향상된 인디고이드 생산능력을 갖는 코리네박테리움 유래의 변이 플라빈-함유 모노옥시게나제(cFMO)를 개발하기 위하여, cFMO 효소의 상동성모델을 이용하여 말토오스-결합단백질(MBP)과 융합된 4가지 변이체(F170Y, A210G, A210S, T326S)를 제작하고 그 생화학적 특징을 밝혔다. 정제된 MBP-T326S는 최적 활성을 위하여 야생형보다 고농도의 FAD ($100{\mu}M$)를 요구하며, $100{\mu}M$의 FAD 첨가조건에서 $k_{cat}/K_m$이 3.8배 증가되었다. 인돌 옥시게나제 활성은 야생형의 63-77%를 나타냈다. MBP-T326S는 기질이 존재하지 않을 경우 쓸모없는 NADPH 산화효소 활성이 매우 낮은 수준을 보여주었다(21-24%). T326S이외의 변이 단백질들은 야생형에 비하여 $K_m$은 비슷하며 $k_{cat}/K_m$은 증가하였다. MBP-F170Y와 -A210S 변이단백질은 인돌 옥시게나제 활성이 각각 3.1배, 2.9배 증가하였다. 2.5 g/l의 트립토판을 함유한 LB배지에서 인디고이드 생산을 시험했을 때, 야생형 cFMO를 함유한 대장균은 684 mg/l의 인디고와 104 mg/l의 인디루빈을 생산한 반면, T326S를 함유한 세포는 1,040 mg/l의 인디고와 112 mg/l의 인디루빈을 생산하였다. 이전의 결과인 Methylophaga 유래의 FMO를 발현하는 대장균에서 가장 높은 수준인 920 mg/l의 인디고를 생산한 것과 비교하면, 본 연구결과는 인디고 생산이 13% 높은 수준이였다. 상동성 모델링에 기반한 cFMO의 단백질공학은 인디고이드 생산균을 개발하는데 보다 더 논리적인 전략을 제시하였다.
소의 갑상선에 있는 xanthine oxidase 효소도 flavin adenine dinucleotide(FAD), 모리브덴 및 철을 cofactor로서 가지고 있었으며 그 비율은 1 : 0.36 : 1.6이었다 갑상선 xanthine oxidase의 분자량은 gel filtration과 gel electrophoresis방법으로 측정하였을 때 우유에서 추출한 xanthine oxidase의 분자량과 큰 차이가 없었다. 그 효소의 활성도는 pH7.8에서 가장 높았고 isoelectric point는 electrofocusing으로 측정하였을 때 pH 6.2 였다. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 실험 결과는 소의 갑상선에서 추출된 xanthine oxidase가 세개의 subunit로 분해되었음을 지적했고, 최소 단위분자량 65,000정도의 polypeptide 4개로서 완전한 xanthine oxidase 한 분자를 구성하고 있을 가능성을 보였다. 갑상선 호소의 absorption spectrum을 우유에서 추출된 효소와 비교하였을 때 상당한 상이점을 나타내었다.
Even though advocates of TQM emphasize the role of TQM more than before, the interest of the public at large have decreased in recent years. In order to explain the perceptual gap between the advocates and general public, three questions were considered: 1) Is TQM a dying fad\ulcorner 2) Does TQM focus on a particular facet of management\ulcorner 3) Does TQM pursue incremental improvement, while reengineering pursue breakthrough innovation\ulcorner It is also discussed how can we extend the horizon of TQM so as to integrate new management theories into the framework of TQM.
Lee, Jeong-Dong;Bilyeu, Kristin D.;Shannon, James Grover
Journal of Crop Science and Biotechnology
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제10권4호
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pp.201-210
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2007
Soybean [Glycine max(L.) Merr.] oil is versatile and used in many products. Modifying the fatty acid profile would make soy oil more functional in food and other products. The ideal oil with the most end uses would have saturates(palmitic + stearic acids) reduced from 15 to < 7%, oleic acid increased from 23 to > 55%, and linolenic acid reduced from 8 to < 3%. Reduced palmitic acid(16:0) is conditioned by three or more recessive alleles at the Fap locus. QTLs for reduced palmitic acid have mapped to linkage groups(LGs) A1, A2, B2, H, J, and L. Genes at the Fad locus control oleic acid content(18:1). Six QTLs($R^2$=4-25%) for increased 18:1 in N00-3350(50 to 60% 18:1) explained four to 25% of the phenotypic variation. M23, a Japanese mutant line with 40 to 50% 18:1 is controlled by a single recessive gene, ol. A candidate gene for FAD2-1A can be used in marker-assisted breeding for high 18:1 from M23. Low linolenic acid(18:3) is desirable in soy oil to reduce hydrogenation and trans-fat accumulation. Three independent recessive genes affecting omega-3 fatty acid desaturase enzyme activity are responsible for the lower 18:3 content in soybeans. Linolenic acid can be reduced from 8 to about 4, 2, and 1% from copies of one, two, or three genes, respectively. Using a candidate gene approach perfect markers for three microsomal omega-3 desaturase genes have been characterized and can readily be used in for marker assisted selection in breeding for low 18:3.
새 깔짚을 사용하는 16개 농가와 깔짚을 교체하지 않는 15개 농가를 대상으로 2009년 7월부터 11월까지 5개월에 걸쳐 농가당 2회 입식 기준으로 병아리 입식 전과 출하 전 깔짚을 수거하여 주요 바이러스 병원체의 오염 실태를 조사하고, 생산성을 분석하였다. 그 결과, 조사 기간 동안 깔짚을 교체해 주는 농가의 75%(12/16농가)에서, 깔짚을 재사용하는 농가의 73%(11/15)에서 37주의 바이러스가 분리되었다. 바이러스분리 시기별로보면병아리 입식 직전계사에서3주, 육계 출하 직전 계사에서 34주가 분리되었다. 깔짚 형태로 보면 새 깔짚을 사용하는 계사에서 17주, 깔짚을 재사용하는 계사에서 20주가 분리되어 계사 내 바이러스 병원체 오염정도는 깔짚 교체여부와 크게 관련성이 없는 것으로 나타났다. 분리된 바이러스 37주는 병원체별로 보면 IBV 14주, IBDV 2주, FAdV 9주 그리고 CIAV 12주였다. 이 중 IBDV 1주와 CIAV 2주는 입식 직전 계사에서 분리되었다. 본 연구에서 조사한 31개 농장 62개 계군의 생산지수를 조사한 결과, 깔짚 교체 농가와 재활용 농가 간 생산성은 유의성이 있는 차이가 나타나지 않았다.
Acetohydroxyacid synthase (EC 4.1.3.18) catalyses the first reaction in the pathway for synthesis of the branched-chain amino acids. The enzyme is inhibited by several commercial herbicides and has been subjected to detailed study over the last 20 to 30 years. Here we review the progress that has been made in understanding its structure, regulation, mechanism, and inhibition.
Kim Hye Sun;Lee Jun Ho;Kim Eun Mee;Lee Jean Pyo;Suh Yoo Hun
한국환경성돌연변이발암원학회지
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제25권1호
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pp.19-24
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2005
The Swedish double mutation (KM670/671NL) of amyloid precursor protein (Swe-APP) is associated with early-onset familial Alzheimer's disease (FAD) and increases amyloid beta peptide production. Although APP/A/3 mediated neurotoxicity is observed both in vitro and in vivo, the relationship between mutant APP expression, A/3 production, and neuronal death observed in the brains of FAD patients remains to be elucidated. In this study, we investigated the mechanisms of Swe-APP-induced cell death in HEK293 and NGF-differentiated PC 12 cells. We found that the expression of Swe-APP induced cytochrome C relase, activation of caspase 3 in HEK 293 and NGF-differentiated PC 12 cells. We also show that the reactive oxygen species (ROS) was detected in Swe-APP expressing HEK 293 cells and NGF-differentiated PC 12 cells and that pretreatment with vitamine E attenuated the cellular death, cytochrome C release induced by Swe-APP expression, indicating the involvement of free radical in these processes. These results suggest one of possible apoptotic mechanisms of Swe-APP which could occur through cytochrome C release from mitochondria and this apoptosis inducing effects could be at least in part, due to ROS generation by Swe-APP expression.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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