• 한국가금학회지
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• 제41권1호
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• pp.15-20
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• 2014

본 연구는 가금에서 호흡기 질환, 심낭수종, 봉입체 간염, 산란저하증 등을 유발하는 가금 아데노바이러스의 fiber 2 유전자에 대한 특이 난황 항체를 개발하고자 실험을 실시하였다. Fiber 2 유전자를 클로닝한 뒤, 대장균 발현 시스템을 이용하여 약 22 kDa의 재조합 fiber 2 단백질을 생산하였다. 이를 산란계에 3주 간격으로 총 4회 면역하여 혈청 및 난황 내 항체가를 측정한 결과, 면역 후 12주경에 항체가가 최고치에 달하였으며, 산란계로부터 획득한 난황 항체를 이용한 Western blot analysis 결과, 가금 아데노바이러스 내 fiber 2 단백과 특이적으로 반응한다는 것을 규명하였다. 결론적으로, 가금 아데노바이러스 fiber 2에 특이적인 난황 항체 생산에 성공하였으며, 이러한 특이적인 난황 항체는 가금 아데노바이러스로 인한 질병의 예방 및 치료에 활용 가능할 것으로 사료된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제19권11호
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• pp.1665-1670
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• 2006

The objective of this research was to provide the characterization and method for producing anti-E. coli O157:H7 antibodies in egg-laying hens and to determine if the antibody can restrain the proliferation of E. coli O157:H7 in-vitro. Selected antigenic fractions (whole cell, outer membrane protein and lipopolysaccharide (LPS)) from E. coli O157:H7 were injected to hens in order to produce anti-E. coli O157:H7 antibodies. The immune response and the egg yolk antibodies of laying hens against the whole cell, outer membrane protein and LPS antigens were monitored by ELISA. The level of antibodies against whole cell antigen monitored through ELISA sharply increased after the initial immunization, and it was found to be maximum on day 49 however, the level was maintained up to day 70. Antibodies (5 mg/ml) directed against the whole cell inhibited E. coli proliferation 10-13 times more than outer membrane protein or LPS. The antibody response against the whole cell antigens appeared to have higher activity in restraining the proliferation of E. coli O157:H7 than antibody against outer membrane protein or LPS. Results reflected that increasing the IgY's in the egg yolk could prevent greater economic losses due to human and animal health from pathogenic bacteria i.e. E. coli O157:H7.

• 한국식품과학회지
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• 제30권5호
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• pp.1029-1034
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• 1998

충치유발균인 Streptococcus mutans (혈청형 C)를 면역한 산란계의 난황에서 항체를 분리하고 그 특성을 조사하였다. 먼저 난황으로 부터 항체의 추출효율을 검토하였을 때, ${\lambda}-carrageenan$, $gammaYolk^{TM}$, $EGGstract^{TM}$의 방법으로 얻은 추출물 중 항체의 순도는 전기영동에서 각각 20, 46, 48%로 나타났으며, 난황 1 g에서 얻은 항체의 수율은 각각 11.3, 1.7, 1.8 mg이었다. 정량면역침강반응의 결과, ${\lambda}-carrageenan$방법으로 얻은 조난황 항체 중 특이항체의 비율은 12.2%이었다. 이로부터 계란 하나분인 15 g의 난황에서 얻은0.85 g의 조난황 항체에는 특이항체가 100 mg가량 함유되어 있음을 알 수 있었다. 세 종류 충치유발균주(혈청형 b, c, f)에 대한 특이항체의 반응성을 조사하였을 때, 설탕 첨가배지에서 배양한 균주는 C(+), f(+), b(+)의 순으로 48%이상의 높은 반응성을 나타내었으나 무설탕 배지에서 배양한 균주의 반응성은 각각 이보다 낮게 나타났다. 조난황 항체의 열 및 pH안정성은 양호하여, $70^{\circ}C$까지 50%이상의 활성을 유지하였고 $pH\;4{\sim}8$에서 대체로 안정하였다.

• 한국축산식품학회지
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• 제24권2호
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• pp.182-188
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• 2004

Lactoperoxidase(LPO)를 농도를 측정하기 위한 ELISA을 개발하기 위해 LPO로 면역시킨 갈색 산란계의 계란에서 형성된 anti-LPO IgY 항체를 분리 정제하고, 분리된 anti-LPO IgY 항체의 특이성을 ELISA 와 double immunodiffusion 방법으로 조사한 후 indirect ELISA 방법을 이용한 표준곡선을 만들었다. 분리 정제된 anti-LPO IgY항체의 titer는 1:520,000이며, ELISA와 double immunodiffusion 방법 모두에서 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin, casein 및 lysozyme하고는 교차반응을 하지 않고 LPO만 높은 특이성을 갖는 항체로 나타났다. Indirect ELISA방법에서 LPO의 coating 농도는 0.25 $\mu\textrm{g}$/mL이며 anti-LPO IgY 최적 희석배수는 1:8,000으로 나타났다. Indirect ELISA 방법으로 LPO를 측정할 수 있는 표준곡선에서 민감도의 범위는 0.0l-l $\mu\textrm{g}$/mL로 나타났다.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2003년도 국제 심포지움
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• pp.37-54
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• 2003

포유동물과 마찬가지로 암탉은 태어날 병아리에게 계란을 통해서 면역항체를 이행시켜 해로운 병원균의 침입으로부터 병아리를 보호해준다 . 즉 어미 닭의 혈청으로부터 특정항체가 난황에 이행되고 이 면역항체를 IgY 라고 부르며 이것이 발육중인 태아와 갓 부화한 병아리의 면역항체가 되는 것이다. 상대적으로 면역능력이 낮은 갓 부화한 병아리는 병원균에 대한 방어능력을 계란을 통해 어미로부터 받은 항체를 통해 얻는다. 그 결과, 난황 내에는 많은 양의 IgY를 보유하게 되고 이 면역물질이 있으므로 말미암아 계란 내에 들어와 있는 병원균이냐 외부에서 들어오려는 병원균을 무력화시켜 아무 탈없이 병아리가 부화하게 된다 . 이처럼 산란계에 각종 병원균을 접종함으로서 면역항체 IgY 가 많이 들어 있는 계란을 생산할 수 있다. 난황 1 개에는 136~340 mg 의 IgY 가 들어있고 이는 난황 $m\ell$ 당 8~20 mg의 IgY 가 함유되어 있는 셈이다. 그리고 산란계 한 마리로부터 일년에 30 g 이상의 IgY 를 얻을 수 있다. 산란계에 항원을 접종하여 난황으로부터 IgY 를 수확하면 IgY g 당 10＄ 도 안 되는 낮은 비용으로 항체를 얻을 수 있게 된다. 이에 비하여 포유동물의 경우 19 의 IgG 를 얻는데 20,000＄가 소요된다. 이와 같은 IgY 제조기술을 의학, 공중 보건, 수의학, 식품안전과 같은 분야에 응용을 함으로써 잠재력이 높은 새로운 시장을 여는 장이 될 것이다. IgY 기술을 더욱 폭넓게 활용할 수 있는 분야들로는 생물제제나 의학진단기구, 생리적 기능성 물질이나 기능성식품의 개발, 질병예방을 위한 경구투여제 그리고 질병감염을 막는 특정 병원균성 항미생물 제제와 같은 것들을 들 수 있다. 이 논문에서 우리가 강조하고자 하는 것은 IgY 가 함유된 계란을 생산하고 섭취하였을 때 특정항체들의 결합을 통해 병원성 미생물의 성장이나 군체를 형성하는 것을 무력화시켜 결과적으로 병원균을 감소시키거나 억제시킨다는 점이다. 오늘날 약물에 내성을 지닌 박테리아의 출현으로 질병감염을 막는데 항생제의 사용효과가 점차 감소하고 있기 때문에 이러한 항생제를 대체할 수 있는 방안으로 계란항체를 이용할 수 있다.

• 한국축산식품학회지
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• 제32권6호
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• pp.706-712
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• 2012

The present study was aimed to produce a chicken polyclonal antibody against Cronobacter muytjensii and to develop an immunoassay for its detection. Purification of anti-C. muytjensii IgY from egg yolk was accomplished using various methods such as water dilution and salt precipitation. As a result, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis produced two bands around 30 and 66 kDa, corresponding to a light and a heavy chain, respectively. Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (IC-ELISA) was performed to determine the effectiveness of the chicken IgY against C. muytjensii. The optimum conditions for detecting C. muytjensii by indirect ELISA and checkerboard titration of the antigen revealed an optimum average absorbance at the concentration of 18 ${\mu}g/mL$, having ca. $10^8$ coated cells per well. The anti-C. muytjensii IgY antibody had high specificity for C. muytjensii and low cross-reactivity with other tested pathogens. In this assay, no cross-reactivity was observed with the other genera of pathogenic bacteria including Escherichia coli O157:H7, Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Enterobacter aerogenes, Salmonella Enteritidis and Listeria monocytogenes. In addition, detection of C. muytjensii in infant formula powder showed a low matrix effect on the detection curve of IC-ELISA for C. muytjensii, with similar detection limit of $10^5$ CFU/mL as shown in standard curve. These findings demonstrate that the developed method is able to detect C. muytjensii in infant formula powder. Due to the stable antibody supply without sacrificing animals, this IgY can have wide applications for the rapid and accurate detection of C. muytjensii in dairy foods samples.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제50권5호
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• pp.866-873
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• 2012

난황에 포함된 IgY는 포유동물에 있는 바이러스나 항원에 반응하는 항체와 같은 역할을 한다. 난황을 전처리한 후 3-zone와 4-zone SMB를 이용하여 지질단백질들로 부터 IgY를 분리하는 전산모사연구를 수행하였다. 회분식 크로마토그래피에서 전산모사 매개변수와 흡착 등온식 SMB 전산모사 변수를 얻었다. Aspen simulator를 이용하여 전산모사를 수행하여 IgY를 분리할 수 있는 3-zone과 4-zone SMB 운전조건을 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. IgY와 다른 단백질의 농도와 순도를 모두 고려할 때, 꼭지점인 좌표($m_2$, $m_3$=0.1, 1.1)에서 3-zone SMB가 최적의 조건으로 생각된다. IgY 만을 고려하면 4-zone SMB가 좌표($m_2$, $m_3$=0.06, 0.5)에서 가장 높게 IgY를 분리할 수 있었다. recycle이 없는 3-zone SMB는 꼭지점 좌표에서 좌표이동이 extract의 지질 단백질 농도에 큰 영향을 주었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권4호
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• pp.527-533
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• 2013

Polyclonal antibodies labeled with a tracer have been commonly used as secondary antibodies in immunochemical assays to quantify the concentration of antibody-antigen complexes. The majority of these antibodies conjugated with a tracer are commercially available, with the exception of few untouched targets. This study focused on the production and application of mouse anti-quail IgY as an intermediate antibody to link between quail egg yolk IgY and goat anti-mouse IgG-HRP as primary and secondary antibodies, respectively. Subsequently, the produced mouse anti-quail IgY was labeled with horseradish peroxidase (HRP) and its efficiency on enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was compared with that of commercial rabbit anti-chicken IgY-HRP. As an intermediate antibody, mouse anti-quail IgY was successfully produced with good affinity and sensitivity (1:10,000) to the primary and secondary antibodies. Subsequently, mouse anti-quail IgY was effectively conjugated with HRP enzyme, resulting in a secondary antibody with good sensitivity (1:10,000) to quail anti-V. parahaemolyticus and V. vulnificus IgY. The detection limit was $10^5$ CFU/ml for both V. parahaemolyticus and V. vulnificus. The efficiency of the produced conjugate to detect quail IgY on ELISA was comparable to that of the commercial rabbit anti-chicken IgY-HRP, and hence the produced and labeled mouse anti-quail IgY-HRP can be used as a secondary antibody to detect any antibody produced in quail.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제50권3호
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• pp.430-435
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• 2022

The infectious bursal disease (IBD) is a highly contagious and acute poultry disease caused by Birnavirus. However, the vaccination is the only disease prevention, but several factors impeded vaccine development. Thus, a need for time to develop a novel technique for managing and treating respiratory diseases in poultry birds. Passive immunization is a hope and a possible alternative used in birds to meet this need. The current research attempted to produce egg yolk-based polyclonal antibodies against the IBD virus. The benefits of IgY include ease of extraction, lack of reaction with mammalian Fc receptors, and low production cost. Commercial layers were immunized with inactivated IBD virus subcutaneously according to the treatment regimen. The eggs were gathered daily, and yolk antibodies were extracted with the ammonium sulfate precipitation technique. The use of an indirect hemagglutination test demonstrated that IgY was IBD-specific. Until the end of the experiment, the specific IgY immunoglobulins did not lose activity when stored at 4℃. The specific immunoglobulin (IgY) treated challenged birds were demonstrated 92% recovery in comparison to the control group. The study implies that the IBDV specific IgY is an easily prepared and rich source of antibodies and offers an alternative therapeutic agent to cure IBD-infected birds.

• 대한수의학회지
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• 제36권4호
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• pp.895-902
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• 1996

산란계에 불활화 개 파보바이러스 백신을 근육내로 1주 간격으로 4회 접종하여 면역화시키고 최종 접종 2주후에 채란하여 $4^{\circ}C$에 보관하며 사용하였다. 난황항체는 5% HPMCP를 이용하여 분리하였고 0.5% HPMCP 용액은 lipid 침전에 매우 효과적이었으며 희석배수 10배에서 투명한 상층액을 나타내었다. 1차분리한 상층액의 단백질 농도는 2.5mg/ml이었고 최종 단백질 용액의 경우는 26.53mg/ml이었다. SDS-PAGE 전기영동상에서 분자량 60~70 KD 및 30~40 KD의 2 band가 나타났으며 non-reducing 전기영동에서는 닭 혈청 IgG와 같은 120~160 KD의 분자량을 보인 band가 각각의 분리용액에서 나타났다. 난황 항체의 개 파보바이러스에 대한 혈구응집억제반응 항체역가는 혈청의 역가에 비해 1주의 차이를 주며 증가했으며 난황 항체는 1:640에서 1:2560, 혈청은 1:640에서 1:5120을 나타내었다.