Yun, Yeo Hong;Koo, Ja Sun;Kim, Seong Hwan;Kong, Won Sik
Mycobiology
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제43권3호
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pp.327-332
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2015
Phenylalanine ammonia-lyase (PAL) gene is known to be expressed in plants, and is involved in the differentiation, growth and synthesis of secondary metabolites. However, its expression in fungi remains to be explored. To understand its expression in mushroom fungi, the PAL gene of the edible mushroom Flammulina velutipes (Fvpal) was cloned and characterized. The cloned Fvpal consists of 2,175 bp, coding for a polypeptide containing 724 amino acids and having 11 introns. The translated amino acid sequence of Fvpal shares a high identity (66%) with that of ectomycorrhizal fungus Tricholoma matsutake. Distinctively, the Fvpal expression in the mycelium was higher in minimal medium supplemented with L-tyrosine than with other aromatic amino acids. During cultivation of the mushroom on sawdust medium, Fvpal expression in the fruit body correspondingly increased as the mushroom grew. In the fruiting body, Fvpal was expressed more in the stipe than in the pileus. These results suggest that F. velutipes PAL activity differs in the different organs of the mushroom. Overall, this is first report to show that the PAL gene expression is associated with mushroom growth in fungi.
The antioxidative activities of the water solution of crude extract from edible mushroom enokitake Flammulina velutipes were compared with those of ascorbic acid and ascorbic acid 6-palmitate in oil-in-water (O/W) emulsions of cod liver oil. Oxidation of the emulsions was carried out at 40 and $50^{\circ}C$ in the dark. The antioxidant activities were measured by in vitro assay against oxygen uptake, 2-thiobarbituric acid value, hydroperoxide formation of the oils. Also, residual docosahexaenoic acid content was measured as indices of lipid oxidation. The cod liver oil in O/W emulsions with added enokitake crude extract (ECE) was significantly more stable against lipid oxidation than the control emulsions without the extract in terms of any oxidation indices used. Moreover, ECE provided remarkable antioxidative properties to eicosapentaenoic acid ethyl ester in emulsion system. These observations demonstrate that F. velutipes can be used as a natural antioxidant, which effectively prevents oxidation of polyunsaturated oils in emulsion system.
식용버섯인 팽이버섯(Flammulina velutipes)으로부터 적혈구 응집능력을 갖는 렉틴(flammulina velutipes lectin, FVL) FVL-1과 FVL-2을 정제하였다. FVL-1과 FVL-2의 분자량은 각각 10.6 kDa과 37 kDa으로 추정되었다. FVL-2는 사람적혈구의 경우 모든 혈액형에서 응집현상을 나타내었으나, FVL-1은 O형의 적혈구에 대하여 높은 상대활성도를 나타내었다. 렉틴의 hemagglutination inhibition test 결과 FVL-1과 FVL-2는 fetuin, bovine submaxillary mucin, asialofetuin, porcine stomach mucin에 의해 적혈구 응집력이 저해되었다. FVL-1은 1.56 mM $Cu^{2+}$에서 적혈구 응집력이 저해되었으며, $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Ca^{2+}$, $Fe^{2+}$ 등에서도 저해되었다. 반면 FVL-2는 금속 이온에 대한 저해가 나타나지 않았다. pH 안정성에 있어서 FVL-1은 pH $5{\sim}11$에서 안정하였으며, FVL-2는 pH 4까지의 범위에서 안정하였다. 온도 안정성에 있어서는 FVL-1과 FVL-2 각각 $55^{\circ}C$, $45^{\circ}C$까지 안정하였다. FVL-1은 단백질이었으며 FVL-2는 당 단백질이었다.
팽이버섯(Flammulina velutipes) 25품종의 유전체 재분석 데이터를 표준유전체(KACC42781)와 비교하여 genomewide single nucleotide polymorphism (SNP)를 선발하였다. 균주에 따른 mapping율의 차이는 균주간 변이를 반영하였으며, genome-wide SNP분포는 homozygous SNP, heterozygous SNP로 구분되었으며 모두 균주에 따른 변이가 크게 나타났다. 수집균주들 사이의 유연관계를 살펴보기 위해, 계통수를 그려본 결과, Group I은 F. velutipes var. 계통인 ASI 4062, 4148, 4195이 묶여지고, Group II는 ASI 4188 F. elastica, ASI 4190 F. fennae, ASI 4194 F. rossica의 다른 종이 별도의 그룹을 형성하였다. 그 외 F. velutipes 19개 계통은 같은 그룹으로 나타났으며 그 유전적 자리를 잘 반영하였다. 한편 백색 group과 갈색 group을 유연관계로 분석하고자 시도하였으나 색깔에 따른 group은 이루어지지 않았다. 한국 백색 품종인 ASI 4210, 4166, 4178과 일본 백색 품종인 ASI 4209, 4167을 분석한 결과 phylogenetic tree상에서 한국 백색 품종과 일본 백색 품종간의 유전적 상동성이 매우 높음을 확인할 수 있었다.
버섯은 예전부터 단백질, 당질, 비타민, 무기질 등 일반 영양소들이 다량 함유되어 있을 뿐 아니라 다양한 약리작용을 가지고 있기 때문에 예로부터 민식용 및 민간요법으로도 많이 이용되어 왔다(17). 또한 현재에는 건강식으로 다양하게 이용되고 있다. 본 연구는 여러 가지 버섯 중, 팽이버섯의 추출물을 이용하여 이의 항암 활성을 실시하였다. 팽이버섯(Flammulina velutipes)의 항암활성을 검증하기 위하여 in vitro 실험으로 wound healing 활성 실험을 하였으며, in vivo 실험으로 마우스를 이용한 항암모델 실험을 실시하였다. Wound healing 활성 실험 결과 팽이버섯 추출물의 농도를 0-100 ug/mL로 처리함에 따라 B16 세포의 운동성이 감소하는 것을 알 수 있었다. 이를 바탕으로 마우스를 이용하여 항암 모델에 적용한 결과 B16 세포로 인해 형성되는 colony가 팽이버섯 추출물을 처리한 군에서 약 60% 내외로 현저히 감소하는 것을 알 수 있었다. 본 실험 결과는 팽이버섯 추출물의 항암 활성을 확인 한 것으로 향후 이의 추출물을 이용한 세포신호전달과정 등에 관한 연구와 건강기능성식품의 소재로의 제품 개발에 유용하게 사용될 수 있음을 나타내는 주요한 자료로 판단된다.
본 연구에서는 Flammulina velutipes var. lupinicola의 laccase 유전자를 동정하고 최적 활성 pH, 온도, 시간을 분석하고 하였다. F. velutipes var. lupinicola 유전체에서 선별된 laccase 유전자 서열을 바탕으로 구리 결합 부위 및 신호 펩타이드 분석을 수행한 결과 5종의 laccase 유전자(g1934, g1937, g2415, g2539, g5858)를 동정하였다. 5종의 선별된 laccase 유전자 크기는 1,488~1,662 bp로 확인되었고, cDNA 염기서열 분석 결과 14~17개의 인트론이 확인되었다. Laccase 유전자의 신호펩타이드로 예측된 절단 부위는 N-말단으로부터 20~34 bp 사이에 위치하는 것으로 확인되었다. F. velutipes var. lupinicola laccase의 활성 특성을 규명하기 위해 분리 정제를 수행하였으며, Zymogram을 수행하여 0.2 M 및 0.3 M NaCl과 1.6 M 및 1.7 M의 ammonium sulfate로 정제된 단백질에서 5개의 laccsae 활성 밴드를 확인하였다. pH, 온도 및 시간별로 분리 정제된 단백질의 최적 활성을 분석한 결과, 반응의 최적 pH는 5.5이고 최적 온도는 40℃로 확인되었다. 따라서 본 연구를 통하여 확인된 F. velutipes var. lupinicola 유전체의 laccase 유전자 구조 및 활성에 대한 특성은 laccase를 이해하는 데 도움이 될 것이며 추가 연구를 통하여 향후 다양한 산업적 활용이 가능할 것으로 사료된다.
일반성분 중 조회분 함량은 버섯이 균사체 보다 높은 조회분 함량을 보였다. 조단백질은 모든 시험구에서 19% 내외로 나타났고, 조지방 함량은 동충하초 균사체에서 가장 높았으며, 조섬유는 팽이버섯에서 가장 높게 나타났다. 가용성물질소물은 팽이버섯균사체와 동충하초균사체에서 60% 이상의 함량을 나타내었다. 각 시료별 총단백질과 총당의 구성 비율은 팽이버섯과 팽이버섯 균사체의 단백다당류의 구성이 다름을 확인하였다. 시료별 핵산관련물질 함량은 팽이버섯에서 5'-GMP, 5'-XMP, 5'-IMP순으로 높게 나타났고, 팽이버섯 균사체는 5'-XMP, 5'-GMP, 5'-IMP, 동충하초 균사체는 5'-XMP, 5'-IMP, 5'-GMP순으로 높게 나타났다. 모든시료에서 각각 17종의 아미노산이 검출되었다. 각 시료의 총 아미노산 함량을 살펴보면 팽이버섯 18,980 mg%, 팽이버섯 균사체 17,604 mg%, 동충하초 균사체 18,429 mg%로 나타났고 모든 시료에서 glutamic acid 함량이 가장 높았다. 유리아미노산 함량도 구성아미노산과 유사하게 팽이버섯, 팽이버섯 균사체, 동충하초 균사체 순으로 높게 나타났다. 본 실험결과 팽이버섯, 팽이버섯 균사체 및 동충하초 균사체는 핵산관련 물질과 아미노산 함량이 높게 나타나, 아미노산 함유 식품 개발에 적합한 자원으로 활용도가 기대된다.
To find antitumor components with low toxicity in natural products of Korean Basidiomycete, the carpophores of Flammulina velutipes (Fr.) Sing. were extracted with hot water for eight hours. The extract was purified by dialyzing through Visking tube and a protein-bound polysaccharide fraction was obtained as pale brownish amorphous powder after it was freeze-dried. The fraction was examined for antitumor activity against sarcoma 180 implanted subcutaneously in the left groins of I.C.R. mice. The inhibition ratio of this fraction of against the tumor was 62.3% at the dose of 10 mg/kg/day for the period of ten days. The tumors in three of the ten treated mice were completely regressed.
팽이버섯 1주기를 수확한 폐배지 톱밥을 버섯재배 용으로 재활용 할 수 있는지를 알아보고자 팽이버섯을 재배한 침엽수재 의 톱밥을 현미경적 관찰을 통해 그 분해정도와 분해양태를 파악하였다. 아울러 팽이버섯 재배에 사용된 톱밥의 수종 식별도 실시하였다. 팽이버섯 재배용으로 사용된 톱밥의 수종은 대부분 소나무속 경송류로 식별되었고 극히 일부만 미송 (Douglas-fir)톱밥이 존재하였다. 팽이버섯 1주기를 수확한 폐배지 소나무 톱밥에는 균사에 노출된 부분과 방사조직에서 균사의 밀도가 높게 나타났다. 팽이버섯균의 공격을 받은 세 포벽은 박벽화현상과 침식현상을 보였으나, 이 같은 부후양태를 보인 세포벽은 극히 일부에 지나지 않았다. 이상의 현미경 관찰결과 팽이버섯을 1주기 수확한 소나무 톱밥은 버섯재배용으로 재활용하기에 충분한 세포벽 물질을 보유하고 있는 것으로 나타났다.
발효된 버섯배지 및 부엽토 등으로부터 80여 종의 균주를 1차 분리하여 CMCase, amylase 및 protease활성이 높고 버섯질병균주에 대한 항균활성이 높으면서 표고버섯 및 팽이버섯의 생육에는 전혀 영향을 미치지 않는 HJ-57 항균미생물을 최종 분리균주로 선정하였다. 최종 선정한 HJ-57 항균미생물을 동정한 결과 Bacillus sp. HJ-57로 밝혀졌으며, 배양을 위한 배지의 초기 pH는 pH 7, 배양온도는 $35^{\circ}C$가 최적인 것으로 나타났다. Bacillus sp. HJ-57균주는 12 hr 배양하였을 때는 약간의 항균활성을 나타내었지만, 배양 36~48 hr 배양하였을 때는 비교적 높은 항균활성을 나타내었다. Bacillus sp. HJ-57 항균미생물은 팽이버섯 재배농가에서 사용하는 콘코프 함유배지상에서도 버섯질병균주인 세균 및 곰팡이에 대하여 매우 높은 항균활성을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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