Enteroviruses were identified and characterized from patients with aseptic meningitis and other enterovirus-related diseases in Chungnam, Korea from 2005 to 2006. Enteroviruses were isolated from 79 of 519 cases (15.2%) in 2005, and 37 of 386 cases (9.6%) in 2006. Based on partial VP1 sequencing, a total of 116 enterovirus isolates were resolved into 13 types. Prevalent among the Chungnam isolates were echovirus 18 and coxsackievirus B5 in 2005, and echoviruses 5 and 25 in 2006. This is the first time echoviruses 5 and 18 have been identified in Korea since enterovirus surveillance began there in 1993. The temporal distribution of enterovirus epidemics in Chungnam showed a remarkable seasonal pattern, with cases occurring during most of the three months of the summer from June to August. The highest rate of enterovirus-positive cases occurred in patients less than 1 year of age. The ratio of male to female enterovirus-positive patients was approximately 1.8:1. Comparison of the VP1 amino acid sequences of the 15 coxsackievirus B5 isolates with reference strains revealed that all Chungnam isolates are substituted at positions 23 (V231), 19 (S19G), 75 (Y75F), and 95 (N95S). Upon comparing the nine ECV5 isolates with foreign strains, it was found that only the Chungnam isolates, with the exception of Kor06-ECV5-239cn, have P at position 153 and F at position 146. The three ECV9 isolates from 2006 show alterations at amino acids 36, 148, and 154 outside of the BC-loop and at position 84 in the BC-loop, whereas the seven isolates from 2005 and the other ECV9 strains in the database only show the alteration at position 84 (D, I, N, S). The five ECV25 isolates have an S residue at position 134, whereas most of the foreign strains have an N residue.
A total of 1-0 colostrum-deprived pigs (1 or 2-day-old) and 6 pigs (35-day-old), which had been raised by natural maternal nursing, were used to study the pathogenicity of the porcine enteroviruses by the intracerebral and intramuscular routes of inoculation, which the enterovirus were isolated from the diseased pigs in Korea. The porcine enteroviruses produced an identical polioencephalomyelitis in colostrum-deprived pigs and 35-day-old pigs, which manifested clinical signs and histopathological changes. Clinically it was characterized by incoordination, rise in rectal temperature, ataxia, flaccid paralysis in all the experimental groups. Histopathologically, the lesions were present in both grey and white matter at all levels of central nervous system, though usually more severe in the grey matter. These changes were characterized by meningeal infiltration, degeneration of nerve cells, neuronophagia, diffuse and focal gliosis, glial nodules and perivascular lymphocytic infiltrations. Ganglionitis of the dorsal root ganglia was frequently observed. On the basis of the clinical and histopathological changes mentioned above, it was concluded that porcine enteroviruses isolated in Korea were pathogenic strains which could produce polioencephalomyelitis in pigs. The most severe Jisease was prcduced by the inoculation of both enterovirus and hog cholera vaccine in the 35-day-old pigs at a time when colostral immunity presumably was low. The porcine enterovirus infections seemed to be associated with certain stress factor such as hog cholera vaccine in or immediately following the weanling period.
We investigated the efficacy of single compound of plant extract in coxsackievirus B3 (CVB3) infection. CVB3 is a main cause of Hand-foot-mouth diseases (HFMD) and viral myocarditis in children and adult. Several single compounds of plant extract were purified by HPLC and tested as antiviral drug candidate. Among them, kaempferol was selected to effective anti-enterovirus compound by HeLa cells survival assay. CVB3 infected HeLa cells were treated with kaempferol ($100{\mu}g/ml-100ng/ml$) and their antiviral effect was confirmed. After 16 hours of treatment, HeLa cells were lysed and proteins were extracted for western blot analysis. CVB3 viral capsid protein VP1 production and transcription factor eIF4G-1 cleavage was significantly decreased in $100{\mu}g/ml$ kaempferol treatment. Virus replication was observed by virus RNA amplification. Kaempferol strongly reduced virus positive and negative strand RNA amplification. Moreover, MAPK signal induced by CVB3 infection, pERK and pmTOR, kaempferol treatment significantly inhibited the activity. Plant extract single compound, kaempferol, is a strong candidate to be developed non-toxic anti-enterovirus treatment agent.
Enterovirus is a common cause of several severe diseases such as myocarditis, hand-foot-mouth disease, and meningitis in children and adult. There are many try to develop new antiviral drug for direct treatment in virus infection. However, synthetic chemical antiviral drug is not working. To overcome this limitation, we examined plant extracts. The antiviral effect of plant extracts was screened by HeLa cell survival assay in coxsackievirus B3 (CVB3) infection. We observed a strong antiviral effect of Poria cocos extract in a dose-dependent manner (1 mg/ml~0.01 mg/ml). P. cocos extract (1 mg/ml) treatment was dramatically decreased virus protease 2A induced eIF4G-I cleavage and virus capsid protein VP1 production. CVB3 positive and negative strand RNA amplification were significantly reduced in P. cocos extract treatment. P. cocos extract completely blocked early time activation of ERK and AKT activity in CVB3 infection. Taken together these data indicate that the treatment of P. cocos extract strongly inhibit CVB3 replication. Poria cocos extract may possible to developed as a therapeutic agent for enterovirus.
Kwon Tae Won;Kim Do Kyun;Ye Jeong Sook;Lee Won Joo;Moon Mi Sun;Joo Chul Hyun;Lee Heuiran;Kim Yoo Kyum
Journal of Microbiology
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v.42
no.4
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pp.299-304
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2004
To investigate the presence of infectious agents in human atherosclerotic arterial tissues. Atherosclerotic plaques were removed from 128 patients undergoing carotid endarterectomy or other bypass procedures for occlusive disease, and from twenty normal arterial wall samples, obtained from transplant donors with no history of diabetes, hypertension, smoking, or hyperlipidemia. Using the polymerase chain reaction (PCR) or reverse transcription-PCR, these samples were analyzed for the presence of Chlamydia pneumoniae, cytomegalovirus, enterovirus, adenovirus, herpes simplex viruses types 1 and 2, and Epstein-Barr virus. The amplicons were then sequenced, and phylogenetic analyses were performed. Enteroviral RNA was found in 22 of 128 atherosclerotic vascular lesions $(17.2\%),$ and C. pneumoniae and cytomegalovirus were each found in 2 samples $(1.6\%).$ In contrast, adenovirus, herpes simplex viruses, and Epstein-Barr virus were not identified in any of the atherosclerotic samples. Enterovirus was detected in 6/24 $(25.0\%)$ aortas, 7/33 $(21.2\%)$ carotid arteries, 6/40 $(15.0\%)$ femoral arteries, and 3/31 $(9.7\%)$ radial arteries of patients with chronic renal failure. There were no infectious agents detected in any of the control specimens. Using phylogenetic analysis, the enterovirus isolates were clustered into 3 groups, arranged as echovirus 9 and coxsackieviruses Bl and B3. Enteroviral RNA was detected in $17.2\%$ of atherosclerotic plaques, but was not observed in any of the control specimens. This suggests a connection between enteroviral infection and atherosclerosis. These findings differ from those of other studies, which found more frequent incidence of C. pneumoniae and cytomegalovirus infection in atherosclerotic plaques.
In the course of studying porcine enterovirus infection in piglets, the vascular endothelial cells in the CNS of colostrum-deprived piglets with polioence-phalomyelitis were investigated by electron microscope. The experimental piglets were orally infected with the porcine enterovirus serogroup 3 isolated in Korea and necropsied at 7 days postinoculation. Crystalline arrays of viral particles were found in the vascular endothelial cells of the spinal cord and cerebellum. Aggregates of immature viral particles were occasionally observed in the vascular endothelial cells in the meninges. The rough ER was deprived of ribosomes, irregularly dilated and associated with viral crystals, There were abundant cytoplasmic filaments, dilatation of perivascular space, perivascular cuffing, and the partial distruptions of endothelial cell membrane and basal lamina.
Kim, Eun-Soon;Nam, Jung-Hyun;Kim, Ki-Soon;Yoon, Jae-Deuk;Kim, Yoo-Kyum
The Journal of Korean Society of Virology
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v.27
no.2
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pp.169-176
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1997
In this study, the feasibility of identification and genotypic differentiation of enteroviruses was investigated by using nested reverse transcription-polymerase chain reaction (nested RT-PCR), single-stranded conformation polymorphism (SSCP), and restriction fragment length polymorphism (RFLP) techniques. Two hundred seventy-four clinical samples were assayed by both nested RT-PCR and tube culture method using MRC-5 and MK cells; 58 (86.6%) out of 67 enterovirus culture-positive samples contained enteroviral RNA. In addition, 114 (55.1%) of 207 samples from patients with suspected enteroviral CNS disease with negative viral cultures were positive by the nested RT-PCR. The nested RT-PCR products were genotyped by the SSCP method and the results were compared with serotypes. We could differentiate 6 subtypes, 3 of which are similar to coxsackievirus B3, B5, echovirus 11, plus 3 other subtypes. RFLP cleaved with Sty I, Bgl I, and Xmn I yielded characteristic patterns for each laboratory strains. This study demonstrates the usefulness of the RT-PCR for the rapid diagnosis of enterovirus infection and the potentials of the SSCP method for differentiation of enterovirus strains.
Seo, Soo Young;Jung, In Ah;Kim, Ji Hoon;Cho, Kyung Soon;Bin, Joong Hyun;Kim, Hyun Hee;Lee, Hee Jin;Lee, Wonbae
Pediatric Infection and Vaccine
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v.19
no.1
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pp.28-36
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2012
Purpose : This study was conducted to evaluate epidemiological data of the viral pathogens obtained from stool exams and provide information on the regional prevalence of infectious diarrheal disease west in Gyeonggi Province, Korea. Methods : We enrolled a cohort of children <10 years of age admitted for treatment of acute diarrhea at Bucheon St. Mary's Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea. In total, 310 fecal specimens, documented to be free of common bacterial pathogens, were collected from pediatric patients during a 12-month period from January to December 2009 and were tested for the presence of rotavirus, parechovirus, adenovirus, astrovirus, enterovirus, and norovirus using polymerase chain reaction (PCR) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) assay. Results : The most common virus was parechovirus (16%), followed by adenovirus (15%), astrovirus (14%), rotavirus (13%), and enterovirus (5%). Interestingly, only one of the specimens was positive for norovirus. Single infection cases were detected in 173 (55.8%) of the 310 children, whereas mixed viral infections were detected in 10 (3.2%) of the same children. Viral gastroenteritis generally showed a double peak of incidence. Parechovirus, rotavirus, and adenovirus shared a similar pattern of peak incidence with overall viruses; however, astrovirus infections occurred more frequently in the spring. Eighty-five percent of the confirmed viral gastroenteritis cases developed in under 24 months. Conclusion : The results support the importance of parechovirus, adenovirus, astrovirus, and enterovirus as causative agents of diarrhea in children, which may be underestimated by current routine diagnostic testing.
Membrane-associated guanylate kinase inverted-3 (MAGI-3) is a member of the family of membrane-associated guanylate kinases (MAGUKs). MAGI-3 modulates the kinase activity of protein kinase B (PKB)/AKT through interactions with phosphatase and tensin homolog (PTEN)/MMAC. Coxsackievirus B3 (CVB3) is a common causative agent of acute myocarditis and chronic dilated cardiomyopathy. Activation of AKT and extracellular signal-regulated kinases 1/2 (ERK1/2) is essential for CVB3 replication, but the relation between MAGI-3 signaling and CVB3 replication is not well understood. This study investigated the role of MAGI-3 in CVB3 infection and replication. MAGI-3 was overexpressed in HeLa cells by polyethylenimine (PEI) transfection. To optimize the transfection conditions, different ratios of plasmid DNA to PEI concentrations were used. MAGI-3 and empty plasmid DNA were transfected into the HeLa cells. MAGI-3 overexpression alone was not sufficient to efficiently activate AKT. However, expression of the CVB3 capsid protein VP1 dramatically increased in the HeLa cells overexpressing MAGI-3 24 h after CVB3 infection. In addition, the activities of AKT and ERK were significantly induced in the CVB3-infected MAGI-3 cells overexpressing HeLa. These results demonstrate that MAGI-3 expression upregulates CVB3 replication through AKT and ERK signaling activation. MAGI-3 may be an important target to control CVB3 replication.
Enterovirus 감염증시(感染症時) dexamethasone이 미치는 영향(影響)을 알아보기 위하여 초유(初乳)를 먹지 않은 1일령(日齡) 자돈(仔豚) enterovirus를 경구감염(經口感染)시키고 dexamethasone을 근육주사(筋肉注射)한 후 임상(臨床) 및 병리조직학적(病理組織學的)으로 관찰(觀察)하였던 바 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 임상적(臨床的)으로는 dexamethasone을 투여(投與)한 자돈(仔豚)에서 감염후(感染後) 3일(日)째 체온(體溫)의 상승(上昇), 4일(日)째 보행실조(步行失調) 그리고 8일(日)째 횡와(橫臥)한 반면(反面) enterovirus만을 감염(感染)시킨 대조군(對照群)은 감염후(感染後) 7일(日)째 체온(體溫)의 상승(上昇), 14일(日)째 보행실조(步行失調)가 확인(認定)되었다. 병리조직학적(病理組織學的) 소견(所見)으로는 중추신경계(中樞神經系) 전반(全般)에 걸쳐 수막하(髓膜下) 원형세포(圓形細胞)의 침윤(侵潤), 혈관주위(血管周圍) 원형세포(圓形細胞)의 침윤(侵潤), 미만성(彌漫性) 또는 한국성(限局性) gliosis, 신경세포(神經細胞)의 퇴행성(退行性) 변화(變化)가 관찰(觀察)되었고, 특히 대뇌(大腦) 제(第)3뇌실부(腦室部)와 중뇌수도(中腦水道), 제(第)4뇌실(腦室) 및 척수(脊髓)의 중심관(中心管) 주변부(周邊部)에서 glia 세포(細胞)의 침윤(侵潤)이 현저(顯著)하였으며, 병변(病變)의 정도(程度)는 enterovirus만을 감염(感染)시킨 대조군(對照群)에 비해 dexamethasone을 투여(投與)한 자돈(仔豚)에서 훨씬 심하게 나타난 점으로 보아 dexamethasone 투여(投與)는 자돈(仔豚)의 enterovirus 감염증(感染症)을 촉진(促進)시킬 수 있는 한 유인(誘因)으로 간주(看做)된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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