of Crown daisy, and then screened on Waito-c rice, in order to identify plant growth promoting fungi. The fungal isolate MH7 significantly increased the shoot length (12.1 cm) of Waito-c in comparison with control treatment (7.9 cm). In a separate experiment, the culture filtrate (CF) of MH7 significantly promoted the growth attributes of Crown daisy. The MH7 CF was analyzed for gibberellins and it contained all physiologically active gibberellins ($GA_1$, 1.37 ng/ml; $GA_3$, 5.88 ng/ml; $GA_4$, 8.62 ng/ml; and $GA_7$, 2.05 ng/ml) in conjunction with physiologically inactive $GA_9$ (0.83 ng/ml), $GA_{12}$ (0.44 ng/ml), $GA_{15}$ (0.74 ng/ml), $GA_{19}$ (1.16 ng/ml), and $GA_{20}$ (0.98 ng/ml). The CF of MH7 produced higher amounts of $GA_3$, $GA_4$, $GA_7$, $GA_9$, and $GA_{12}$ than wild-type Fusarium fujikuroi, which was used as a control for GA production. The fungal isolate MH7 was later identified as a new strain of Penicillium on the basis of its morphological characteristics and phylogenetic analysis of the 188 rDNA sequence.
The scale-up criterion of constant oxygen mass transfer coefficient ($k_La$) was applied for the production of itaconic acid (IA) in a 50 L pilot-scale fermentor by the fungal cells of Aspergillus terreus. Various operating conditions were examined to collect as many $k_La$ data as possible by adjusting the stirring speed and aeration rate in both 5 L and 50 L fermentor systems. In the fermentations performed with the 5 L fermentor, the highest IA production was obtained under the operating conditions of 200 rpm and 1.5 vvm. Accordingly, we intended to find out parallel agitation and aeration rates in the 50 L fermentor system, under which the $k_La$ value measured was almost identical to that ($0.02sec^{-1}$) of the 5 L system. The conditions of 180 rpm and 0.5 vvm in the 50 L system turned out to be optimal for providing almost the same volumetric amount of dissolved oxygen (DO) into the fermentor, without causing shear damage to the producing cells due to excessive agitation. Practically identical fermentation physiologies were observed in both fermentations performed under those respective operating conditions, as demonstrated by nearly the same values of volumetric ($Q_p$) and specific ($q_p$) IA production rates, IA production yield ($Y_{p/s}$), and specific growth rate (${\mu}$). Specifically, the negligible difference of the specific growth rate (${\mu}$) between the two cultures (i.e., $0.029h^{-1}$ vs. $0.031h^{-1}$) was notable, considering the fact that ${\mu}$ normally has a significant influence on $q_p$ in the biosynthesis of secondary metabolites such as itaconic acid.
This study was aimed at evaluating the growth promoting effect of symbiotic algal polyol (ribitol) and plant hormones on the lichen-forming fungi (LFF), Ramalina farinacea (CH050010 and 40403) and Ramalina fastigiata. The addition of ribitol to basal (malt-yeast extract) medium enhanced the relative growth rates of all three LFF. R. farinacea (CH050010), R. farinacea (40403) and R. fastigiata (H06127) showed 35.3%, 29.0% and 29.3% higher growth rates, respectively, compared to the control. IBA (indole-3-butyric acid) and TIBA (2,3,5-tridobenzoic acid) also increased growth rates of the LFF by 34 to 64% and 7 to 28%, respectively, compared to the control. The combination of ribitol with IBA or TIBA synergistically increased the growth of all LFF. For example, ribitol and IBA treatments increased growth rates of R. farinacea (CH050010), R. farinacea (40403) and R. fastigiata (H06127) by 79.4%, 40.3% and 72.8% in, respectively, compared to those grown on the basal medium. The stimulating effect of ribitol and IBA on the LFF growth induced vertical development of the fungal mass in culture. We suggest that lichen-forming fungal growth of Ramalina lichens can be stimulated aposymbiotically by supplementing polyols and plant hormones to the basal medium in the mass production of lichen secondary metabolites under large scale culture conditions.
서해안에 자생하는 갯메꽃의 뿌리로부터 8종의 내생진균을 분리하였다. 그리고 식물생장촉진검정을 확인하기 위하여 분리된 내생진균의 배양여액을 난장이벼에 처리하였다. Cs-9-7 균주의 배양여액 처리구에서 난장이벼의 생장촉진활성이 가장 높았다. 그리고 Cs-9-7 균주의 배양여액은 GC/MS-SIM을 사용하여 이차대사산물을 분석하였을 때, $GA_3$(1.229 ng/mL), $GA_4$(3.535 ng/mL), $GA_7$(1.408 ng/mL) 그리고 $GA_{12}$(0.378 ng/mL)의 지베렐린이 확인되었다. 그리고 분리된 내생진균의 동정을 위하여, 유니버샬 프라이머 ITS1과 ITS4를 사용하여 ITS 영역의 염기서열을 결정하였다. Cs-9-7 균주의 동정결과 A. tubingensis와 99%의 유사성이 확인되었으며, A. tubingensis Cs-9-7라고 명명하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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